微生物检定法用于抗癌药物—单克隆抗体交联物药物活性测定的评价

多种抗肿瘤抗生素包括MMC、ADM、BLM、DAC、NCS等已广泛用于肿瘤抗体导向化疗研究,微生物抑菌效价方法常用来测定药物与抗体交联物中药物的活性。文献资料显示交联物抗菌活性仅保留2.45至50％,此与细胞毒实验结果存在明显的不一致。本实验对MMC与抗胃癌McAb 3H11交联物3H11-HSA—MMC体外细胞毒作用及抗菌活性进行了研究,交联物对胃癌靶细胞杀伤作用较游离MMC提高5倍,而抑菌活性仅保留6％,用Pronase E处理交联物后其抑菌活性基本恢复到接近游离MMC的水平。提示传统的微生物检定法不能真实地反映药物与抗体交联物药物活性,其活性测定应直接采用细胞毒实验。     

肝癌单克隆抗体HAb18-氨甲喋呤结合物的制备及其细胞毒作用的研究

本文报道肝癌单抗HAb18与氨甲喋呤结合物的制备方法及其选择性细胞毒作用。结果表明,在交联过程中,抗体与药物活性均较好保存,交联物对人肝癌靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。     

抗癌抗生素C_(1027)与单克隆抗体偶联物抗胃癌作用的实验研究

抗癌抗生素C1027对体外培养的癌细胞有很强的杀伤作用,比常用的抗肿瘤药物如阿霉素等强10000倍以上,是一种新型高效“弹头”药物。我们用抗人胃癌单克隆抗体3H11与C1027交联,制成3H11-C1027偶联物。经检测该偶联物中3H11与C1027的分子比为1∶1.5。细胞ELISA结果表明。偶联物中3H11抗体活性保存良好,与游离3H11活性相似。克隆形成测定结果显示,     

胃癌单抗MGb2-天花粉蛋白交联物的杀伤机理探讨

天花粉毒蛋白(TCS)作为一种免疫毒素的新型效应分子近年来已用于肿瘤的导向治疗研究,并显露出可喜的苗头。但迄今为止有关TCS免疫毒素的靶细胞杀伤机理研究仍缺乏报道。本研究将TCS交联至胃癌单抗MGb2分子上,制得胃癌特异性免疫TCS(I-TCS),然后以临床胃癌实体瘤细胞为靶细胞,对I-TCS的内化及其所致的靶细胞死亡模式等涉猎I-TCS杀伤机理方面的基本问题进行了探讨,同时观察了ras癌基因的表达与I-TCS杀伤效果之间的关系。     

胃癌单抗-RTA结合物的制备及其细胞毒特性研究

本文报道鼠抗人胃癌单克隆抗体-蓖麻毒素A链结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用。抗体与3-(2-吡啶二巯基)丙酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)反应引入2-吡啶二硫化物,然后与巯基暴露的A链反应,得到抗体-A链结合物。ELISA结果表明,抗体与毒素A链连接是成功的,结合物中抗体保存较好的与靶细胞结合活性。结合物对靶细胞具有较强的选择性杀伤作用,在1×10~(-9)M水平,对人胃癌细胞KATO Ⅲ蛋白质合成抑制率为71％,而对非靶细胞作用很弱。结果表明,该单抗具有较好毒素A链导向作用。     

应用新型交联技术制备胃癌单抗—丝裂霉素C结合物

建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段。首先制备丝裂霉素Ｃ活性酯，后者与引入了碘乙酰基团葡聚糖胺反应，得到碘乙酰葡聚糖胺－药物。继而用此物与在Ｆｃ段引入了－ＳＨ的胃癌单抗ＭＧｂ２作用将药物引入抗体Ｆｃ段。获得的免疫结合物抗体结合活性保存９０％以上，在体外对肿瘤靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。在体内，免疫结合物能显著抑制人胃癌移植癌的生长，以ＭＧｂ２（     

抗人肝癌导向药物的制备及其分析

本文报道了肝癌单克隆抗体Ａ２４－表阿霉素结合物的制备及其对肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的体外杀伤作用。先用高碘酸钠把葡聚糖氧化成多醛基葡聚糖，再以此为中介体连接单抗与表阿霉素。结合物中抗体与药物摩尔比为１：４０。单抗活性保存良好。该结合物对肝癌细胞的毒性显著高于游离药物及无关抗体结合物，而对非靶细胞的毒性则明显低于游离药物。说明结合物对肝癌细胞有较强的选择性杀伤作用，有可能用于肝癌导向治疗。     

