多发性骨髓瘤流式细胞术免疫表型及微量残留病研究

目的 探讨MM细胞免疫表型特征及MRD检测的临床意义.方法 应用多参数流式细胞术检测16名健康对照者和172例MM患者的免疫表型.32例MM患者缓解后作MRD分析,同时进行跟踪随访,分析MRD阳性和阴性对MM患者的复发率和无病生存时间是否存在影响.结果 流式细胞术检测结果显示,16名健康对照者正常浆细胞CD38、CD 138、CD19、CD45均阳性,172例MM患者骨髓瘤细胞主要免疫表型为CD+38 172例(100.0%)、CD+138172例(100.0%)、CD-19 167例(97.1%)、CD+56 152例(88.4%)、CD-45 166例(96.5%),骨髓瘤细胞具有显著的特征性表型,即CD+38、CD+138、CD+56、CD-19、CD-45.32例MM患者缓解后进行MRD检测,其中14例MRD阴性,18例MRD阳性.随访2～16个月后,MRD阴性组4例复发(28.6%),MRD阳性组13例复发(72.2%),两组复发率比较,差异有统计学意义(χ2=6.03,P＜0.05).MRD阴性组累积无病生存时间中位数16.23(10.37～21.62)个月,明显长于MRD阳性组的10.07(3.79～16.20)个月,两组比较差异有统计学意义(χ2=7.53,P＜0.05).结论 MM患者骨髓瘤细胞主要免疫表型特征是CD+38、CD+138、CD1-19、CD-45、CD+56.多发性骨髓瘤MRD检测可以作为临床预后的参考指标.

Abstract：

Objective To investigate the characteristics of immunophenotyping and clinical significance of MRD analysis in MM patients. Methods Multi-parameter flow cytometry was applied to analyze the immunophenotyping of malignant plasma cells from 172 MM patients, and normal plasma cells from 16 healthy individuals. MRD was analyzed in 32 MM patients with remission. Meanwhile, the effects of MRD status on the disease relapse and patient disease free survival ( DFS ) time was evaluated by following up patients. Results The immunophenotyping of normal plasma cells were CD38, CD138, CD19 and CD45 positive, while the predominant phenotype of MM cells were CD+38( 100.0% ), CD+138( 100.0% ), CD-19 ( 167/172, 97. 1% ), CD+56( 152/172, 88.4% ) and CD-45( 166/172, 96. 5% ). The characteristic markers for MM cells were CD+38, CD-138, CD-19, CD-45 and CD+56. MRD analysis revealed that, among 32 MM patients with remission, 14 patients were MRD negative and 18 patients were MRD positive. During follow-up of 2 to 16 months, the relapse rate in MRD negative patients was significantly lower ( 4/14, 28.6% ) than that of MRD positive patients ( 13/18, 72. 2% ;χ2 =6. 03, P ＜0. 05 ). Furthermore, the DFS time was significantly longer in MRD negative patients[ 16. 23( 10. 37-21.62 )months ] than that of the MRD positive patients [ 10. 07( 3. 79-16. 20 )months,χ2 =7. 53,P ＜0. 05 ]. Conclusions CD+38, CD+138, CD-19, CD-45 and CD+56 are the characteristic markers of MM cells compared to those of the normal plasma cells. MRD analysis is a valuable prognostic factor for MM patients.     

