骨碎补对人牙龈成纤维细胞增殖分化的影响

目的 探讨中药骨碎补对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖分化的影响.方法 将体外培养的人牙龈成纤维细胞与10×103、50×102、100×103、500×103与1000×10μg/mL浓度骨碎补共孵育后,测定碱性磷酸酶活性,将最佳浓度骨碎补作用于培养细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果 在骨碎补各浓度范围内,实验组的OD值均高于对照组(P<0.05),且浓度为100 μg/mL时其碱性磷酸酶活性最高,G1期细胞减少,S期和G2M期细胞增多,增殖指数值高于对照组(P<0.05).结论 骨碎补在一定浓度范围内,使体外培养的人牙龈成纤维细胞的碱性磷酸酶活性增强,更多的细胞进入增殖状态.     

大鼠肺成纤维细胞的体外培养及急性炎症模型的建立

目的:探讨大鼠肺成纤维细胞体外培养及急性炎症模型建立的方法.方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞,然后采用H-DMEM培养液进行细胞培养.采用免疫荧光法对所分离的细胞进行鉴定.采用脂多糖(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,实验分组:空白组、0.1 μg/mL LPS组、1μg/mL LPS组、10 μg/mL LPS组,并利用细胞增殖/毒性检测试剂(MTT)在干预后3、6、9 h分别测定吸光度(OD)值.结果:成纤维细胞体外培养24 h后,镜下可见组织块周边有长梭型细胞爬出,72 h后生长迅速,4d接近融合.经免疫荧光测定,肺成纤维细胞波形蛋白(vimentin)阳性,CD31阴性.在干预后各时间段中,1 μg/mL LPS组测得的OD值高于其他各组,在1μg/mL LPS组中,干预后6h测得的OD值高于其他各时间段,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:该法可以体外培养出大鼠肺成纤维细胞,用浓度为1 μg/mL的LPS干预体外培养的成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.     

糖基化终末产物对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌及P65表达的影响

目的:研究糖基化终末产物(AGEs)对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌的影响及其可能的机制。方法:用体外酶消化结合组织块法培养人牙龈成纤维细胞;将细胞分为对照组和实验组,对照组为正常培养液培养的人牙龈成纤维细胞;实验组为含AGEs终浓度分别为1、5、10、20μL/mL培养液培养的人牙龈成纤维细胞;Real time PCR检测炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α、NF-κB信号通路关键分子P65mRNA的表达情况。结果:酶消化加组织块法培养出来的牙龈成纤维细胞大多呈长梭形,胞液丰满;Real time PCR检测结果表明,与对照组相比,不同浓度AGEs刺激下的牙龈成纤维细胞IL-6表达量均升高,5、10、20μL/mL浓度AGEs刺激下TNF-α、P65的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖基化终末产物可以导致牙龈成纤维细胞炎症因子的表达升高,其机制可能是通过激活NF-κB信号通路,从而影响了糖尿病患者的牙龈健康。     

硝苯地平对牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:探讨硝苯地平对人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响.方法:用含浓度为108、360、1 200 μg/L硝苯地平的DMEM液作用体外原代培养人牙龈成纤维细胞;酶联免疫吸附试验检测细胞Ⅰ型胶原表达水平;细胞计数观察细胞增殖.结果:Ⅰ型胶原合成检测和细胞增殖试验的结果都显示在第5天,高浓度1 200 μg/L、360 μg/L组与低浓度108 μg/L之间存在显著性差异.结论:高浓度硝苯地平有促进人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成和细胞增殖的作用.     

高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响.方法 体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40 mmol/L)培养48 h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2) mRNA的表达.以加入含25 mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组.结果 随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01).RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05).结论 高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少.     

磁力矫治器模拟静磁场对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究磁力矫治器产生静磁场对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响.方法将传代培养的人牙周膜成纤维细胞,实验组加载磁场强度971.77 mT的静磁场,对照组无处理.培养60、84 h,倒置显微镜观察细胞形态变化并用MTT法测定各组的光吸收值(OD值).结果培养60 h和84 h后实验组人牙周膜成纤维细胞的OD值明显高于对照组[(0.860±0.047)比(0.580±0.021),(1.530±0.073)比(0.960±0.084)](P<0.05).结论在临床磁力矫治器正畸治疗中,表面磁场强度971.77 mT的永磁体所产生的静磁场有促进牙周膜成纤维细胞增值的作用,且安全可靠.     

高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响.方法 体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40 mmol/L)培养48 h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2) mRNA的表达.以加入含25 mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组.结果 随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01).RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05).结论 高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少.     

静磁场对人牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性的影响

目的 研究不同磁路设计的磁性附着体所产生静磁场对人牙龈成纤维细胞酶学的作用.方法 使用自主设计的磁场加载系统,产生不同强度的静磁场,对体外培养的人牙龈成纤维细胞进行不同时间的磁场加载.通过与对照组的比较,探讨磁场对该类细胞超氧化物歧化酶活性的影响.结果 改变加载强度(120 mT、10 mT、0 mT)或加载时间(1、3、5个加载周期),静磁场对人牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性的影响差异均无统计学意义.结论 本试验条件下,开放及闭合磁路系统磁性附着体所产生静磁场,对牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性没有影响.     