胃癌单抗与柔红霉素和氨甲喋呤交联物的制备及其细胞毒作用

采用葡聚糖氧化将胃癌单抗(McAb)与抗癌药物柔红霉素(DNR)和氨甲喋呤(MTX)同时交联(McAb-PAD<分别采用噻唑蓝活细胞染色法(MTT 法)及~3H-TR 掺入法检测交联物的细胞毒作用,结果表明两种检测方法敏感性无明显差异,并且证实文联物对肿瘤靶细胞具有较强的选择性杀伤效应。     

应用新型交联技术制备胃癌单抗－丝裂霉素C结合物

建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段。首先制备丝裂霉素Ｃ活性酯，后者与引入了碘乙酰基团葡聚糖胺反应，得到碘乙酰葡聚糖胺－药物。继而用此物与在Ｆｃ段引入了－ＳＨ的胃癌单抗ＭＧｂ２作用将药物引入抗体Ｆｃ段。获得的免疫结合物抗体结合活性保存９０％以上，在体外对肿瘤靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。在体内，免疫结合物能显著抑制人胃癌移植瘤的生长，以ＭＧｂ２（Ｆｃ）－Ｓ－葡聚糖胺－丝裂霉素Ｃ为例，在１ｍｇ／ｋｇ剂量水平，对裸小鼠双侧肾包膜下接种人胃癌移植瘤（ＳＧＣ－７９０１）生长抑制率达７５．８５％，明显强于游离丝裂霉素Ｃ，优于既往报道的结果。     

抗CEA单抗-天花粉蛋白偶联物的研制及活性鉴定

应用SPDP化学偶联法,将天花粉蛋白通过二硫键交联与抗CEA单抗制备成免疫毒素,经Sepbadex G-150凝胶过滤和Blue Sepharose-4B离子梯度交换层析纯化,电泳鉴定显示这一免疫毒素纯度高,偶联蛋白克分子比合理。应用间接免疫荧光染色技术和ELISA法测定结果证明,其与CEA人结肠癌细胞(LoVo)具有特异结合反应,仍保留大部份原抗体活性。具有较好的导向性。体外毒性试验结果表明,免疫毒素对靶细胞(LoVo)有选择性的杀伤作用,50％细胞毒剂量(I.C50)为10~(-9)范围,比单用天花粉蛋白和天花粉蛋白与正常小鼠IgG-偶联物对靶细胞杀伤能力分别增强约150倍和2000倍,而对实验对照细胞(Hela)杀伤无增强作用。     

羟基喜树碱通过激活NF-κB诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡

 目的: 探讨NF-κB信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中所起的作用。方法: 突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染Bcap-37细胞，并用G418进行阳性克隆选择；采用MTT法测定细胞的增殖活力，琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡，流式细胞仪进行细胞周期分析，Western blotting法和DIG-EMSA研究细胞凋亡途径。结果: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制作用，琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带；羟基喜树碱可通过降解IκBα 蛋白进而激活NF-κB，并使NF-κB发生核移位；羟基喜树碱没有激活突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染细胞的NF-κB，并且转染细胞凋亡受到抑制。结论: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制和诱导凋亡作用；NF-κB 信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中起着促进凋亡的作用。     

单克隆抗体介导异种巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

本文研究了抗人胃癌McAb ID1-2在体外介导的小鼠腹腔巨噬细胞对肾癌肿瘤细胞(GGC-8140)的杀伤作用。结果表明,在McAb的介导下异种巨噬细胞杀伤靶细胞的作用明显增加。McAb可能是通过其FC段与巨噬细胞上的FC受体结合而增强对靶细胞的杀伤作用参与抗肿瘤的免疫应答。     

PRSS2 regulates EMT and metastasis via MMP-9 in gastric cancer

Serine protease 2 (PRSS2) is upregulated in gastric cancer tissues, correlates with poor prognosis and promotes migration and invasion of gastric cancer cells. However, the exact mechanism by which PRSS2 promotes metastasis in gastric cancer is unclear. We examined serum PRSS2 levels in healthy controls and gastric cancer patients by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and analyzed the correlation between PRSS2 serum level with the clinicopathological characteristics of gastric cancer patients and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expression. A lentiviral MMP-9 overexpression vector was constructed and used to transfect gastric cancer cells with stable silencing of PRSS2, and migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of gastric cancer cells were examined. High serum PRSS2 levels were detected in gastric cancer patients and associated with lymphatic metastasis and TNM stage. Serum PRSS2 was positively correlated with serum MMP-9 level. PRSS2 silencing inhibited EMT, and knock-down of PRSS2 partially abrogated cell metastasis and EMT caused by overexpression of MMP-9. These results suggest that PRSS2 promotes the migration and invasion of gastric cancer cells through EMT induction by MMP-9. Our findings suggest that PRSS2 may be a potential early diagnostic marker and therapeutic target of gastric cancer.     

