热休克对人胶质瘤热休克蛋白70表达水平的影响

目的:应用热休克人胶质瘤细胞的方法,观察热诱导热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)在人胶质瘤细胞的表达。方法:经43℃热处理2h的人胶质瘤细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及免疫组化技术检测HSP70mRNA及蛋白的表达情况。结果:热休克蛋白人胶质瘤细胞表达阳性率为(39.40±14.40)%,对照组为(8.50±4.60)%及HSP70mRNA表达光密度值为0.23±0.05,对照组为0.13±0.03与内参照βactin比值经单因素方差分析q检验显示与对照组相比有明显的升高。结论:热休克的方法可以明显诱导人胶质瘤细胞HSP70的表达。     

磷脂酶C-γ1在高温诱导热休克蛋白70表达中的作用

目的：研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70．HSP 70)表达的影响。方法：以基因敲除方法建立的缺失plcgl基因(plcgl^-/-)及野生型(plcgl^ / )小鼠胚胎成纤维细胞为模型。Western免疫印迹-增强化学发光法检测它们在高温诱导时的HSP 70表达，并以酶联免疫吸附(ELISA)法做半定量分析．MTT法对比分析两种细胞的热耐受力。结果：两种细胞经43℃与45℃高温诱导30min．都能引起HSP 70合成．但plcg^-/-细胞HSP 70表达水平显著低于plcgl^ / 细胞．P＜0．01；较低温度(41℃)不能诱导plcgl^-/-细胞HSP 70表达,却能引起plckgl^ / 细胞HSP 70表达,且plcgl^-/-细胞的热耐力亦明显低于plcgl^ / 细胞.结论：PLC-γ1参与了热诱导成纤维细胞HSP 70表达的信号转导。     

热休克蛋白90阻止剂增强热诱导骨肉瘤细胞杀伤的研究

目的：探讨热休克蛋白90（heat shock protain 90，HSP90）分子伴侣复合物阻止剂17-丙烯胺基-17去甲氧基格尔德霉素（17-allylamide-17-demethoxgeldanamycin，17-AAG），对热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞杀伤作用的影响。方法：采用干细胞集落形成实验、流式细胞术（flow cytometry，FCM）和吖啶橙荧光染色等方法观察比较单纯热疗组与热疗联合17-AAG治疗组对骨肉瘤SOSP-9607细胞活力、凋亡率及形态学影响。结果：干细胞集落形成实验显示，热疗联合17-AAG治疗组较单独热疗对骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤效应明显增强，P=0．036；Annexin V—FITC染色流式细胞术结果显示，热疗联合17-AAG治疗组所致凋亡率（52．2％）大于单纯热疗组（17．5％）；用吖啶橙荧光染色法观察到热疗联合17-AAG治疗组明显见骨肉瘤SOSP-9607细胞固缩着色不均而且较深，细胞核浓缩、裂解等凋亡特征。结论：HSP90分子伴侣复合物阻止剂17-AAG能增强热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤作用。     

热休克蛋白与凋亡

热休克蛋白是生物体受高温等刺激产生的一组应激蛋白，具有维持机体自身稳定的生物学功能，细胞凋亡是一种自主性的细胞主动死亡，与组织自稳机制有关。本文主要综述二者有关概念并初步探讨热休克蛋白与凋亡的关系及意义。     

食管上皮癌变过程中cyclin E和p21WAF1的表达及其意义

目的研究细胞周期调控因子cyclinE和p21^WAF1基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法应用免疫组化S—P方法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织和相应癌旁组织(正常黏膜17例，非典型增生组织31例)中cyclinE和p21^WAF1蛋白及mRNA表达。结果从食管正常黏膜到非典型增生组织和癌组织，cyclinE蛋白和mRNA阳性表达率皆呈逐渐升高的趋势，食管癌组织和癌旁组织之间差异有显著性。高分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于其它各组，mRNA阳性表达率显著高于正常黏膜和非典型增生Ⅰ级。p21^WAF1蛋白及mRNA在癌旁组织和癌组织中表达皆较高，两者差异无显著性。cyclinE和p21^WAF1基因表达无显著相关性。结论食管癌变过程中，细胞周期蛋白cyclinE表达水平增高，和组织分化程度显著相关，其异常是食管癌变过程中的早期事件，可能作为食管高分化鳞癌的诊断标志物之一。p21^WAF1基因在食管癌组织中高表达，可能与细胞周期调控的反馈机制有关。     

