灵芝孢子粉的质量控制

目的:探讨建立灵芝孢子粉的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法鉴别灵芝孢子粉;检查控制灵芝孢子粉的含水量、粗脂肪含量以及酸值;比较蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法测定灵芝孢子粉总多糖的含量。结果:薄层色谱法鉴别供试品,在对照药材出现斑点的位置有相同颜色的清晰斑点;灵芝孢子粉样品的含水量均小于12.0%,粗脂肪含量及酸值因产地不同有较大的差异;蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法中,D-无水葡萄糖在考察的浓度范围内均呈良好的线性关系;苯酚-硫酸法中,灵芝孢子粉样品的总多糖含量为1.19%、1.26%、0.63%,蒽酮-硫酸法中,灵芝孢子粉样品的总多糖含量为1.00%、0.75%、0.40%。结论:该方法为灵芝孢子粉企业内控质量标准的制订以及灵芝孢子粉多糖类成分的深入研究奠定了基础。     

六种不同来源灵芝的质量差异性研究

目的:比较六种不同产地灵芝中灵芝酸A、B,灵芝多糖及灵芝总三萜的含量差异。方法:利用UPLC法对灵芝酸A、B的含量进行测定;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;利用有机溶剂提取灵芝三萜,以熊果酸为对照品,紫外-可见分光光度计在548.1nm波长下测定其吸光度测定总三萜的含量。结果:不同产地灵芝中灵芝酸A、B,灵芝多糖及灵芝总三萜含量具有明显差异。结论:由于不同的栽培条件,地理气候条件等许多因素的影响,各地人工栽培的灵芝的主要成分之间存在明显不同。     

赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究

目的:揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法:收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体,分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果:全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%~2.25%,总三萜为1.36%~3.15%,总蛋白为0.74%~1.91%;浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%~1.42%,0.44%~1.42%,1.82%~3.67%,未破壁孢子粉分别为0.41%~0.91%,0.09%~0.12%,0.78%~0.90%,破壁孢子粉分别为1.03~2.25%,1.89%~3.15%,0.96%~1.04%。结论:全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异,浙江产区总多糖和总三萜含量较高,福建产区总蛋白含量较高;浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高,沪农1号总多糖含量较高;破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体,子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖,菌盖中总三萜含量显著高于菌柄;2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位,但总三萜含量大多低于1潮;孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。     

灵芝孢子油的总三萜测定研究及HPLC鉴别

目的:研究灵芝孢子油质量控制的有效方法。方法:以分光光度法测定总三萜含量。HPLC方法采用Kromasil-C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),乙腈-异丙醇(53∶47)为流动相,流速0.5 mL/min;蒸发光散射检测器检测;柱温30℃。结果:采用分光光度法测定,灵芝孢子油及食用油中总三萜含量均高于20%;HPLC法测定灵芝孢子油中三油酸甘油酯含量大于20%,食用油中三油酸甘油酯含量小于9%。结论:分光光度法测定灵芝孢子油总三萜无专属性。HPLC方法简便、迅速、准确、专属性强,通过HPLC定性相似度比较可作为控制灵芝孢子油的有效方法。     

灵芝破壁孢子粉中总三萜酸含量测定

灵芝孢子为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang的子实体发育后期弹射释放出的种子,是灵芝的生殖细胞.孢子内含有脂肪油、三萜酸类、多糖等;孢壁含有纤维索2.36～3.52％,几丁质52.08％～57.64％[1],矿物元素硅9.2mg/g和钙713μg/g等,使得孢壁坚硬有韧性[2],结构复杂且耐酸、碱,孢子内含物的有效成分在体内难以释放,影响临床疗效[3],故采用现代工艺技术进行破壁,称破壁孢子粉.近代药理研究证明灵芝破壁孢子粉有抗肿瘤、增强免疫、降血糖、降血脂、镇静、清除自由基、抗辐射、促进新陈代谢、延缓衰老[4-6]等作用,而灵芝三萜类化合物涵盖了绝大部分孢子粉的药理活性.因此,对破壁孢子粉中三萜酸含量进行测定有利于控制其质量.文献报道的总三萜酸测定方法有5％的香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸溶液显色法[7-10]、硫酸无水乙醇检测法[11]等.但上述方法都忽略了脂肪油对三萜酸含量测定的干扰,从而影响了测定结果的准确性.本文采用萃取法对灵芝破壁孢子粉三萜酸提取液进行除油预处理,既消除脂肪油对三萜酸测定的干扰,义避免显色过程的不平行性对结果的影响,使测定结果更准确的反映破壁孢子粉中总三萜酸的含量.     

