一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

TNF-α的合成分泌机制不同于一般的分泌型蛋白

目的 拟借助微粒体膜和体外转录翻译系统来研究分泌型ＴＮＦα（Ｓ－ＴＮＦ－α）的产生机制及Ｓ－ＴＮＦ－α和跨模型ＴＮＦα（ＴＭ－ＴＮＦ－α）的关系。方法 首先将分子量为１７×１０＾３Ｓ－ＴＮＦ（不含编码ＴＮＦ信号肽的基因）、２６×１０＾３ＴＭ－ＴＮＦ（含信号肽基因）和１７×１０＾３Ｓ－ＴＮＦ突变体（Ｓ－ＴＮＦｍ,用ＩＬ－２信号肽密子转换ＴＮＦ信号肽序列）的全长ｃＤＮＡ片段分别亚克隆于含Ｔ７启动子的ｐ     

血浆内皮素—1和肿瘤坏死因子与急性心肌梗塞的关系

本文对２０例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者检测了血浆内皮素－１（ＥＴ－１）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的水平，结果表明，ＡＭＩ组的ＥＴ－１、ＴＮＦ均较正常对照明显升高（Ｐ〈０．００１），且二者与肌酸磷酸激酶的ＭＢ同功酶（ＰＣＫ－ＭＢ）均呈正相关（ｒ＝０．０６９８４，Ｐ〈０．００１；ｒ＝０．６０５３，Ｐ〈０．０１）。研究结果说明ＥＴ－１和ＴＮＦ参与了ＡＭＩ的病理损伤过程。     

α-MSH拮抗剂对内毒素及肿瘤坏死因子性发热的作用

目的：观察α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）拮抗剂［Ｄ－Ｔｒｐ７,Ａｌａ８,Ｄ－Ｐｈｅ１０］α－ＭＳＨ（６－１１）－ａｍｉｄｅ对家兔内毒素（ＥＴ）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）性发热的影响。方法：侧脑室给药,ＳＴ－１型数字温度计测家兔的结肠温度。结果：（１）静脉注射ＥＴ,家兔体温呈典型的双相热;若事先侧脑室注射α－ＭＳＨ拮抗剂,则体温升高更明显,且热程明显延长,６ｈ体温反应指数（ＴＲＩ６）显著高于ＮＳ＋ＥＴ组（Ｐ＜０．０１）。（２）侧脑室注射ＴＮＦ－α引起体温明显升高;事先给予α－ＭＳＨ拮抗剂,则显著增强ＴＮＦ－α性发热效应（Ｐ＜０．０１）。而α－ＭＳＨ拮抗剂对正常体温无影响。结论：内源性解热物质α－ＭＳＨ在限制发热中发挥了重要作用。     

新型重组人肿瘤坏死因子治疗恶性腹水的临床研究

新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈ－ＴＮＦ）系经基因重组、结构改建的肿瘤坏死因子。本研究旨在探讨ｒｈ－ＴＮＦ和化疗药５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）和丝裂霉素（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ，ＭＭＣ）对恶性腹水的治疗效果，６４例恶性腹水分三组进行：Ｔ组（ＴＮＦ）２１例，ＦＭ组（５－ＦＵ，ＭＭＣ）１８例，ＴＦＭ组（ＴＮＦ，５－ＦＵ，ＭＭＣ）２５例。结果显示治疗恶性腹水的有效率分别为ＴＦＭ组９２．３％、Ｔ组８５．７％、ＦＭ组５０．０％。ＴＦＭ和Ｔ组较ＦＭ组疗效相差显著（Ｐ＜０．０１），ＴＦＭ和Ｔ组相差不显著（Ｐ＞０．０５），Ｔ组和ＴＦＭ组未见明显副作用。三组产生疗效的平均时间分别为ＴＦＭ组７．２ｄ、Ｔ组１１．５ｄ、ＦＭ组１８．２ｄ。表明ｒｈ－ＴＮＦ治疗恶性腹水具有疗效高，副作用小等优点。ｒｈ－ＴＮＦ和化疗药ＦＭ合用，可减少ＴＮＦ用量，缩短疗程，是治疗恶性腹水的理想方法。     