p63蛋白在软骨母细胞瘤中的表达及其价值探讨

目的探讨p63蛋白在软骨母细胞瘤中的表达水平及其诊断价值。方法 采用免疫组织化学法(Maxvision)技术对25例软骨母细胞瘤、52例骨巨细胞瘤、10例动脉瘤样骨囊肿和20例腱鞘巨细胞瘤中p63和S-100p蛋白的表达水平进行分析。结果 p63蛋白在软骨母细胞瘤中呈单核细胞的胞核阳性,阳性率为88.0%(22/25)。而骨巨细胞瘤中除呈单核细胞的胞核阳性,少数多核巨细胞的胞核亦呈阳性,阳性表达率为92.3%(48/52)。p63蛋白在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中的表达两者比较差异无统计学意义(P>0.05),而S-100p在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中阳性表达率分别为88.0%(22/25)和1.9%(1/52),两者差异有统计学意义(P<0.05)。p63蛋白和S-100p在动脉瘤样骨囊肿和腱鞘巨细胞瘤中均不表达。结论 p63蛋白在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中均呈高表达,并有相似的免疫表型,提示两者在发生分化上可能均来自相同的起源细胞或肿瘤干细胞。p63蛋白结合S-100p联合应用对鉴别软骨母细胞瘤及其相关性病变具有一定辅助诊断意义。     

胰腺癌中CXCL12-CXCR4生物学轴表达及临床意义的探讨

目的:探讨胰腺癌中CX-CL12、CXCR4表达与临床病理因素的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和PCR技术检测胰腺癌、癌旁组织、正常胰腺和胰周淋巴结中CXCL12、CXCR4的表达。结果:CXCL12在正常胰腺、癌旁组织和淋巴结中等表达(阳性率56.7%、46.7%和50.0%),其表达与分化程度、TNM分期和淋巴结转移无关,P>0.05。CXCR4高表达于胰腺癌、癌旁组织和胰周淋巴结(阳性率80.0%、70.0%和73.3%);其表达与分化程度无关,与TNM分期显著相关,P<0.01。淋巴结转移者CXCR4均表达阳性。RT-PCR和实时荧光定量PCR均证实上述结果。结论:CXCR4表达与胰腺癌淋巴结转移及TNM分期密切相关,CXCL12-CXCR4轴在其进展中可能起重要作用。     

E-cad和CD44V6在大肠癌中的表达及意义

目的研究E-cad和CD44V6在大肠癌中的表达,探讨其与大肠癌临床病理特征、淋巴结转移的关系.方法利用免疫组化SP法检测70例大肠癌、10例腺瘤、8例正常大肠黏膜的E-cad、CD44V6蛋白表达.结果大肠癌组织的E-cad保存型表达(31.4%)显著低于腺瘤(70.0%)和正常黏膜(100.0%),P<0.05.E-cad保存型表达率与Duke's分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)、脉管浸润(P<0.01)呈负相关.CD44V6在大肠癌中的阳性率(55.7%)显著高于腺瘤(20%)和正常黏膜(12.5%),P<0.05,CD44V6阳性表达与大肠癌Duke's分期,P<0.05、淋巴结转移,P<0.01、脉管浸润(P<0.01)呈正相关.大肠癌组织E-cad表达减低与CD44V6过表达有显著相关性,P<0.01. 结论大肠癌组织中E-cad失表达、CD44V6高表达与大肠癌发生发展、淋巴结转移及预后有一定关系.     