2个灵芝菌株子实体和孢子粉活性成分比较研究

目的:研究分析2个灵芝菌株(A1、A2)子实体和孢子粉中活性成分含量差异,筛选出适宜北京地区栽培的优质高产灵芝菌株。方法:采用分光光度法及超高效液相色谱(UPLC)法分别对2个灵芝菌株子实体和孢子粉中多糖、总三萜和3种灵芝酸(灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2)含量进行检测。结果:灵芝A2菌株孢子粉中多糖含量显著高于A1菌株,A1菌株子实体所含总三萜和3种灵芝酸含量均高于A2菌株。结论:综合比较分析,在北京地区以获得优质灵芝子实体为目的,栽培A1菌株更适合,以孢子粉为主要生产目的,适宜栽培A2灵芝菌株。     

灵芝菌对茯苓药材的生物转化研究

目的：利用灵芝菌对中药材茯苓药材进行固态生物转化,研究转化产物中总多糖和总三萜量的变化情况。方法：采用微波法提取茯苓及转化产物中的总多糖并采用苯酚-硫酸法进行含量测定;采用超声法提取茯苓及转化产物中总三萜并用香草醛-高氯酸法进行含量测定。结果：经生物转化后产物中的总多糖含量明显高于未经转化的茯苓药材（P<0.01）,而总三萜含量明显升高（P<0.01）,说明灵芝菌的生物转化过程改变了茯苓药材的原始特性;茯苓对灵芝生长具有促进作用,表现为灵芝菌丝生长旺盛未受抑制、转化产物中总多糖及总三萜含量显著高于茯苓原药材。结论：利用灵芝菌对中药茯苓进行生物转化来提高总多糖和总三萜含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值。     

响应面法优化灵芝孢子粉药渣多糖提取工艺

目的优化灵芝孢子粉药渣中多糖的提取工艺。方法采用超声波法提取灵芝孢子粉药渣中多糖,苯酚-硫酸法测定灵芝孢子粉药渣中多糖含量;在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken试验设计,以多糖提取率为响应值,优选灵芝孢子粉药渣多糖提取工艺。结果灵芝孢子粉药渣多糖最佳工艺提取条件为超声波功率300W,液固比120:1(ml/g),提取时间30min,提取温度65℃。在此最佳提取条件下灵芝孢子粉药渣中多糖提取率为6.31%,理论值为6.56%,与理论值相对误差小于5%。结论采用超声提取法可以充分提取灵芝孢子粉药渣中的多糖,为中药废弃物的开发利用提供了一条新的途径。     

紫外分光光度法测定灵芝孢子粉胶囊中灵芝多糖含量

目的研究灵芝孢子粉胶囊中灵芝多糖含量测定法。方法采用紫外分光光度法对灵芝孢子粉胶囊中灵芝多糖含量测定。结果灵芝多糖在波长为487nm处有最大吸收。本法准确,精密度高,重现性好。葡萄糖浓度在2.864～11.456μg·mL-1(r=0.9995)范围内、线性关系良好,平均回收率在10.3%,RSD为1.9%。结论该法可作为灵芝孢子粉胶囊质量控制的一种方法。     

灵芝子实体与菌丝体及破壁菌丝主要活性成份的比较

目的:对人工栽培的灵芝子实体、茵丝体及破壁处理菌丝体的主要化学成分进行测定分析,为灵芝药材品质及检测产品质量提供依据.方法:用硫酸蒽酮法测定灵芝多糖含量;采用齐墩果酸作对照,香草醛一冰醋酸显色,分光光度计测吸光值测定三萜化合物.结果:无论多糖还是三萜化合物,菌丝体含量均高于子实体,破壁处理高于未处理.     