促炎症细胞因子、T细胞亚群在小儿过敏性紫癜不同病期的变化

目的：探讨促炎症细胞因子（ＩＬ－６１、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α）以及Ｔ细胞亚群在小儿过敏性紫癜发病中的作用。方法：采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测３０例急性期２１例恢复期及２８例健康儿童血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８及ＴＮＦ－α水平,以及外周血Ｔ细胞及其亚群的变化。结果：急性期血清及ＰＢＭＣ上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α水平明显高于恢复期和对照,且以ＩＬ－８、ＴＮＦ     

新生儿缺氧缺血性脑病细胞因子的变化及临床意义

目的：研究新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）患儿细胞因子ＩＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６的变化及其与ＨＩＥ严重程度的关系和临床意义。方法：用ＥＬＩＳＡ方法测定了５０例ＨＩＥ患儿血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外培养产生的细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６的水平。结果：ＨＩＥ患儿血浆及ＰＢＭＣ体外培养产生的ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β水平均显著高于对照组；而且重度ＨＩＥ患儿急性期血浆及ＰＢＭＣ体外培养产生的ＴＮＦ－α、ＩＬ－β和ＩＬ－６水平均显著高于对照组和轻度ＨＩＥ组，其恢复期血浆ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β则显著降低，但血浆ＩＬ－６水平仍明显高于对照组。结论：ＨＩＥ患儿血浆及激活的ＰＢＭＣ产生的ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β水平与ＨＩＥ的严重程度有关，ＩＬ－６的产生可能与脑损伤后的修复机制有关，测定这些细胞因子对病情的监测具有一定意义。     

跨膜突变型TNF-α的基因构建及体外表达

目的：跨膜型ＴＮＦ－α易在某些蛋白酶的作用下转换下分泌型ＴＮＦ－α。拟用基因突变技术获得稳定表达的，不能转换成Ｓ－ＴＮＦ的ＴＭ－ＴＮＦ突变体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人外周血单细胞中扩增出编码ＴＭ－ＴＮＦ－α的全长ｃＤＮＡ序列并构建ｐＢＳＫ－ＴＮＦ－α重组体。以此为模板，借助改进的“一次重组ＰＣＲ”定位突变技术，造成ＴＭ－ＴＮＦ转换 为Ｓ－ＴＮＦ酶切位点的缺失，获得ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。     

血栓素A2、肿瘤坏死因子和地塞米松对兔气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、地塞米松（Ｄｅｘ）对气管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增生的影响。方法：［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法及细胞计数检测上述因素作用下体外培养ＡＳＭＣ增生过程。结果：ＴＸＡ２可刺激ＡＳＭＣ增生,ＴＮＦ－α能抑制ＴＸＡ２的促增生作用,Ｄｅｘ又可使ＴＮＦ－α的抑增生作用消失。结论：ＴＸＡ２、ＴＮＦ－α在ＡＳＭＣ增生中起重要作用,Ｄｅｘ在治疗哮喘过程中,有可能加重ＡＳＭＣ的增生。     

血栓素A2,肿瘤坏死因子和地塞米松对兔气道平滑肌细胞增？…

目的；探讨血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α），地塞米松（Ｄｅｘ）对气管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增生的影响。结论：ＴＸＡ２、ＴＮＦ－α在ＡＳＭＣ增生中起重要作用，Ｄｅｘ在治疗哮喘过程中，有可能加重ＡＳＭＣ的增生。     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