人颊黏膜成纤维细胞的原代培养及白屈菜红碱对其生长抑制的影响

目的 通过观察白屈菜红碱(chelerythrine,CHE)对原代培养的人颊黏膜成纤维细胞(human buccal mucosa fibroblasts,HBMFs)生长的影响,筛选出CHE对HBMFs生长的抑制时间和浓度.方法 以人体颊黏膜组织块进行HBMFs的原代培养并进行分离纯化及鉴定.以CHE作为干预条件,MTT法测定不同浓度CHE作用于离体HBMFs 24、48、72h后的OD值.根据吸光度值的大小判断细胞的生长抑制情况.结果 成功培养并分离纯化鉴定了HBMFs.CHE作用24h后,除392μg/mL组OD值较对照组明显降低外(P<0.05),其余组均未见明显抑制作用;作用48h后,392μg/mL组的OD值为0.095±0.005,196μg/mL组的OD值为0.102±0.006,较对照组明显降低(P<0.05);作用72h后,除49.0μg/mL组与24.5μg/mL组OD值与对照组相比差异无统计学意义外,其余各组差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功培养并分离纯化鉴定了HBMFs,筛选出了能够抑制HBMFs生长的不同时间和浓度.     

壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性研究

目的 了解壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性作用,为其治疗牙周病提供依据.方法 人牙龈成纤维细胞在不同浓度的壳聚糖温敏凝胶中体外培养24h、48h、72h、96h.用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别.结果 各组细胞不同时间点相对增殖率均在96%～144%之间,各浓度的壳聚糖水凝胶材料浸提液的细胞毒性均为0级或1级,完全符合生物材料的安全评价标准.结论 壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞无毒性,用于牙周病局部治疗具有进一步的研究价值.     

FGF-2对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响

目的:观察不同浓度成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖的影响.方法:以体外培养的人肺腺癌细胞株A549为研究对象,采用MTT比色法测定不同浓度(0,12.5,25,50,75,100 ng/mL)的FGF-2对A549细胞增殖活性的影响.结果:与对照组相比,不同浓度的FGF-2处理组细胞的OD值、增殖比均明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).FGF-2浓度为75 ng/mL时细胞增殖比最高,为对照组的183％.结论:FGF-2促进A549细胞增殖,FGF-2对肺腺癌的发生发展具有重要作用.     

透明质酸酶对眼眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的影响

目的 探讨透明质酸酶对人眼眶成纤维细胞增殖以及分泌透明质酸的影响,为透明质酸酶用于甲状腺相关眼病患者的治疗提供实验依据.方法 取健康意外死亡者眼眶脂肪组织行眼眶成纤维细胞培养,用不同浓度透明质酸酶(0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL)分别处理细胞,在不同时间点(24 h、48 h、72 h)观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;ELISA法检测透明质酸含量.结果 体外成功培养人眼眶成纤维细胞;各浓度透明质酸酶作用眼眶成纤维细胞后细胞形态密度未见明显差别;MTT测得A值在各时间点上的差异无统计学意义(P值均＞0.05);各浓度实验组分别与在同一时间点的正常对照组相比差异无统计学意义(P0.05);各浓度透明质酸酶组均较空白对照组透明质酸含量减少,随浓度升高透明质酸含量降低,随时间变化实验组与对照组透明质酸含量差值增加.各浓度组在3个时间点分解透明质酸量与空白对照组差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 通过获取人眼眶脂肪结缔组织进行组织块法成功培养、传代获得纯化眼眶成纤维细胞;实验设定浓度范围的透明质酸酶对眼眶成纤维细胞的增殖无明显影响;眼眶成纤维细胞能分泌透明质酸,不同浓度透明质酸酶均对其有分解作用,且呈剂量和时间依赖性.     

仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）为研究对象,采用四氮唑盐（MTT）比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响（以OD值反映细胞活性）,采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在一定浓度范围内（0.0625～0.5mg/mL）,仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖,同时促进PCNA蛋白的表达,并随着仙人掌浓度的增加,成纤维细胞数量和PCNA蛋白的表达均不断增加,在0.5mg/mL浓度时达到高峰,呈现明显的剂量-效应关系（r分别为0.761,0.783;P均＆lt;0.01）。结论：在一定浓度范围内,仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用,并表现为明显的量-效关系。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨灯盏花素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾皮质RAGE表达水平的影响。方法雄性SD大鼠27只,随机分为3组。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,糖尿病灯盏花素治疗组(DD组)每日给予灯盏花素[20mg/(kg.d)]灌胃,8周后取肾脏组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA的表达水平,与正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)比较。结果成模8周时,糖尿病大鼠的体重、血糖与正常组相比有显著性差异(P<0.01),DD组与D组的血糖及体重无显著性差异(P>0.05);DD组、D组和C组的RAGE OD值/β-actin OD值分别为0.452±0.208,0.769±0.104,0.218±0.032,各组间RAGE表达有显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。灯盏花素能下调肾皮质RAGE的表达水平,对糖尿病肾病具有一定治疗作用。     

