PEDF对人脐静脉内皮细胞和肺癌SK-MES-1细胞增殖的影响及作用机制

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对SK-MES-1细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响及可能的机制.方法 CCK-8法检测不同浓度PEDF在不同作用时间条件下对HUVECs和SK-MES-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度PEDF对此两种细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测PEDF对此两种细胞中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达水平的影响.结果 CCK-8结果显示,PEDF对HUVECs和SK-MES-1细胞具有增殖抑制作用,呈一定浓度和时间依赖性(P<0.05);流式细胞术结果表明,实验组细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05),高浓度用药组凋亡率高于低浓度用药组(P<0.05);qRT-PCR结果表明,与对照组相比,PEDF能抑制HUVECs和SK-MES-1细胞中VEGF mRNA水平的表达(P<0.05).结论 PEDF的抗肿瘤作用主要包括抑制肿瘤血管生成和直接作用于肿瘤细胞两方面,PEDF对HUVECs和SK-MES-1细胞增殖的影响可能与降低VEGF表达水平有关.     

活血益气方对miR-484过表达脐静脉内皮细胞增殖、迁移和成管能力的影响

目的：探讨活血益气方通过调节miR-484靶向VEGF调节血管新生的可能分子机制。方法：制备miR-484过表达HUVEC细胞模型，采用活血益气方药物冻干粉干预，CCK-8法、细胞划痕实验、Matrigel体外三维成形实验分别检测活血益气方对HUVEC增殖、迁移和管状成形能力的影响，实时荧光定量PCR法检测活血益气方对VEGFA mRNA表达的影响。结果：与对照组相比，miR-484过表达模型组细胞增殖能力减弱（P<0.01），迁移面积减少（P<0.05），参与成管的长度、分支数、节点数减少，成管能力显著下降（P<0.01）,VEGFA mRNA表达水平下调（P<0.05）；与模型组相比，活血益气方药物组细胞增殖能力增强（P<0.01），迁移面积增加（P<0.05），参与成管的长度、分支数、节点数增多，成管能力提升（P<0.05）,VEGFA mRNA表达水平上调（P<0.05）。结论：miR-484抑制VEGFA mRNA的表达和HUVEC的增殖、迁移和成管，活血益气方对该过程有一定的负向调控作用，这可能是活血益气方促进血管新生的新的作...     

LINC02695表达在糖尿病视网膜病变新生血管中的初步研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC02695在高糖(HG)环境下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)中的表达及其对HRMECs的增殖、迁移及新生血管形成的影响。方法 HRMECs分为4组,分别为正常糖(NG)组(5.5 mmol/L)、HG组(30.0 mmol/L)、HG+LINC02695沉默(HG+si-LINC02695)组、HG+沉默对照(HG+si-NC)组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组HRMECs中LINC02695及VEGF mRNA的表达情况,CCK-8法测定各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,管形成实验检测各组细胞的成管能力。结果 qPCR结果显示：与NG组比较,HG组细胞LINC02695、VEGF mRNA呈高表达(P<0.05);与HG组比较,HG+si-LINC02695组细胞VEGF mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。CCK-8实验结果显示：与NG组比较,HG组细胞增殖能力明显增强(P<0.05);与HG组比较,HG+si-LINC02695组细胞增殖能力明显下降(P<...     

金丝桃素光动力通过抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管腔形成抑制血管生成

目的 探讨金丝桃素光动力(hypericin-photodynamic therapy,HY-PDT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管腔形成的影响,研究抑制血管生成的作用机制.方法 以血卟啉为阳性药,用金丝桃素及血卟啉分别与HUVECs避光孵育24 h后,给予585 nm黄光照射(1.0 J/cm2),24 h后采用MTT法检测不同浓度HY对HUVECs细胞增殖的影响,细胞划痕实验观察HUVECs迁移情况,Matrigel实验观察对HUVECs细胞管腔形成的作用,qRT-PCR检测Smad2基因mRNA的表达,Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Smad2表达变化.结果 HY-PDT能够抑制HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成;HY-PDT使HUVECs中ERK1/2磷酸化比率(p-ERK1/2/ERK1/2)显著降低(P＜0.01),并显著下调Smad2mRNA及蛋白表达(P＜0.01).结论 HY-PDT通过抑制ERK1/2蛋白磷酸化活化、降低Smad2 mRNA表达及蛋白水平,使HUVECs细胞增殖、迁移管腔形成受到抑制,抑制血管的生成.     

