六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的：研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法：采用MTT法测定细胞增殖情况；NaOH裂解法测定黑素合成；Takahashi法测定酪氨酶含量。结果：六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用，能使细胞数明显减少（P＜0．05），并能使黑素合成显著下降（P＜0．01），使酪氨酸酶活性逐渐减弱（P＜0．01）。结论：六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性，这可能是临床应有六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制。     

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制.方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响.结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用.结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一.     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响

目的研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达。结果 90%高良姜素浓度为1.0～10.0μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P<0.01),而在浓度为20.0μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P>0.05),浓度为0.5～20.0μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P<0.05、0.01),浓度为1.0～20μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P<0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99%高良姜素浓度在0.5～20.0μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P<0.01),而对黑素合成无促进作用(P>0.05)。90%高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P<0.05);99%高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响。结论 99%高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90%高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90%高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的。     

疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素生成的影响

目的:观察疮灵液对鼠永生化细胞(ATCC~?CRL-2770TM)黑素细胞黑素生成的作用。方法:应用MTT法测鼠永生化黑素细胞增殖、多巴氧化法测鼠永生化黑素细胞内酪氨酸酶活性、NaOH裂解法测鼠永生化黑素细胞黑素含量。结果:疮灵液在100～1 600μg/mL剂量,对小鼠永生化黑素细胞增殖具有增进作用,400μg/mL剂量促进作用最明显(P0.05)。疮灵液为800μg/mL～3 200μg/mL剂量,可显著激活鼠永生化黑素细胞酪氨酸酶活性(P0.01)。疮灵液于100μg/mL～3 200μg/mL剂量,对鼠永生化黑素细胞黑素合成均有增进作用(P0.05)。结论:疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素的合成具有显著增进作用,并且在治疗诸如白癜风的色素疾病中具有潜在的应用。     

小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01);小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.     

酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及c-KIT、TRP-2蛋白表达的促进作用

目的:研究酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞干细胞因子受体(c-KIT)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响,探讨其影响B16黑素瘤细胞生物学活性的分子机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和TRP-2蛋白的表达.结果:浓度为25μg/ml的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P<0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P<0.05)和9.16%(P<0.01);浓度为12.5μg/ml的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P<0.05)、酪氨酸酶活性(P<0.01)、黑素合成(P<0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P<0.05).结论:酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖作用,其部分机制可能是通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用.     

中药对黑素细胞及酪氨酸酶调节作用的研究进展

黑素细胞的含量和酪氨酸酶的活性是引起色素性皮肤病的主要原因。近年国内观察中药对体外培养人正常黑素细胞或鼠黑素瘤细胞的影响，观察中药对蘑菇酪氨酸酶的影响，阐明菟丝子、白芷、蒺藜、六味地黄丸、桃红四物汤等一批单味或复方中药具有激活或抑制酪氨酸酶活性，调节黑素细胞的功能，增加或减少黑素生成的作用，为提高中医药治疗色素障碍性皮肤病疗效奠定基础。     

复色2号方对鼠黑素瘤B16细胞酪氨酸酶的影响

目的:探讨复色2号方治疗白癜风的分子学作用机制。方法:采用MTT法测定复色2号方对B16细胞增值的影响,在酶标仪下测定并记录B16细胞增殖情况;采用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定复色2号方对酪氨酸酶活性的影响;采用NaOH裂解法测定B16细胞黑素含量。结果:复色2号方药物浓度在1～1000g/L对黑素瘤B16细胞增殖无统计学意义(P0.05),但对酪氨酸酶活性和黑素合成有统计学意义(P0.05),呈浓度依赖性。结论:复色2号方对黑素瘤B16细胞增殖无影响,但对酪氨酸酶活性和黑素合成有较强的剂量相关性促进作用,可以达到治疗白癜风的目的。     