CD7和(或)CD56阳性急性髓系白血病患者干细胞表型分析及在微量残留病检测中的意义

目的 探讨CD7和(或)CD56阳性急性髓系白血病(AML)干细胞免疫表型特点及微量残留病(MRD)与白血病干细胞LSC的关系.方法 采用四色流式细胞术,以4～6组四色抗体组合检测51例CD7+和(或)CD56+及CD34+CD38+初治AML患者(除外M3)白血病细胞免疫表型,并检测CD34+CD38-Lin-LSC中CD123、CD90、CD117、CD7和CD56的表达.以28名正常人骨髓作为对照,以CD34+CD38+细胞同时表达CD7和CD56作为白血病细胞标志,对26例CD7+和(或)CD56+AML患者的53份标本进行MRD监测.结果 CD7+和(或)CD56+初治AML患者CD34+CD38+细胞和CD34+CD38-Lin-干细胞中,CD7+细胞相对比例分别为(77.39±20.71)%,(44.57±22.70)%,CD56+细胞分别为(56.71±32.56)%,(33.51±29.64)%,均明显高于正常对照(P＜0.01和P＜0.05).CD34+CD38-Lin-干细胞中低表达CD90(P＜0.01),高表达CD123(P＜0.01);CD117的表达和正常对照相比差异无统计学意义(P＞0.05).在随访的CD7+和(或)CD56+患者中,MRD阳性组CD34+CD38-Lin-亚群中CD7和(或)CD56表达的相对比例和实际比例增高的患者比例明显高于MRD阴性组,CD7+细胞实际比例增高的患者分别为71%(21例中15例)与16%(25例中4例)(P=0.001),相对比例增高的患者分别为81%(21例中17例)与24%(25例中6例)(P=0.000).CD56+细胞实际比例增高的患者分别为100%(4例)与12%(25例中3例)(P=0.001),相对比例增高的患者分别为75%(4例中3例)与20%(25例中5例)(P=0.031).CD7+AML患者中初治时CD7+CD34+CD38-Lin-细胞亚群实际比例高的患者治疗后较易出现MRD(P＜0.05).结论 CD7和CD56在AML患者的异常表达发生在AML细胞分化的早期阶段,治疗后CD34+CD38-Lin-干细胞中CD7+和CD56+细胞比例高的患者易出现MRD.     

P-选择素、CD44v6和nm23蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 P-选择素、CD44v6和nm23蛋白表达在乳腺浸润性导管癌(IDC)转移扩散中的作用及相互关系.方法 应用SP法检测93例IDC、25例乳腺导管内癌(DCIS)和17例正常乳腺组织中P-选择素、CD44v6和nm23蛋白的表达情况.结果 IDC中,P-选择素、CD44v6和nm23阳性表达率分别为88.17％、82.79％和79.56％,P-选择素和CD44v6在IDC的阳性表达率高于DCIS和正常乳腺组织,nm23在IDC的阳性表达率低于DCIS和正常乳腺组织(P＜0.05).P-选择素、CD44v6和nm23均与患者年龄、肿瘤大小无关(P＞0.05),P-选择素和CD44v6高表达、nm23低表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).P-选择素和CD44v6与IDC临床分期有关(P＜0.05),两者表达呈正相关关系(r =0.414,P＜0.05).结论 P-选择素、CD44v6与nm23蛋白可能共同参与了乳腺癌的恶性转化及转移扩散过程.     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病(AML)中的表达及在微小残留病(MRD)检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关(P<0.01)。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56+组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19+组(MRD阳性率25.00%,复发率0)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。CD56+CD19+组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56+组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与单纯CD19+组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的...     

食管鳞癌组织中3-磷酸肌醇激酶和CD44v6的表达及其临床意义

目的 研究3-磷酸肌醇激酶(P13K)和CD44v6在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌细胞发生、发展与转移的关系以及P13K和CD44v6两者之间的相关性.方法 应用免疫组织化学链霉卵白素-过氧化物酶法检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌组织中P13K和CD44v6的表达情况.结果 食管癌组织中P13K和CD44v6的阳性表达率与正常食管黏膜组织相比差异均有统计学意义(4.2%vs 71.3%、4.2% vs 76.6%,均P<0.01).随着浸润深度和临床分期的增加,P13K和CD44v6表达增多,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01),P13K、CD44v6在淋巴结转换阳性的癌组织中表达高于无淋巴结转移组(92.0%vs 47.7%,90.0%vs 61.4,均P<0.01),P13K与CD44v6表达呈显著正相关(r=0.230,P<0.05).结论 P13K和CD44v6表达均与食管癌发生、发展及侵袭转移有关,可作为评价食管鳞癌生物学行为的指标.在食管癌的发生发展中P13K和CD44v6协同促进肿瘤的恶性进展.     