3种灵芝子实体腺苷TLC鉴定及HPLC含量测定

目的建立灵芝属药材赤芝、紫芝和树舌子实体中腺苷的HPLC含量测定及TLC鉴别的方法。方法采用硅胶GF254薄层板,以正丁醇-乙腈-0.1 mol.L-1醋酸铵-浓氨水(6:1:2:1)为展开剂,紫外光灯(254 nm)检视进行腺苷TLC鉴别;采用ZORBAX SB-C1(84.6×250 mm)色谱柱,以甲醇-0.01mo.lL-1磷酸二氢钾(10:90)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长:254 nm,柱温26℃为条件进行腺苷HPLC含量测定;结果 TLC法均可从赤芝、紫芝、树舌子实体中鉴别出腺苷;应用HPLC方法测定腺苷在3.125⁵0μg内线性关系良好(r=0.999 3),重复性良好(RSD=1.2%),平均加样回收率为103.9%,精密度良好(RSD=1.1%),24 h内测定结果稳定(RSD=1.1%),测得赤芝、紫芝和树舌的腺苷含量分别为38.7μg/g、35.3μg/g和75.2μg/g。结论采用TLC法和HPLC法鉴定灵芝药材中腺苷,简便易行,重复性好,可作为灵芝属药材(子实体)质量控制另一指标。     

破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的分析

目的研究灵芝孢子粉多糖的组成、相对分子质量及相对分子质量分布,比较破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的异同。方法用不同提取方法提取灵芝孢子粉多糖,采用气相色谱-质谱(GC-MS)、高效液相色谱(HPLC)分析灵芝孢子粉多糖的单糖组成,用凝胶渗透色谱(GPC)分析灵芝孢子粉多糖的相对分子质量及其分布。结果不同提取方法所得灵芝孢子粉多糖的得率不同,破壁后灵芝孢子粉含的多糖是不破壁的1.7倍;灵芝孢子粉多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,破壁与不破壁的多糖组成完全相同,其相对质量分数略有区别;破壁灵芝孢子粉多糖的GPC有两个多糖峰,相对分子质量分别为7.80×104和1.17×104,而不破壁灵芝孢子粉多糖只有相对分子质量为7.80×104的一个峰。结论破壁与不破壁孢子粉多糖的单糖组成相同,但破壁灵芝孢子粉多糖较不破壁孢子粉的多糖高出70%,增加部分为相对分子质量较小的多糖。这可以解释破壁灵芝孢子粉的功效好于不破壁灵芝孢子粉的原因。     

灵芝胶囊质量标准研究及质量评价

目的:建立灵芝胶囊的质量标准,并对9个厂家的灵芝胶囊进行对比.方法:采用TLC法对灵芝进行定性鉴别:采用高效液相色谱法测定灵芝所含腺苷的含量,使用Luna C18柱,磷酸盐缓冲液(pH6.5)-甲醇(17:3)为流动相,测定波长260 nm.结果:定性鉴别方法专属性强;腺苷线性范围为5.12～81.96μg/ml(r=0.9999),平均回收率为100.26%,RSD为1.8%;各厂家的产品质量有较大差异.结论:该方法简便,重复性好,可用于灵芝胶囊的质量控制和质量评价.     

不同品种灵芝主要活性成分分析

目的:对不同品种灵芝子实体中4类活性成分进行测定分析,为灵芝品种专用化育种提供依据.方法:采用紫外分光光度法测定灵芝样品总多糖、总三萜和蛋白质含量;采用反相高效液相色谱法测定灵芝样品麦角甾醇含量.结果:不同品种灵芝子实体中总多糖、总三萜、蛋白质均为含量较高的主要成分,但麦角甾醇的含量极低;4类成分在不同灵芝品种中含量差异显著,含量之间未发现有相关性.结论:灵芝多糖、三萜、蛋白质这3类各具典型功效的主要成分含量测定对灵芝子实体的质量控制均有重要的意义,并且可为制剂生产、临床应用的专用品种选育提供科学依据.     