PTEN及p27在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的　研究 PTEN及 p2 7蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义。方法　应用免疫组化法检测 11例正常增生期内膜、4 4例子宫内膜增生症及 5 2例子宫内膜腺癌 PTEN及 p2 7蛋白表达。结果　 PTEN及 p2 7蛋白在正常增生期内膜、子宫内膜简单型 /复杂型增生过长 (无不典型增生 )、子宫内膜不典型增生过长及子宫内膜腺癌中表达率分别为 10 0 .0 %、91.4 %、6 6 .7%、6 7.3%和 90 .9%、88.6 %、6 6 .7%、5 9.6 %。子宫内膜腺癌 PTEN及 p2 7蛋白表达率明显低于正常增生期内膜和简单型 /复杂型增生过长 ( P<0 .0 1) ,与不典型增生过长相比差异无显著性( P>0 .0 5 )。 PTEN及 p2 7蛋白表达随组织分化越差呈递减趋势 ,PTEN表达与子宫内膜腺癌差分化相关 ( P<0 .0 5 ) ,与其它临床病理因素无关。在子宫内膜腺癌中 PTEN及 p2 7蛋白表达有相关性 ( P=0 .0 19)。结论　 PTEN及 p2 7在子宫内膜腺癌发生、发展中起重要作用 ,并可能是子宫内膜腺癌发生中的早期事件 ,检测 PTEN及 p2 7蛋白表达有助于子宫内膜腺癌的早期诊断及预后判断     

宫颈病变组织中E-cad和β-cat的表达及其意义

目的:研究上皮性钙黏附蛋白 (epithelial cad,E cad)和β 连接素(β catenin,β cat)在宫颈上皮内瘤样病变 (cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)和 宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法:应用 SP法检测E cad和β cat在正常宫颈上 皮、CINⅠ级、CINⅡ～Ⅲ级及宫颈鳞癌组 织的表达。结果:正常宫颈中E cad和β cat为膜表达。E cad表达在正常宫颈 CINⅠ级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈鳞癌中分别 为86%(12/14)、82%(9/11)、54%(7 13)和21%(8/38);β cat膜表达率分别为 79%(11/14)、64%(7/11)、23%(3/13)和 11%(4/38);E cad表达在正常宫颈与鳞 癌之间、CINⅠ级与鳞癌之间的差异有统 计学意义,P<0.05;在鳞癌的不同病理学 分级和肌层浸润深度之间的差异有统计 学意义,P<0.05。β cat表达在正常宫颈 与CINⅡ～Ⅲ级、宫颈鳞癌以及CINⅠ级 与鳞癌之间差异有统计学意义,P<0.05 在宫颈鳞癌的不同病理分级之间差异有 统计学意义,P<0.05。宫颈鳞癌中,E cad与β cat的表达形式具相关性,P< 0.001。结论:E cad和β cat异常表达是 宫颈上皮性肿瘤进展的早期事件;在宫颈 浸润性鳞癌中,它们的异常表达可能与肿 瘤的侵袭潜能有关。     

食管癌组织中PTEN与MGMT基因蛋白的表达

目的:研究食管癌组织中PTEN和MGMT基因蛋白的表达及两者的关系。方法:采用免疫酶标和免疫荧光技术分别在光镜和激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)下检测105例食管癌组织中的PTEN和MGMT基因蛋白的表达。结果:PTEN蛋白在食管高、中和低分化鳞癌组织中的阳性率分别为63.64%、30.43%和27.27%。高分化鳞癌与中分化鳞癌阳性率比较,差异有统计学意义,u=169.00,P<0.05。高分化鳞癌组织的PTEN蛋白表达的量(88195.69±50794.95)明显高于中分化鳞癌组织(28100.27±35988.47),t=3.053,P<0.01。MGMT蛋白在食管鳞癌、腺样结构癌和小细胞癌组织中的阳性表达率分别为76.79%、90.00%和11.11%,小细胞癌MGMT蛋白表达与鳞状细胞癌及腺样结构食管癌的表达差异有统计学意义,u=82.00,P<0.01;u=19.00,P<0.01。食管癌组织中PTEN与MGMT蛋白的阳性表达呈正相关,r=0.574,P<0.01。结论:PTEN蛋白表达与食管鳞癌的分化程度有关,而MGMT蛋白表达则与食管癌的组织学类型有密切关系,两者可作为食管癌预后判断的参考指标。     

肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究

目的：研究原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中ER基因启动子甲基化修饰与临床病理特征间的关系,同时观察5-杂氮胞苷对ER mRNA表达的影响.方法：分别采用MSP和RT-PCR方法检测30例HCC及癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰状况及ER mRNA的表达状况,并用5-杂氮胞苷处理肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2.结果：30例HCC组织中ER启动子甲基化修饰阳性率为60.0% （18/30）,而30例癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰阳性率为30.0%（9/30）,两者差异有统计学意义,χ^2=5.46,P= 0.037.30例HCC组织中ER mRNA阳性表达12例（40.0%）,其中甲基化组织和未甲基化组织中ER mRNA表达率分别为22.2%和66.7%.ER启动子甲基化修饰与mRNA表达呈负性相关,χ^2=5.93,P=0.024.同时,ER启动子区甲基化修饰与肝癌患者血清AFP含量增高呈正相关,χ^2=12.13,P=0.001.细胞培养结果提示低浓度的5-杂氮胞苷可诱导肝癌细胞系ER mRNA重新表达.结论：肝癌组织中ER启动子甲基化修饰是个频繁事件,因此沉默ER基因的表达有可能促进肝癌的发展.     

重组IFN-α-2b-BCG对人PBMC的TLR4表达调节及其抗肿瘤作用的研究

目的了解重组卡介苗（BCG）和野生BCG对人外周单核细胞（hPBMC）上TLR的调节差异,揭示hIFN-α-2b对hPBMC上TLR4的表达是否具有协同增强效应,以及BCG介导免疫细胞活化效应的新机制。方法比较研究重组hIFN-α-2b-BCG和野生型BCG,及其上清和等量干扰素对TLR4表达的调节,以及表达TLR4淋巴细胞的肿瘤杀伤效应。以淋巴细胞作为空白对照,应用流式细胞仪对TLR4进行检测,MTT法检测肿瘤细胞杀伤效应。结果证实了重组BCG和野生BCG对hPBMC的TLR4的表达均有正调节及抗肿瘤效应;重组BCG对hPBMC的TLR4表达的调节优于野生BCG（P〈0.05）;重组BCG上清和外源性等量干扰素对TLR4表达皆有正调节作用,但差别无统计学意义;重组BCG上清与野生BCG上清相比,对hPBMC诱导TLR4表达差别显著（P〈0.05）;与野生BCG组相比,重组BCG组表达TLR4的hPBMC杀伤肿瘤细胞的效应显著增强（P〈0.05）。结论重组BCG的脂多糖和持续分泌的hIFN-α-2b对hPBMC的TLR4表达均有正调节作用,并加强表达TLR4淋巴细胞的细胞介导的抗肿瘤效应。     

胃癌细胞凋亡过程中胞内Ca2+和三磷酸肌醇浓度的改变

目的　探讨顺铂诱导胃癌细胞凋亡过程中细胞内游离Ｃａ２＋ 浓度（［Ｃａ２＋］ｉ） 和三磷酸肌醇（ＩＰ３） 浓度的变化特点和意义。方法　选择顺铂诱导胃癌细胞凋亡,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡。Ｆｕｒａ２ 荧光负荷技术测［Ｃａ２＋］ｉ,竞争性蛋白结合法测定ＩＰ３ 浓度。结果顺铂浓度为２ μｇ／ｍｌ 作用于ＢＧＣ８２３ 胃癌细胞２４ 小时出现典型的凋亡改变。胃癌细胞凋亡过程中,胞内［Ｃａ２＋］ｉ 明显升高,以凋亡早期更为明显。胃癌细胞凋亡早期（３０ 秒）,ＩＰ３ 浓度明显升高,到凋亡晚期（２ ～２４ 小时） ,ＩＰ３ 浓度明显降低。结论　在胃癌细胞凋亡过程中,［Ｃａ２＋］ｉ 表现为上调趋势。ＩＰ３ 浓度在凋亡早期,表现为上调趋势,在稍晚阶段,表现为下调趋势,这为治疗胃癌提供新靶点