E—cad、CD44v6在肺癌中的表达及意义

目的研究E-cad、CD44v6在肺癌中的表达,探讨其与肺癌临床病理特征、淋巴结转移的关系.方法利用免疫组化S-P法检测65例肺癌、13例支气管黏膜不典型增生和8例正常肺组织的E-cad、CD44v6蛋白表达.结果肺癌组织的E-cad阳性率(46.2%)显著低于支气管黏膜不典型增生(84.5%)和正常肺组织(100%)(P＜0.05,P＜0.01);肺癌阳性率与淋巴结转移、临床分期呈负相关(P＜0.01,P＜0.05).在肺癌的阳性率(83.1%)显著高于不典型增生(38.5%)和正常肺组织(25%)(P＜0.01);CD44v6阳性表达与肺癌淋巴结转移、临床分期、病理分级呈正相关(P＜0.05).肺癌组织的E-cad阴性与CD44v6阳性表达有显著的相关性(P＜0.01).结论肺癌组织中的E-cad失表达、CD44v6高表达与肺癌的发生发展、淋巴结转移及预后有一定关系.     

原发卵巢肿瘤MRI早期动态增强表现与CD44v6基因表达

目的探讨原发卵巢肿瘤MR早期动态增强表现与CD44v6基因表达的关系.方法分析64例病理检查证实的含有实质成分原发卵巢肿瘤的早期动态增强MR表现与CD44v6基因表达,CD44v6表达应用免疫组织化学技术检测.结果卵巢良性肿瘤主要呈现Ⅲ型曲线(13/19),CD44v6基因表达阳性率低为10.52%(2/19).恶性肿瘤主要呈现Ⅰ型曲线(43/45),CD44v6基因表达阳性率高为46.67%(21/45).统计学有显著差异(P＜0.05).结论卵巢肿瘤MR早期动态增强表现与CD44v6基因表达相关,MR早期动态增强扫描有助于良恶性卵巢肿瘤诊断及预测预后.     

周围型非小细胞肺癌CT征象、预后与CD44v3、CD44v6表达的相关研究

目的 探讨周围型非小细胞肺癌的CT征象、预后与CD44v3、CD44v6表达的相关性.方法 经手术病理证实的46例周围型NSCLC患者进入研究.利用免疫组化SP法检测CD44v3、CD44v6在肺癌组织中的表达,分析其与肺癌CT征象及预后的关系. 结果 CD44v3、CD44v6表达与肺癌CT征象中的深分叶征、棘突征、短毛刺征及肺门、纵隔淋巴结增大密切相关(P＜0.05),与肿瘤大小、空泡征、血管集束征及胸膜凹陷征无明显相关性(P＞0.05);CD44v3、CD44v6表达与肺癌术后3年生存率密切相关(P＜0.05). 结论 深分叶征、棘突征、短毛刺征及肺门、纵隔淋巴结增大与CD44v3、CD44v6表达明显相关,提示肺癌的侵袭、转移能力较强;CD44v3、CD44v6阳性表达的肺癌患者术后生存时间更短,预后更差.     

CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平对急性髓系白血病预后的意义

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平,并分析CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达水平与预后的相关性。方法:采用流式细胞术检测148例初诊AML患者骨髓单个核细胞中CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达水平,分析CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+细胞表达水平与完全缓解率、无病生存率和总体生存率相关性。结果:初诊AML患者骨髓细胞中CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+阳性细胞中位表达率为2.8%(0.01%-67%)。AML患者CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+高表达与NPM1野生型呈正相关(x~2=5.194,P=0.023),而与FLT3-ITD突变阳性无相关性(x~2=0.418,P0.05)。多变量回归分析显示,CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+高表达与较低的完全缓解率(P=0.035)、较差的无病生存(P0.001)、较短的总生存(P0.001)相关。结论:CD34~+/CD38~(low/-)/CD123~+表达率与AML患者治疗的反应及生存密切相关,在临床中可做为快速识别患者治疗失败的风险预后指标。     