糖皮质激素对人胃癌细胞肿瘤坏死因子受体的调节

用放射配体结合分析法和ＭＴＴ比色法研究了地塞米松对胃癌细胞肿瘤坏死因子受体数目和亲力以肿，瘤坏因子突变体细胞毒效应的影响。结果表明，地塞松可显著降低ＴＮＦ受体的亲和力而不改变受体的数目，地塞米松明显抑制ＴＮＦ－ｍ的内化、降解，并增加与其受体的解离。     

HLA-A匹配的人胃癌细胞系诱生胃癌特异性T淋巴细胞

目的 用ＨＬＡ－Ａ匹配的人胃癌细胞系诱导对胃癌细胞具有特异性杀伤作用的Ｔ淋巴细胞。方法 分离胃癌患者及正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）,用ＨＬＡⅠ类型别已知、经照射的异体胃癌细胞系刺激,进行筛选性的混合淋巴细胞肿瘤细胞培养（ＭＬＴＣ）,初步获得ＨＬＡ－Ａ可能匹配的淋巴细胞供体,血清法测定其ＨＬＡ－Ａ、Ｂ分子确认匹配后,进一步进行ＭＬＴＣ,＾３Ｈ掺入法评估其增殖能力,直接免疫荧光法分析其细胞表型,＾５     

Antitumor efficacy of viral therapy using genetically engineered Newcastle disease virus [NDV(F3aa)-GFP] for peritoneally disseminated gastric cancer

Peritoneal dissemination is a common and fatal clinical manifestation of gastric cancer with few effective therapies available. Natural Newcastle disease virus (NDV) has been shown to be an effective oncolytic agent, and recent advances now allow genetic manipulation of this virus to improve cancer killing and safety. This study was designed to investigate the effectiveness of a genetically engineered NDV in the treatment of peritoneally disseminated gastric carcinoma. NDV mutant virus containing a modified F cleavage site and insertion of enhanced green fluorescent protein (GFP), NDV(F3aa)-GFP, was tested in vitro against human gastric cancer cells by standard cytotoxicity at different multiplicities of infection. To test NDV(F3aa)-GFP in vivo in a peritoneal carcinomatosis gastric tumor model, MKN-74 human gastric cancer cells were injected intraperitoneally (IP) in severe combined immunodeficient mice. Mice were treated with NDV(F3aa)-GFP either once or multiple times after tumor challenge. Effective killing of MKN-74 cells by NDV(F3aa)-GFP was found in vitro. This cancer killing was dose-related and correlated with viral replication. GFP expression was a good marker of infection. The virus was also effective as an antitumor therapy in a peritoneal cancer model that simulates clinical disease. Half the animals treated with virus had no evidence of disease. Genetically engineered NDV [NDV(F3aa)-GFP] administered IP is an effective antitumor therapy against peritoneal carcinomatosis from human gastric cancer in a xenograft model, without significant toxicity. These data provide further rationale for clinical trials involving NDV for peritoneal carcinomatosis from gastric cancer.     

人表皮生长因子受体显性负性突变体诱导胃癌细胞发生G0/G1期阻滞

 目的：探讨人表皮生长因子受体显性负性突变体（dominant negative epidermal growth factor receptor,DNEGFR）对胃癌细胞细胞周期的影响及其分子机制。方法：选用2株人胃癌细胞,分为如下6组：SGC-7901细胞未转染组（US组）、SGC-7901细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组)、SGC-7901细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组)、NCI-N87细胞未转染组（UN组)、NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(EN组)和NCI-N87细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DN组)。采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2（CDK2）、cyclin D1、Ser9位点磷酸化糖原合成酶激酶3β［p-GSK-3β(Ser9)］、p21和p27蛋白水平。结果：转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现G0/G1期阻滞,CDK2、cyclin D1和p-GSK-3β（Ser9）蛋白水平降低,p21和p27蛋白水平则升高。结论：DNEGFR通过激活GSK-3β使cyclin D1蛋白水平降低,并降低CDK2蛋白水平,上调p21和p27蛋白水平,最终导致胃癌细胞发生G0/G1期阻滞。这一结果将为胃癌生物治疗研究提供新思路。     

负载多柔比星的EGFR靶向光敏脂质体对胃癌细胞的杀伤作用研究

目的:构建靶向EGFR的光敏脂质体,提高化疗药物对胃癌细胞系的杀伤效果,并降低相关毒副反应.方法:以联乙炔基甘油磷脂酰胆碱(Diacetylenic glycerophosphatidylcholine,PC)(以下简称PC)为原料,采用薄膜分散法制备光反应性脂质体,表面修饰表皮生长因子受体(Epidermal gro...