部分复方中药对酪氨酸酶活性影响的实验研究

为了研究中药对酪氨酸酶活性的作用 ,为应用中药治疗色素性皮肤病提供实验依据 ,通过计算机排序选定应用频次最高的白癜风中药方剂和黄褐斑中药方剂各 5首 ,应用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定酪氨酸酶活性。结果显示白癜风治方中白驳片、白癜风丸、柴胡疏肝汤、白蚀丸组酪氨酸酶活性增高 (P<0 .0 1或P<0 .0 5 ) ,通窍活血汤降低 (P>0 .0 5 ) ;黄褐斑治方中六味地黄丸、补中益气汤酪氨酸酶活性降低 (水提物 P<0 .0 5 ,醇提物 P>0 .0 5 ) ,逍遥丸、桃红四物汤增高 (P<0 .0 1) ,金匮肾气丸水提物降低、醇提物增高 (P>0 .0 5 )。提示六味地黄丸、补中益气汤使酪氨酸酶活性降低 ;桃红四物汤、逍遥丸、白癜风丸、柴胡疏肝汤、白驳片、白蚀丸使酪氨酸酶活性增高。     

中西医结合治疗慢性迁延性病毒性肝炎临床研究

目的：探讨六味地黄丸、甘利欣的保肝效果。方法：六味地黄丸加甘利欣（治疗组）治疗慢性病毒肝炎肝功能持续异常160例,与单用甘利欣（对照组）治疗100例进行疗效比较。结果：两个月内有效率及临床基本治愈率均明显高于对照组（P〈0.01）,停药后的1个月的反跳率明显低于对照组,治疗过程中未发现明显副作用。结论：六味地黄丸加甘利欣治疗慢病毒性肝炎肝功能持续异常,安全有效。     

六味地黄丸治疗慢性口腔炎63例临床观察

[目的]观察六味地黄丸治疗慢性口腔炎疗效。[方法]对63例门诊患者使用六味地黄丸（生地30g,丹皮、泽泻、茯苓、黄连、黄柏各10g,黄芪、黄芩、大黄各15g,花粉、玄参各15～20g。便秘甚加大黄至10～15g,口干渴加知母15～25g,气虚甚加黄芪至20～30g）。1剂／d,水煎200mL,早晚口服。连续治疗10d为1疗程。观测临床症状、不良反应。治疗1疗程（10d）,判定疗效。[结果]治愈43例,有效5例,无效15例,总有效率76．19％。[结论]六味地黄丸治疗慢性口腔炎效果显著,值得推广。     

不同方法测定六味地黄丸（浓缩丸）中熊果酸含量的比较

目的：比较高效液相色谱法（HPLC）与薄层色谱扫描法（HPTLC）测定六味地黄丸（浓缩丸）中熊果酸含量结果的差别。方法：采用HPLC法、HPTLC法对六味地黄丸（浓缩丸）的同一供试品溶液进行熊果酸含量测定。结果：两种方法测得的结果基本接近。但HPTLC法的两份间偏差较大,且重复性较差。结论：HPLC法的精密度明显高于HPTLC法。     

推拿、熏洗联合六味地黄丸治疗老年骨性关节炎随机平行对照研究

[目的]观察推拿、熏洗联合六味地黄丸治疗老年骨性关节炎疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将96例住院患者按掷骰子法简单随机分为两组。对照组48例玻璃酸钠,25mg/次,1次/周,肌注;塞来昔布,0.2g/次,1次/d;膝关节短波治疗和蜡疗,1次/d。治疗组48例推拿:拿捏股四头肌,按揉髌骨,牵拉膝关节,30min/次,2次/d;中药熏洗(海桐皮25g,牛膝18g,透骨草25g,乳香18g,伸筋草25g,生草乌、生川乌各12g,没药22g),3L水浸泡30min,煎煮熏蒸关节,控制熏蒸温度;六味地黄丸,3g/次,3次/d。连续治疗7d为1疗程。观测临床症状、关节炎病灶、VAS评分、JOY评分、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组显效40例,有效6例,无效2例,总有效率95.83%。对照组显效32例,有效6例,无效10例,总有效率79.17%。治疗组疗效优于对照组(P0.05)。VAS、JOY评分两组均有改善(P0.05),治疗组改善优于对照组(P0.05)。[结论]推拿、熏洗联合六味地黄丸治疗老年骨性关节炎效果显著,值得推广。     