急性髓系白血病患者131例免疫表型与预后的相关性分析

目的 探讨急性髓系白血病(AML)免疫表型与预后的相关性.方法 采用多色流式细胞术对131例AML患者进行检测,分析其免疫表型与患者年龄、初诊时WBC、PLT和Hb的关系,及其对完全缓解率(CR)的影响.结果 AML患者中髓系抗原表达阳性率最高的是CD13、CD33和髓过氧化物酶(MPO),急性早幼粒细胞白血病(M3)亚型中CD34和HLA-DR表达率较低,淋巴细胞抗原CD19和CD7表达最常见,阳性率分别为15.4%和14.6%.CD7阳性组患者的年龄明显高于阴性组患者年龄(t=-2.27,P＜0.05),CD14阳性组患者的初诊WBC计数明显高于阴性组(Z=-2.284,P＜0.05).131例AML患者的总CR率为56.5%,CD34阳性组(82例)的CR率为45.1%,CD34阴性组(49例)的CR率为75.6%,两组间差异有统计学意义(x2=11.524,P＜0.05).CD34和HLA-DR双阳性组(74例)的CR率为41.9%,单阳性组(38例)CR率为78.9%,双阴性组(19例)CR率为68.4%,3组问差异有统计学意义(Z=-3.492,P＜0.01).CD7、CD19、CD13、CD33、CD38、CD15、CD64、CD14及MPO等抗原表达阳性组和阴性组间CR率的差异无统计学意义(P均＞0.05).多因素回归分析显示,患者年龄大于60岁、初诊时WBC大于50×109/L、PLT大于30×109/L、Hb小于60 g/L以及CD34阳性是低CR率的独立风险因素.结论 AML患者年龄,初诊时WBC、PLT和Hb计数以及CD34表达与CR率有关,免疫表型的检测对于判断AML预后有一定价值,有助于指导临床治疗和判断预后.     

CD44v6表达与乳腺癌生物学特性关系的研究

目的探讨粘附分子CD44v6的表达情况及其与乳腺癌相关生物学特性的关系。方法用免疫组织化学法检测本院2006年收治的65例乳腺癌女患者的病理标本CD44v6表达,并评价肿瘤相关生物学特性的情况。结果65例乳腺癌患者中CD44v6呈阳性反应有53例,占81．5％;有腋窝淋巴结转移的病例CD44v6阳性率（90．9％）明显高于无腋窝淋巴结转移病例CD44v6阳性率（61．9％）（P〈0．01）;Ki-67表达阳性患者其CD44v6阳性率为76．9％,Ki-67表达阴性患者无CD44v6阳性表达（P〈0．01）;CD44v6表达的多元logistic回归分析显示：腋窝淋巴结转移情况（OR=1．604）和Ki-67表达（OR=2．800）是CD44v6表达的主要影响因素。结论CD44v6的表达与腋窝淋巴转移情况及Ki-67表达情况密切相关,CD44v6是检测乳腺癌病情和判断预后的一个重要指标。     

初诊急性髓系白血病患者NPM1基因突变与临床特征的关系

目的 研究伴有NPM1基因突变的急性髓系白血病(AML)患者的临床特点.方法 采用实时定量PCR方法对206例初诊AML患者进行NPM1基因突变(包括A、B、D三种最常见类型)检测.结果 NPM1突变阳性患者占所有AML患者的15.5%,占正常核型AML患者的32.5%.NPM1基因突变定量中位值为23.2%(2.3%～140.8%).32例NPM1突变阳性和174例NPM1突变阴性患者相比,初诊时中位年龄(46岁和35岁,P＜0.01)、WBC(27×109/L和8×109/L,P＜0.01)、BPC(82×109/L和36×109/L,P＜0.01)、AML-M5比例(31.2%和5.8%,P＜0.01)、染色体正常核型比例(92.6%和40.8%,P＜0.01)、伴有FLT3-ITD突变阳性患者的比例(25.0%和7.5%,P＜0.01)、免疫表型CD34阳性患者比例(23.3%和69.5%,P＜0.01)、伴有特异性融合基因患者的比例(0和47.1%,P＜0.01)等指标差异均有统计学意义.而在性别比例、骨髓原始细胞比例、完全缓解率、总体生存率方面差异无统计学意义(P＞0.05).NPM1突变阳性伴FLT3-ITD阴性患者比NPM1突变阳性伴FLT3-ITD阳性患者无复发生存率有提高趋势.结论 对初诊时高白细胞计数、血小板计数不低、CD34阴性表型和正常核型AML患者检测NPM1和FLT3-ITD突变,有利于分子分型和指导治疗.     