miRNA-195抑制剂对高糖培养血管内皮细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨高糖环境下miRNA-195 抑制剂对血管内皮细胞行为的影响及机制。方法：培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）ECV304,分别用高糖（HG）、miRNA-195模拟质粒（mimic）、miRNA-195抑制质粒（inhibitor）、Sirt1激动剂白藜芦醇（RES）处理细胞株,CCK-8试剂盒检测增殖活力,RT-PCR检测miRNA-195及Sirt1 mRNA水平,Western blot检测Sirt1、p-FoxO1、FoxO1、Caveolin-1、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平,划痕实验检测HUVECs的迁移能力,transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Matrigel胶检测HUVECs的成管能力。结果：HG促进HUVECs的增殖、迁移、侵袭,增强成管能力（P ＜0.05）;而miRNA-195inhibitor则明显抑制HUVECs的增殖、迁移,降低成管能力（P ＜0.05）。结论：miRNA-195 inhibitor或许通过miRNA-195/Sirt1/FoxO1/Caveolin-1/VEGF通路影响HG环境下HUVECs的生物学功能。     

RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响

目的构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法用RT-PCR方法扩增RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染HUVECs,RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平;Western blot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平;CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果真核表达质粒构建成功;转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P<0.05),而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P<0.05);CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合;转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P<0.05),G0～G1期比例明显增加,S期减少。结论成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力。     

FOXC2调控DLL4/Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞血管生成的影响

目的：探讨转录因子FOXC2对乳腺癌MCF-7细胞血管生成的影响,阐明FOXC2促进肿瘤血管生成的作用机制。方法：应用FOXC2慢病毒基因转染技术将FOXC2基因和空载体基因分别转染至乳腺癌MCF-7细胞株中,获得稳定转染细胞株;实验分为未转染组、空载体组和过表达组。采用Matrigel基质胶血管形成实验和Transwell小室实验检测各组细胞上清作用下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）成管能力和迁移能力,RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中FOXC2、DLL4和Notch1 mRNA和蛋白表达。结果：与未转染组和空载体组比较,过表达组MCF-7细胞上清诱导HUVECs闭合小管数和迁移细胞数增加（P<0.05）;FOXC2、DLL4和Notch1 mRNA和蛋白相对表达水平明显增加（P<0.05）。结论：MCF-7细胞中过表达FOXC2能显著增加HUVECs的成管能力和迁移能力,其机制可能是通过Notch信号通路来实现的。     

过表达SIRT1对高糖诱导RVECs细胞的影响及对VEGF和PEDF表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子-1(SIRT1)对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(RVECs)增殖、凋亡的影响.方法:构建SIRT1过表达慢病毒载体,感染体外培养的RVECs细胞.实验分3组:(1)正常对照组(NG组):不处理;(2)高糖组(HG组):33 mmol/L葡萄糖处理;(3)SIRT1过表达慢病毒组(SIRT1组):33 mmol/L葡萄糖处理,同时转染SIRT1过表达慢病毒.采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞SIRT1、血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的表达.采用噻唑蓝比色法和原位末端标记法(TUNEL)检测细胞增殖、凋亡情况.结果:与NG组较,HG组细胞SIRT1表达降低,VEGF和PEDF表达增加,细胞增殖率增加、凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与HG组比较,SIRT1组细胞SIRT1表达增加,VEGF和PEDF表达降低,细胞增殖率降低、凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05).Pearson分析显示,SIRT1表达与VEGF和PEDF呈负相关(r=-0.814,P=0.005;r=-0.593,P=0.029).结论:过表达SIRT1能够抑制高糖诱导的RVECs细胞增殖、促进凋亡,并下调细胞VEGF和PEDF表达.     