人工晶体植入术后并发症与血浆内皮素,肿瘤坏死因子的关系

目的：探讨血浆内皮素－Ｉ（ＥＴ－１）,肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与人工晶体植入术后并发症的关系。方法：对９６例白内障囊外摘除（ＥＣＣＥ）后房型人工晶体植入术（ＰＣ－ＩＯＬ）后三种不同级别并发症虱及３０名健康对照组进行血浆ＥＴ－１,ＴＮＦα测定,检测方法为放射免疫分析。结果：９６名患者均呈高内皮素及高ＴＮＦα血症,且与术后并发症的程度呈正相关。     

急性白血病患者IL—6,TNF—α和sIL—6R含量及其与白血病负荷的？…

应用生物学检测法，ＥＬＩＳＡ法和间接免疫荧光分析了２４例急性白血病患者外周血ＩＬ－６，ｓＩＬ－６Ｒ和ＴＮＦ－α的含量及其与白血病细胞负荷的相关性。结果显示：（１）急性白血病患者外周血ＩＬ－６，ｓＩＬ－６Ｒ及ＴＮＦ－α水平明显升高，其中急性Ｂ淋巴性白血病的ＩＬ－６，ｓＩＬ－６Ｒ急性Ｔ淋巴性白血病的ＴＮＦ－升高尤为明显；（２）Ｂ－ＡＬＬ的ＩＬ－６，ＴＮＦ－α及Ｔ－ＡＬＬ的ＴＮＦ－α水平与白血病细胞负     

PGE_2与LTB_4在微管对TNF－α合成调节中的作用

本研究证实完善的微管功能对ＴＮＦ－α的合成是必要的。如用秋水仙碱（Ｃｏｌ）抑制微管聚合，则可减少ＭΦ产生ＴＮＦ－αＣｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用部分是由于该药引起前列腺素Ｅ＿２（ＰＧＥ＿２）升高所致，因为用环加氧酶抑制剂消炎痛（Ｉｎｄｏｍ，）阻断ＰＧＥ＿２合成，可部分拮抗Ｃｏｌ的这一抑制作用。此外，Ｃｏｌ可抑制花生四烯酸的另一产物白三烯（ＬＴＢ＿４）的产生，然而补充外源性ＬＴＢ＿４并不影响Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用。     

WEHI164－C1细胞株检测TNF的MTS／PMS比色法的建立

本文用有限稀释法对ＷＥＨＩ１６４细胞进行了亚克隆，从１２株中筛选出一株对ＴＮＦ高度敏感的亚克隆细胞株ＷＥＨＩ－Ｃｌ。ＭＴｓ的还原产物具有良好的水溶性，ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法与ＭＴＴ法相比较具有简便、快速的优点。我们首先将ＭＴＳ引入细胞毒的检测，用ＷＥＨＩ１６４－Ｃｌ亚克隆株建立了检测ＴＮＦ的ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法。此方法不仅简便、快速．而且敏感度高（比常规Ｌ９２９细胞检测法敏感１０～１５倍）、特异性强（ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＰＨＡ、ＣｏｎＡ、ＬＰＳ对检测结果均无明显影响）。     