原发性肝细胞癌组织VEGF—C和CD44v6表达及意义

目的探讨血管内皮细胞生长因子-C（VEGF-C）和CD44v6在原发性肝细胞癌（简称肝癌）中的表达及其与肝癌部分生物学行为的关系。方法采用常规SP免疫组织化学染色法检测33例原发性肝癌组织中VEGF-C和CD44v6的表达,并以21例肝硬化组织、16例肝外伤或肝囊肿组织作为对照,分析其表达水平与肝癌部分生物学行为的关系。结果VEGF-C定位于肝癌细胞的胞质,阳性表达率为78．8％,CD44v6主要定位于肝癌细胞的胞膜及胞质,阳性表达率为72．7％。二者在肝癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（χ^2=12．157、10．280,P〈0．05）;在发生转移的肝癌组织中的阳性表达率明显高于无转移的肝癌组织（χ^2=4．930、8．088,P〈0．05）;在正常肝脏组织及肝硬化组织中几乎不表达。VEGF-C和CD44v6的表达与肝癌组织学分级、肿瘤大小、是否并发肝硬化、AFP表达、有无HBV感染无关。VEGF-C和CD44v6在肝癌组织中的阳性表达呈正相关（r=0．681,P〈0．01）。结论VEGF-C和CD44v6的表达与肿瘤侵袭转移的发生有关,可作为估计预后的指标。     

急性髓细胞白血病中婆罗双树样基因4的表达及其临床意义

目的 探讨婆罗双树样基因4(SALL4)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达及其临床监测意义.方法 采用逆转录PCR、实时荧光定量PCR、细胞培养、流式细胞术、骨髓涂片及血细胞分析仪等技术检测了68例AML患者(急性期36例、缓解期32例)、30名健康对照者、AML细胞系Kasumi-1和THP-1中SALL4的表达水平,评价其与骨髓原始细胞数、外周血WBC、未染色大细胞(LUC)计数及骨髓白血病免疫表型CD34表达率的关系.动态观察5例AML患者化疗前后3个时间点(化疗前急性期、治疗中第2～3周、化疗后缓解期)SALL4的表达水平.结果 急性期AML患者SALLA表达水平[69.01(17.20～120.28)]是缓解期AML患者SALL4表达水平[2.64(1.35～5.41)]的26倍,是健康对照组SALL4表达水平[1.14(0.50～1.62)]的61倍(Z=-6.48、-6.83,P均<0.01);缓解期AML患者SALL4表达水平是健康对照组的2.3倍(Z=-3.61,P<0.01).动态观察5例AML患者,SALL4基因表达水平随着治疗和病情缓解呈下降趋势,化疗前急性期、化疗中第2～3周和化疗后缓解期SALLA基因表达水平分别为79.74(33.76～89.09)、7.19(5.97～20.21)和3.40(1.44～15.53).骨髓原始细胞数增高组、LUC计数增高组及CD34表达率增高组中SALL4表达水平分别为33.82(16.00～144.01)、30.70(23.75～72.50)、56.25(23.79～153.81),高于相应正常组的2.74(1.59～5.13)、5.71(2.52～22.40)、20.82(14.03～55.12),差异有统计学意义(Z=-4.64、-2.18、-3.66,P<0.01或<0.05);外周血WBC计数增高组SALL4表达水平为89.26(23.75～154.34),高于相应的WBC计数正常组的3.86(2.03～6.01)和WBC计数减低组的6.66(2.51～17.06),差异有统计学意义(Z=-4.91、-4.21,P均<0.01);SALL4表达率与骨髓原始细胞数以及外周血WBC计数呈正相关(r=0.45、0.40,P均<0.01).结论 成功建立了人SALL4基因表达水平的实时荧光定量PCR方法,SALL4表达有望成为监测AML病情和判断预后的新指标.     