破壁灵芝孢子粉中多糖的含量测定

目的:测定破壁灵芝孢子粉中多糖的含量。方法:采用比色法测定。结果:比色法测定的线性范围为20.32ul/ml~121.92ul/ml,相关系数r=0.9982,平均回收率为100.36%,RSD为2.18%(n=5),重现性(RSD=2.75%)较好。结论:该方法准确、可靠、重现性较好,适用于破壁灵芝孢子粉中多糖的含量测定。     

灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定

目的研究灵芝三萜的最佳提取方法,并测定其总三萜的含量。方法采用正交实验方法,用硅胶柱进行总三萜分离,通过紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。结果最佳提取方法为用5倍量95%乙醇回流提取3次,每次1.5 h;用30倍量硅胶装柱,以石油醚-乙酸乙酯(9:1和7:3)进行洗脱;经分离得到针状晶体Ⅰ和Ⅱ,测定该品种中灵芝总三萜含量为9.07%。结论本提取方法稳定可行,可作为灵芝三萜工业化生产的参考。     

思立平胶囊中主成分的鉴别及多糖含量测定

目的:建立思立平胶囊中主成分的鉴别和多糖的含量测定方法。方法:采用显微鉴别法或薄层色谱法鉴别处方中的酸枣仁,采用薄层色谱(TLC)法鉴别处方中的灵芝;采用紫外分光光度法测定处方中多糖的含量。结果:显微鉴别方法简单准确;TLC鉴别斑点清晰,专属性强,阴性对照无干扰;处方中多糖的检测浓度在4.507～15.773μg/mL范围内与峰面积积分呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为101.8%,RSD=2.74%(n=6)。结论:该方法简单、准确、可靠,可以作为思立平胶囊定性、定量的检测方法,有效的控制该制剂的质量。     

一测多评法定量分析灵芝及灵芝孢子粉中单体三萜成分的应用

目的:建立灵芝及灵芝孢子粉中灵芝酸A、灵芝酸C_2的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,以灵芝酸A为内标物,建立其与灵芝酸C_2的相对校正因子,并进行含量测定,实现一测多评。采用外标法测定10批灵芝及灵芝孢子粉中灵芝酸C_2含量验证一测多评法的准确性。结果:采用外标法、一测多评法测得灵芝酸C_2含量的平均相对误差为1.07%,含量计算值与实测值无统计学差异(P0.05)。结论:建立的校正因子在不同实验条件下重现性良好,在对照品缺乏的情况下,以灵芝酸A为内参物建立灵芝孢子粉中2种指标成分含量测定的一测多评法可行。     

不同种质五味子藤茎中总三萜和总多糖类成分的含量测定

目的测定不同种质五味子藤茎中总三萜和总多糖的含量,并采用聚类分析法进行评价,进而筛选出总三萜和总多糖含量较高的五味子藤茎种质。方法采用紫外-可见分光光度法测定五味子藤茎中总三萜和总多糖类的含量,并以各成分作为指标进行聚类分析。结果不同种质间五味子藤茎的总三萜和总多糖的含量存在较大差异,以总三萜类成分为考察指标,品系17-11-3最佳;以多糖类成分为考察指标,品系94-9-2最佳;聚类分析结果显示品系94-9-2的药材质量较好。结论该两种方法操作简便,准确性强,精密度高,重复性好,可为五味子藤茎的质量控制提供参考,同时为五味子的种质资源评价和品种选育提供理论参考。     

灵芝不同生长阶段三萜酸含量变化研究

目的:揭示不同生长发育阶段灵芝生长与灵芝三萜酸含量的相关性,探索灵芝的最佳采收时期。方法:对不同生长发育阶段的灵芝,采用"烘干恒重法"测定干重,HPLC测定灵芝10种三萜酸的含量。采用Alltima C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,柱温15℃。结果:灵芝总三萜酸的含量在灵芝现蕾期、菌盖形成期变化不明显,弹孢前期最高,在弹孢后期显著降低。灵芝酸A是灵芝子实体内含量最高的灵芝三萜酸,7种灵芝酸的含量均在弹孢前期最高。结论:对灵芝生长和不同生长发育阶段灵芝三萜酸含量变化研究发现灵芝子实体最佳采收时期应该是灵芝弹孢前期。