肾小管损伤时内皮素1、肿瘤坏死因子α的表达及其对离体肾间质成纤维细胞的影响

目的　研究内皮素１（ＥＴ１）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦα） 在肾小管上皮细胞的表达、肾小管的损伤及它们对肾间质成纤维细胞的影响。方法　应用肾小管上皮细胞及肾间质成纤维细胞的体外培养;建立肾小管损伤动物模型;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 、免疫组化ＳＰ法染色、放射免疫测定（ＲＩＡ） 及双重免疫组织化学染色技术,并测定３ＨＴＤＲ 掺入率。结果　肾小管上皮细胞既有ＥＴ１ｍＲＮＡ和ＴＮＦαｍＲＮＡ 的表达（ＲＴＰＣＲ的扩增片段分别为５４６ ｂｐ 和４１５ ｂｐ） ,还有ＥＴ１ 及ＴＮＦα的蛋白合成及分泌;细胞培养上清中ＥＴ１ 和ＴＮＦα含量分别为１．４２ ｐｇ／ｍｌ 和０ ．５８ ｎｇ／ｍｌ;且肾小管损伤及再生过程中,ＥＴ１ 及ＴＮＦα表达增加。对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞分别加入ＥＴ１ 、ＴＮＦα,３ＨＴＤＲ掺入率较对照组明显增高（ Ｐ＜ ０．０５）;并证明肾间质成纤维细胞有ＥＴ受体（ＥＴＲ） ｍＲＮＡ及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ１） ｍＲＮＡ的表达（ＲＴＰＣＲ 扩增片段分别为５４４ ｂｐ 和３４７ ｂｐ）。结论　损伤及再生的肾小管上皮细胞较正常时合成和分泌更多的ＥＴ１ 和ＴＮＦα,ＥＴ１ 及ＴＮＦα分别     

干扰素和肿瘤坏死因子调节甲状腺细胞分泌甲状腺球蛋白

采用甲状腺细胞培养方法，研究α－干扰素（ＩＦＮ－α）、γ－干扰素（ＩＮＦ－γ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）对甲状腺细胞生成甲状腺球蛋白（Ｔｇ）的调节作用。结果显示：在１０＾－３～１０＾３ｕ／ｍｌ的浓度范围内，ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ－α均可显著抑制甲状腺细胞基础状态下Ｔｇ的分泌；ＩＦＮ－α不影响ＴＳＨ的刺激效应，但ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α对ＴＳＨ诱导的Ｔｇ释放具有双重调节作用，低浓度时（１０＾     

血清中sTNF-α、sTNFR Ⅰ 及sTNFR Ⅱ 含量与肺癌组织mTNF-α的表达在肺癌发病中的关系

膜型ＴＮＦ－α（ｍＴＮＦ－α），是一完整的跨膜分子，为可溶性ＴＮＦ－α（ｓＴＮＦ－α）的前体，ＴＮＦ－α受体存在两型：ＴＮＦＲⅠ（即ＴＮＦＲ５５）和ＴＮＦＲⅡ（即ＴＮＦＲ７５）。为了探讨ＴＮＦ－α，ｓＴＮＦＲⅠ及ｓＴＮＦＲⅡ在肺癌发病中的作用，采用Ｅ...     

WEHI164—C1细胞株检测TNF的MTS／PMS比色法的建立

本文用有限稀释法对ＷＥＨＩ１６４细胞进行进行了亚克隆，从１２株中筛选出一株对ＴＮＦ高度敏感的亚克隆细胞株ＷＥＨＩ－Ｃｌ０ＭＴＳ的还原产物具有良好的水溶性，ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法与ＭＴＴ法相比较具有简便、快速的优点。我们首先将ＭＴＳ引入细胞毒的检测，用ＷＥＨＩ１６４－Ｃ１亚克隆株建立了检测ＴＮＦ的ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法。此方法不仅简便、快速，而且敏感度高（比常规Ｌ９２９细胞检测法敏感１０－１５倍）、特异     

红霉素抗哮喘气道炎症机理的研究

为探讨红霉素抗哮喘气道炎症的机理，对２６例过敏性哮喘患者肺泡巨噬细胞（ＡＭ），分别加红霉素、地塞米松、生理盐水（空白对照组）培养，测定培养上清液中血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、白介素－８（ＩＬ－８）水平。结果显示加红霉素组培养上清液中ＴＮＦ－α、ＩＬ－８水平明显低于空白对照组，ＴＸＢ２水平与空白对照组无差异；地塞米松组培养上清液中ＴＸＢ２、ＴＮＦ－α水平低于空白对照组，ＩＬ－８与空白对照组无差异。提示红霉素可通过抑制哮喘患者肺泡巨噬细胞分泌ΤΝＦ－α、ＩＬ－８而起抗炎作用，且其抗炎机理与地塞米松不完全相同。