中期因子在急性白血病中的表达及其意义

目的 检测中期因子(Midkine,MK)基因在白血病患者中的表达,初步探讨其与白血病的关系.方法 应用实时定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)方法,对181例急性白血病(AL)患者、31名正常人骨髓标本进行了中期因子转录本的检测.结果 中期因子在初治和复发AL患者、AL完全缓解(CR)患者及正常人骨髓细胞均有表达.初治和复发AL患者中期因子表达明显高于正常人及CR患者(P＜0.01及P＜0.05).而正常人与CR患者相比差异无统计学意义.中期因子的表达在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)各亚型(包括pro-B-ALL,common-B-ALL,pre-B-ALL)及各年龄段均有显著升高(P＜0.01),且与T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性杂合性白血病及急性髓系白血病(AML)各FAB亚型问差异均有统计学意义(P值均＜0.01);与正常人相比,M2型患者中期因子表达明显升高(P＜0.01),与AML其他FAB亚型相比差异亦有统计学意义(P值均＜0.05);M3患者中期因子表达也较正常人明显升高(P＜0.05),但与除B-ALL和AML-M2外的其他白血病亚型间差异无统计学意义.CD34+患者较CD34-患者中期因子表达显著升高(P＜0.01),AML1-ETO融合基因阳性的M2患者较阴性的M2患者中期冈子表达显著升高(P＜0.05).结论 B-ALL、AML-M2和AML-M3型白血病患者中均存在中期因子基因不同程度的表达升高,为白血病诊断及其发病机制的研究提供了新的方向.     

接合物蛋白磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病中的临床意义

目的 探讨接合物蛋白(CRKL)的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-ABL基因转录水平、CRKL磷酸化水平,分析CRKL磷酸化水平与前两者的关系.结果 15例伊马替尼耐药患者中6例(40.0%)检测到ABL激酶区点突变,涉及四种类型氨基酸的改变,分别为Y253H 1例、E255K 1例、T315I 3例、F317L 1例,其中2例(T315I、Y253H)处于急变期,3例(E255K、T315I、F317L)处于加速期,1例(T315I)处于慢性期.初诊组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.01);伊马替尼耐药组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.03);伊马替尼耐药组BCR-ABLmRNA水平与初诊组差异无统计学意义(P=0.18).伊马替尼耐药组与初诊组磷酸化CRKL阳性细胞百分率及平均荧光强度(MFI)均明显升高,两组差异无统计学意义(P=5.130;P=3.178);但初诊组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.01),伊马替尼耐药组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.02);磷酸化CRKL阳性细胞百分率、MFI与BCR-ABL mRNA表达水平存在正相关关系(P＜0.05).结论 应用流式细胞术检测P210BCR-ABL主要底物CRKL蛋白的磷酸化水平,是快速便捷的检测CML患者酪氨酸激酶活性的方法,CRKL磷酸化水平可作为评价伊马替尼治疗CML的疗效指标.

Abstract：

Objective To investigate the adaptor protein CRKL phosphorylation level( p-CRKL) and its significance in chronic myeloid leukemia(CML) treated with imatinib. Methods ABL kinase domain was amplified by nested RT-PCR, domain point mutations analysis by direct sequencing, BCR-ABL mRNA level by real time-PCR, and p-CRKL level by flow cytometry in 52 bone marrow samples from 35 CML patients,and the relationship of p-CRKL level with ABL kinase domain mutation and with BCR-ABL mRNA level was analyzed. Results In the 15 imatinib-resistant patients, ABL domain point mutations were detected in 6 with 4 types of nucleotide substitutions: T315I ( n = 3 ), Y253 H ( n = 1 ), E255 K and F317 L. The incidence of mutations in disease chronic phase ( CP), accelerated phase (AP) and blast phase (BP) was 25.00%,40.00% and 30.00%, respectively. The BCR-ABL mRNA level in newly diagnosed CML was higher than that in imatinib-responded patients (P =0.01 );and so did in imatinib-resistant patients than in imatinib-effective patients ( P = 0. 03 ). The level of BCR-ABL mRNA was not significantly different between newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients. p-CRKL%, MFI showed a high degree of phosphorylation in newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients(P = 5.130; P = 3.178 ). The level of p-CRKL % and MFI in newly diagnosed group was higher than that in imatinib responded group( P = 0.000; P = 0.01 ) and also higher in imatinib-effective group than in imatinib-resistant group (P = 0. 000; P = 0. 02 ). There was apositive correlation between the level of BCR-ABL expression and p-CRKL % ( and the MFI of p-CRKL)( P ＜ 0. 05 ). Conclusion It seems that p-CRKL detection might be helpful in predicting imatinib treatment outcomes.     