雷帕霉素抑制人脐静脉内皮细胞增殖与迁移

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的抑制作用。方法应用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞仪、迁移实验研究不同浓度雷帕霉素对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖、迁移的影响。结果雷帕霉素浓度大于10ng/ml、作用48h以上可以明显抑制VEGF诱导的HUVECs的增殖(P<0.05),呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞被阻滞在G0/G1期,并诱发了细胞凋亡;利用Transwell装置证实雷帕霉素浓度大于10ng/ml时抑制了HUVECs的迁移。结论雷帕霉素可通过抑制血管内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成。     

KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用光学显微镜、电镜和免疫细胞化学染色法观察初代和9代平滑肌细胞形态学特征。RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测初代和9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA和蛋白表达。MTT和Transwell法观察KCa3.1通道对平滑肌细胞增殖和迁移的影响。结果初代和9代平滑肌细胞分别表现出收缩表型和增殖表型特征,9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA、蛋白表达水平、增殖和迁移能力显著高于初代细胞(P<0.01),KCa3.1通道阻断剂TRAM-34可显著抑制9代细胞的增殖和迁移(P<0.01),对初代细胞无明显影响。结论增殖表型血管平滑肌细胞KCa3.1通道表达增加可能促进了细胞的增殖和迁移。     

白藜芦醇对CXCL12诱导的人脐静脉内皮细胞株细胞增殖及血管生成的影响

[目的]探讨白藜芦醇(Resv)对CXCL12诱导的人脐静脉细胞株(HUVEC)细胞增殖及血管生成的影响.[方法]取体外培养的HUVEC细胞,给予CXCL12和Resv干预后采用MTT法检测HUVEC细胞增殖情况,采用Matrigel胶体外管型形成实验检测HUVEC细胞管型形成情况,利用RT-PCR法检测HUVEC细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平.[结果]CXCL12可显著促进HUVEC细胞体外增殖、体外管型形成及VEGF mRNA表达(P<0.01,P<0.001);而Resv显著抑制CXCL12诱导的HUVEC细胞体外增殖、体外管型形成及VEGF mRNA表达(P<0.01,P<0.001).[结论]Resv可抑制CXCL12诱导的HUVEC细胞体外增殖及血管生成,其机制可能与下调VEGF mRNA表达水平有关系.     

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的探讨检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞增殖中的影响。方法 HT-29转染Id1表达质粒及合成Id1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR和Western blot法检测VEGF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.05),减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1可通过调控VEGF途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。     

水通道蛋白4对结肠癌细胞迁移能力的影响

目的:探讨水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)对人结肠腺癌细胞增殖?迁移的影响?方法:以血管内皮生长因子(VEGF)与AQP4-siRNA分别上调或下调人结肠癌细胞株LoVo细胞AQP4表达,Western blot检测AQP4表达变化;以细胞划痕试验及CCK-8增殖试验分别检测细胞迁移及增殖能力?结果:VEGF可上调LoVo细胞中AQP4的表达,且呈浓度和时间依赖性;VEGF促进LoVo细胞迁移?AQP4-siRNA干扰下调AQP4后细胞迁移能力明显下降;与VEGF处理组比较,AQP4-siRNA与VEGF联合处理后LoVo细胞迁移能力下降?单独应用VEGF或AQP4-siRNA对细胞增殖能力无明显影响?结论:AQP4对人结肠腺癌细胞迁移能力具有促进作用,提示AQP4可能是结肠癌侵润?转移的重要因素之一?     

UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

  目的  观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体（ER）α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。  方法  应用Western blot、实时荧光定量（qRT）-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。  结果  与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调（P<0.05）,而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调（P<0.05）。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低（P<0.05）,ERβ mRNA表达升高（P<0.05）;转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低（P<0.05）。  结论  UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。     

银杏二萜内酯对缺氧处理人脐静脉内皮细胞凋亡和血管生成的影响及机制

目的 探讨银杏二萜内酯对缺氧处理的人血管内皮细胞株凋亡和血管生成的影响及分子机制。方法 在低氧状态下培养人血管内皮细胞株HUVEC 24 h,然后分别以低剂量(6.25mg/L)、高剂量(25.00 mg/L)银杏二萜内酯对HUVEC 进行处理。MTT法检测细胞活性情况;流式细胞术(FCM)检测各组细胞的凋亡情况;Transwell小室实验检测细胞的迁移能力;荧光实时定量RT-PCR(qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、P53、Bcl-2、Bax、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA和蛋白表达。结果 低氧培养后HUVEC细胞的活性明显低于正常氧培养组(P<0.05);低氧培养的HUVEC细胞凋亡率明显高于正常氧培养组,HIF-1α表达明显高于正常氧培养组(P<0.05)。银杏二萜内酯处理组的细胞活性明显高于对照组(低氧处理组),高剂量组的细胞活性高于低剂量组(P<0.05)。银杏二萜内酯处理组的细胞凋亡率明显低于对照组(低氧处理组),高剂量组的凋亡率低于低剂量组(P<0.05)。银杏二萜内酯处理组的细胞迁移能力明显高于对照组(低氧处理组),高剂量组的迁移能力高于低剂量组(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,银杏二萜内酯处理组的细胞HIF-1α、Bax的mRNA和蛋白表达低于对照组,Bcl-2、VEGF、TGF-β的mRNA和蛋白表达高于对照组;高剂量组上述各基因表达变化程度比低剂量组更为明显(P<0.05)。结论 银杏二萜内酯能通过调控相关基因表达而改善缺氧处理的HUVEC细胞的凋亡及血管生成情况,可能成为治疗缺氧性血管疾病的新型药物。     

血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子在酸中毒诱导的早产儿视网膜病大鼠动物模型中的表达

目的 建立酸中毒诱导早产儿视网膜病(ROP)大鼠动物(AIR)模型,观察血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)在正常新生大鼠及ROP模型大鼠视网膜中的表达变化规律,探讨二者表达变化与酸中毒的关系、对视网膜血管发育的作用以及在酸中毒诱导ROP进程中的作用.方法 1日龄SD新生大鼠随机分为酸中毒诱导模型组(ROP组)和正常对照组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定全视网膜VEGF、PEDF的mRNA水平.结果 RT-PCR结果 显示,8日龄ROP大鼠VEGF mRNA转录水平明显低于C组(P＜0.05),停止管饲NH4Cl后ROP组VEGF mRNA转录水平逐渐增强,10日龄、13日龄ROP大鼠视网膜VEGF mRNA转录水平明显上升,较对照组明显增强(P＜0.05).5日龄、8日龄ROP大鼠视网膜PEDF mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.05),而在停止管饲NH4Cl的10日龄、13日龄视网膜中其表达水平低于对照组(P＜0.05).在实验过程中PEDF mRNA的表达趋势与VEGF相反;ROP组大鼠在酸中毒期间其VEGF mRNA/PEDF mRNA之值明显降低,停止管饲NH4Cl后,VEGF mRNA/PEDF mRNA之值升高,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论 酸中毒使VEGF mRNA表达下调,PEDF mRNA表达上调;停止管饲NH4Cl后二者表达的影响与酸中毒时相反;VEGF、PEDF可能在视网膜正常血管发育及ROP的新生血管化进程中起重要作用,二者比率变化过程与视网膜新生血管发展进程有关.     

增殖性疤痕中表皮细胞增殖、血管新生与VEGF的表达

目的：研究增殖性疤痕中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达，及其与疤痕表皮细胞增殖和血管新生的关系。方法：应用免疫组化和RT-PCR法，以正常皮肤、正常疤痕为对照，检测增殖性疤痕中VEGF表达，并研究VEGF与表皮细胞增殖、血管新生的相关关系。结果：增殖性疤痕内VEGF蛋白及VEGF mRNA表达明显升高，与正常疤痕、正常皮肤有显著差别。VEGF主要由疤痕表皮角朊细胞分泌，且VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达与疤痕组织表皮细胞增殖、血管新生高度相关。结论：增殖性疤痕中VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达与疤痕增殖密切相关。     