益肾法对自发性高血压大鼠肾脏血管重塑的影响

目的:观察益肾法对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏血管重塑的干预作用,探讨益肾法的肾脏保护作用及其作用机制.方法:将SHR大鼠60只随机分为模型对照组、苯那普利组、二仙汤组、杞菊地黄丸组、二仙汤与杞菊地黄丸合方组(合方组)、二仙汤与杞菊地黄丸合方小剂量组(合方小剂量组),每组10只,Wistar大鼠10只作为空白对照组,...     

六味地黄丸穴位贴敷治疗慢性疲劳综合征临床研究

目的:观察中药六味地黄丸穴位敷贴五脏背俞穴治疗肝肾阴虚型慢性疲劳综合征(CFS)的临床疗效。方法:将符合纳入标准的CFS患者60例随机分为治疗组对照组各30例。治疗组患者予六味地黄丸为方制成药饼贴敷五脏背俞穴,对照组予针刺五脏背俞穴。两组治疗均为隔日1次,5次为1个疗程,共治疗4个疗程。所有患者治疗前后及治疗期间均运用CFS症状评分表和FS-14评分量表对该疗法进行综合评价。结果:两组治疗后CFS症状评分及FS-14评分两项指标与治疗前比较均有所改善,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组相比,其CFS症状评分、FS-14总分、FS-14躯体疲劳评分治疗前后的差值无统计学差异(P>0.05),FS脑力疲劳评分有统计学意义(P<0.05)。结论:针对肝肾阴虚型CFS患者,运用六味地黄丸制成药饼穴位贴敷与针刺常规治疗两种方法疗效确切,均可减轻患者的症状,两者总体疗效相当,针刺组在改善患者脑力疲劳症状方面更明显。     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

知柏地黄丸加大补阴丸联合赖氨酸治疗青春早期矮小女童的临床研究

目的:观察知柏地黄丸加大补阴丸联合赖氨酸治疗青春早期矮小女童的临床疗效。方法:将158名处于乳房发育B2期的8～9岁矮小女童随机分成3组:单纯赖氨酸组、单纯中成药组及知柏地黄丸、大补阴丸加赖氨酸联合用药组,分组给予相应药物,疗程为6个月。观察身高增速(GV)、身高标准差数值(HtSDS)改变、预测终身高(PAH)改变、性发育水平及骨龄/实际年龄值变化(△BA/△CA)情况。ELISA法检测血清IGF-I含量,B超观察子宫、卵巢大小。结果:联合用药组总有效率为71.7%,中药组为60.38%,两组比较差异有显著性(P<0.05);联合组预测终身高差(△PAH)与其他两组比差异有显著性(P<0.05);联合组及赖氨酸组IGF-I(类胰岛素样生长因子-I)、GV及△HtSDS与中成药组比较差异有显著性(P<0.05);两服用中药组乳房回缩为B1期者分别占70%和71.5%;性腺容积及性激素浓度均回复至接近青春期前水平;△BA/△CA分别为联合组0.90、中药组0.92,与赖氨酸组(1.2)比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:知柏地黄丸联合大补阴丸治疗青春早期矮小女童可以减缓性发育及骨龄进展,加用赖氨酸可促进身高增长加速,两者合用使预测终身高增加。     

健骨二仙丸含药血清对人成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：在临床研究和动物实验的基础上，进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法：分离、培养人的原代成骨细胞，采用^3H-胸腺嘧啶掺入法和四氮唑蓝法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果：健骨二仙丸中、高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05），与此激素组比较差异无显著性。细胞凋亡率和G0－G1期细胞比率显著低于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05）。结论：健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的增殖、分化，防止成骨细胞的凋亡。