伴t(8;21)M2型急性髓系白血病患者c-kit和JAK2基因突变分析

目的 研究伴t(8;21)M2型成人急性髓系白血病(AML)患者蛋向酪氨酸激酶家族中c-kit和JAK2基因突变的发生情况、临床特征与预后的关系.方法 采用PCR扩增产物直接测序法检测78例伴t(8;21)M2患者中c-kit基因8号与17号外显子的突变情况;采用等位基因特异性PCR方法 检测患者JAK2 V617F的发生情况.结果 ①78例伴t(8;21)M2患者中27例(34.6%)检测出c-kit基因突变(mac-kit),6例(7.7%)检出JAK2 V617F突变,未见同一患者同时发生mac-kit和JAK2V617F突变. ②c-kit/JAK2 V617F突变型患者的外周血白细胞中位数为23.0(4.4～167.0)×109/L,明显高于野生型c-kit和JAK2患者[14.4(1.6-97.4)×109/L](P<0.05),两组的血红蛋白水平、血小板计数、骨髓原始细胞比例、CD117表达水平以及年龄、性别差异均无统计学意义(P>0.05);c-kit突变型组患者的外周血白细胞中位数为23.1(4.4-167.0)×109/L,与野生型组[16.0(1.6-97.4)×109/L]患者相比,差异有统计学意义(P<0.05);由于JAK2 V617F突变患者仅6例,未单独进行统计学分析. ③c-kit/JAK2 V617F突变组患者的完全缓解率与野生型组相近(分别69.6%与80.0%,P>0.05),但c-kit/JAK2 V617F突变组患者的2年持续完全缓解(CCR)率低于野生型组(分别26.7%与56.1%,P<0.05);两组患者2年总生存率的差异无统计学意义(分别为34.8%与58.6%,P>0.05).结论 蛋白酪氨酸激酶家族的c-kit和JAK2基因突变在伴t(8;21)M2型AML患者中较常见,并且与白细胞数量增高相关;其中c-kit突变更为频繁,但同一类的两种突变一般不会同时出现于同一患者;伴有此类基因突变的患者复发率高,预后较差;筛查此类基凶突变对于今后的靶向治疗以及了解临床预后将有重要意义.     

CD44v6和P16表达与非小细胞肺癌生物学行为关系

目的探讨非小细胞肺癌组织细胞黏附分子CD44v6和新型抑癌基因p16的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法对72例非小细胞肺癌组织进行CD44v6和P16蛋白检测。结果CD44v6阳性染色定位于肺癌细胞的细胞质,阳性表达率为68.05%,其表达强度与非小细胞肺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期显著相关（χ^2=9.90～16.86,P均〈0.01）,鳞癌的CD44v6的表达率与腺癌比较差异有显著性（χ^2=7.27,P〈0.05）。P16阳性染色定位于肺癌细胞的细胞核,阳性表达率为41.67%,其表达强度与非小细胞肺癌的组织学分级、临床分期、淋巴结转移及原发癌大小相关（χ^2=11.53～17.82,P均〈0.05）,与病理类型无关（χ^2=3.40,P〉0.05）。CD44v6和P16的表达强度与病人的年龄、性别均无关（P均〉0.05）。非小细胞肺癌组织中CD44v6和P16的表达强度呈显著负相关（r=-0.42,P〈0.01）。结论CD44v6和P16在非小细胞肺癌的发生发展过程中有一定的作用,联合检测CD44v6和P16可作为判定非小细胞肺癌恶性程度及评估其侵袭性、转移性的重要方法。