三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长影响研究

目的 探讨积雪草甙、苦参碱、川芎嗪等中药有效成分对皮肤瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩成纤雏细胞，分别加入不同浓度的积雪草甙、苦参碱、川芎嗪。通过倒置显微镜观察、MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶检测等方法分别观测三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果 与空白对照组相比，实验组中加入积雪草甙0.5mg/ml、苦参碱1．0mg/ml、川芎嗪1．9mg/ml后成纤维细胞数量均明显减少；OD值降低（P〈0．05）；当积雪草甙浓度高于5mg/ml时乳酸脱氢酶含量超出正常范围。结论 有效浓度下，三种中药有效成分均能抑制皮肤瘢痕成纤维细胞生长，其作用强度积雪草甙〉苦参碱〉川芎嗪。     

人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的：分离培养人牙龈成纤维细胞,为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件。方法：用组织块法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。结果：牙龈成纤维细胞原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或星形,免疫学鉴定抗波形丝蛋白抗体阳性,抗角蛋白抗体阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。结论：组织块法培养的细胞符合牙龈成纤维细胞的形态学和免疫学特征,可作为体外细胞模型,为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。     

义齿抗菌性能的研究现状

目的 通过载银纳米二氧化钛义齿基托材料体外细胞毒性的测定,初步评价载银纳米二氧化钛的生物安全性.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测载银纳米二氧化钛义齿基托材料(载银纳米二氧化钛浓度30 g/L)100%、50%浸提液培养小鼠成纤维细胞L-929细胞2、4、7 d后吸光度值(OD值),并计算细胞相对增殖率,以6级毒性分类法评级,采用单因素方差分析法对各实验组及对照组的OD值进行统计学分析,显微镜观察细胞的生长状况.结果 实验组各观察期L-929细胞生长良好,形态正常;载银纳米二氧化钛抗菌剂(<30 g/L)的义齿基托的细胞毒级别为0级.结论 载银纳米二氧化钛抗菌剂的义齿基托无细胞毒性.     

参附注射液对胆汁环境中成纤维细胞的影响

目的 探讨在胆汁环境中参附注射液对成纤维细胞的影响,以判断在此环境中成纤维细胞的增殖是否能被参附注射液抑制,从而减轻胆道瘢痕性狭窄.方法 通过建立体外胆汁环境中成纤维细胞生长模型,运用参附注射液干预.设计分为空白组、胆汁组、实验组,实验组又分为5个浓度梯度亚组.运用MTT法测定各组中成纤维细胞OD值,用SPSS20.0统计软件处理,分析参附注射液是否能抑制成纤维细胞的形成.结果 成纤维细胞OD值随参附注射液含量及干预时间的增加逐渐减小(P＜0.05),差异具有统计学意义.说明在胆汁环境中成纤维细胞的增殖能被参附注射液抑制.结论 参附注射液对胆汁环境中成纤维细胞的增殖有抑制作用.     

IL-1β对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的免疫组化研究

目的 :了解牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibroblast,HGF)、牙周膜细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)上细胞间粘附分子 1(intercellularadhesionmolecule- 1,ICAM - 1)的表达以及白细胞介素 - 1β(interleukin -1β ,IL - 1β)作用后ICAM - 1的表达。 方法 :取正畸拔牙 ,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞 ,检测其未受和受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达情况 ,图像分析结果。结果 :正常牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞上ICAM - 1表达阴性或弱阳性 ,IL - 1β作用后 ,ICAM - 1表达强阳性 ,和对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论 :牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达增强 ,提示ICAM - 1参与牙周炎的病理过程。     

Experimental study of recombinant adenovirus co-expressing osteoprotegerin and basic fibroblast growth factor on the repair of alveolar bone defects

目的 以含有骨保护素(OPG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的共表达重组腺病毒感染牙龈及牙周膜成纤维细胞,观察OPG与bFGF表达的情况;以重组腺病毒结合胶原膜置入犬牙槽骨缺损处,观察其对牙槽骨缺损修复的影响.方法 培养牙龈及牙周膜成纤维细胞,感染重组腺病毒,运用Western blot、RT-PCR分别检测2种细胞中OPG及bFGF的表达,并以正常培养的牙龈及牙周膜成纤维细胞作为对照组.制造犬下颌前磨牙根分叉处牙槽骨缺损模型,右侧作为空白对照组(n=2)和材料对照组(n=4),左侧作为实验组(n=6),光镜观察骨缺损处牙槽骨新生情况,免疫组织化学方法检测OPG和bFGF在犬牙周组织中的表达.结果 细胞培养结果显示,感染重组腺病毒的牙龈和牙周膜成纤维细胞,OPG 及bFGF的表达在蛋白和基因水平上均明显高于正常对照组;动物实验结果显示,实验组骨缺损处有多量新生牙槽骨生长,其OPG和bFGF较材料对照组和空白对照组均有较强的表达.结论 OPG和bFGF共表达的重组腺病毒可提高牙龈及牙周膜成纤维细胞OPG和bFGF的表达,对牙槽骨缺损修复起促进作用.