白藜芦醇对淋巴瘤细胞增殖及细胞因子分泌的影响

[目的]探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对淋巴瘤Raji细胞增殖及细胞因子白介素-8(IL-8)和血管内皮细胞生成因子(VEGF)基因表达和分泌的影响.[方法]用不同浓度白藜芦醇处理Raji细胞48h后,用MTT法检测细胞增殖指数,用ELISA法检测IL-8和VEGF蛋白含量,用逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)检测IL-8和VEGF mRNA表达情况.[结果]白藜芦醇体外对Raji细胞无增殖抑制作用,不同浓度白藜芦醇作用Raji细胞48h后,白藜芦醇1组、2组和3组IL-8、细胞上清液VEGF蛋白含量,均显著低于对照组(P<0.05);IL-8、VEGF mRNA表达相对强度,均显著低于对照组(P<0.05),且随浓度增加而减弱.[结论]白藜芦醇体外对Raji细胞无增殖抑制作用,但可抑制IL-8 和VEGF的分泌及mRNA的表达,这可能是白藜芦醇抗肿瘤血管生成的重要机制.     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）抑制人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial, HUVECs）迁移中的作用。方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕实验观察GNA对HUVECs迁移能力的影响;硝酸还原酶法检测NO水平;Western blot法检测GNA及LY29400预处理对HUVECs内磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT表达水平的影响;HUVECs转染PTEN-siRNA后,RT-PCR实验检测VEGF mRNA的表达水平。结果 GNA能有效抑制HUVECs迁移,其抑制效果与剂量相关（P＜0.05）。GNA和抑制剂LY294002以及L-NAME均能有效抑制NO的产生,且GNA+LY294002组、GNA+L-NAME组抑制效果更好（P＜0.05）;Western blot检测结果显示,GNA上调PTEN蛋白表达水平,下调eNOS、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平（P＜0.05）。RT-PCR检测结果表明,PTEN-siRNA转染后,GNA能上调VEGF mRNA基因的表达水平（P＜0.05）。结论 GNA通过PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号传导通路,抑制HUVECs迁移,阻止HUVECs血管生成。     

白脂素通过AC-cAMP通路调控血管内皮细胞功能

目的 探讨白脂素(asprosin, ASP)是否通过腺苷酸环化酶(AC)-环磷酸腺苷(cAMP)通路调控血管内皮细胞功能。方法 实验1将80%融合的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度(10、50、100 nmol·L-1)的ASP,Ctrl组则加入等体积的PBS,各组分别处理48 h。实验2分为Ctrl组、ASP组、AC抑制剂SQ22536(SQ)组、SQ+ASP组,以ASP 50 nmol·L-1、SQ 0.25μmol·L-1为作用浓度。CCK-8法检测细胞增殖活性,划痕实验和Transwell实验检测血管内皮细胞迁移和浸润侵袭能力;体外成管实验检测血管新生能力;RT-qPCR检测mRNA表达水平;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体2(VEGFR2)和p-eNOS/eNOS的蛋白水平。结果 与Ctrl组相比,50、100 nmol·L-1ASP作用48 h血管内皮细胞的增殖活性可显著增强(P<0.01),血管内皮细胞迁移率、浸润侵袭能力和成管能力均显著提高(P<0.01);VEGF和VEGFR2的mRNA和蛋白水平、p-eNOS/eNOS比率及NO水平均有显著增加(P<0.01,P<0.05);10 nmol·L-1ASP处理时,上述指标无显著变化(P>0.05)。使用SQ处理细胞后,与ASP组比较,SQ+ASP组的VEGF和VEGFR2表达量、p-eNOS/eNOS和NO水平均降低(P<0.01,P<0.05)。结论 生理浓度的ASP对血管内皮细胞的增殖、迁移和血管新生无显著影响,但超生理浓度的ASP可促进血管内皮细胞的增殖、迁移和血管新生,其机制可能通过AC-cAMP通路介导调控血管内皮细胞的功能。