一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

去甲肾上腺素对大鼠腹腔巨噬细胞内IP_3、［Ca~（2＋）］_i和Ia抗原表达

本文应用细胞膜放射标记和离子交换层析法测定巨噬细胞（ＭФ）内肌醇－１，４，５－三磷酸（ＩＰ３）、用Ｃａ￣（２＋）指示剂的分光光谱法测定ＭФ内Ｃａ￣（２＋）浓度（［Ｃａ￣（２＋）］）、用ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测ＭФ表面Ｉａ抗原的表达，研究去甲肾上腺素（ＮＥ）对大鼠腹腔的ＭФ内ＩＰ３、［Ｃａ￣（２＋）］ｉ和ＭФ表面ｌａ抗原表达的影响。结果显示ＮＥ（１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ）可显著增高ＭФ中ＩＰ＿３含量（４４２±２２ｃｐｍ／１０￣６ｃｅｌｌｓ，对照组１０２±８ｃｐｍ／１０￣６ｃｅｌｌｓ，Ｐ＜０．０１）；ＮＥ可使ＭФ内［Ｃａ￣（２＋）］ｉ显著增高（３２２±７８ｎｍｏｌ／Ｌ，对照组９７±１７ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）；ＮＥ可显著增高ＭФ表面Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｅ抗原的表达（６４±８％、５８±６％，对照组５０±３％，４４±４％，Ｐ＜０．０１）。提示神经递质ＮＥ促进ＭФ表面Ｉａ抗原表达的作用可能是通过第二信使ＩＰ＿３和Ｃａ￣（２＋）介导的。     

癫痫患者PBMC分泌TNF-α、IL-6及HLA-Ⅱ类抗原表达的改变

采用ELISA方法检测了30例癫痫患者外周血单个核细胞（PBMC）经脂多糖（LPS）诱生后培养上清中的细胞因子水平。结果发现，癫痫患者PBMC分泌肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的水平分别为（5．705±0．702）μg／L和（177．60±54．50）ng／L，较正常对照组［分别为（3．118±0．373）μg／L和（78．67±6．47）ng／L］明显升高（均为P＜0．01），并且TNF－α与IL-6的升高存在明显的正相关（r＝0．705，P＜0．05）。应用Dot－ELISA及图像分析技术证实，癫痫患者PBMC表面人白细胞Ⅱ类抗原（HLA－Ⅱ抗原）的表达密度也显著高于正常对照组（P＜0．01）。结果提示，IL－6、TNF－α的分泌紊乱及HLA－Ⅱ类抗原的表达异常可能与癫痫的发病有关。     

小鼠凋亡相关新基因TFAR15的克隆和序列分析

目的克隆人白血病细胞凋亡相关新基因TFAR15的小鼠同源序列 ,并比较其在不同种属间的序列同源性。方法利用EST(expressedsequencetag)拼排、RT PCR、DNA序列测定和计算机分析技术 ,对小鼠TFAR15进行研究。结果首次成功地进行了小鼠TFAR15全长cDNA的克隆和序列分析 ,发现小鼠TFAR15与小鼠其它cDNA没有明显的同源性 ,因此提交GenBank并被收录 ,登录号为AF159368。小鼠TFAR15和人TFAR15在核苷酸水平上有92.3 %的同源性 ,在氨基酸水平上有高达98.6 %的同源性 ;同时发现小鼠TFAR15在氨基酸水平上与线虫C14A4.11蛋白质有38 %的同源性。功能区分析发现 ,小鼠TFAR15cDNA序列含编码212个氨基酸的开放读码框架 ,有2个可能的N 糖基化位点 ,3个可能的caseinkinaseII磷酸化位点 ,4个可能的PKC磷酸化位点 ,并且可能是一种胞浆蛋白(cytoplasmicprotein)。结论小鼠TFAR15是进化上高度保守的新基因 ,可能具有重要的功能。     

单纯分泌型TNF—α真核表达质粒的构建及表达细胞株的建立

膜结合的ＴＮＦ－α前体与分泌型ＴＮＦ－α生物学活性的不同。方法在克隆出ｍＴ－ＮＦ－α基因的基础上，我们采用ＩＬ－２信号肽编码序列置换ｍ－ＴＮＦ－α前导肽编码序列，构建出只产生分泌型ＴＮＦ－α的真核表达持 粒ｐＢＫ－ｓＴＮＦｍ，要至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中。     

膜稳定型TNF突变体的构建、表达及活性研究

目的：ＴＮＦ－α可以分泌型（Ｓ－ＴＮＦ）及其前体膜型（Ｍ－ＴＮＦ）两种活性形式同时地体内。为膜型ＴＮＦ的转基因应用,构建一种可表达于胞膜而不致酰妥的膜稳定型ＴＮＦ重组体（ｍＴＮＦｍ）。方法：在克隆Ｍ－ＴＮＦｃＤＮＡ的基础上,删除两型ＴＮＦ转换酶酶解部位的编码序列,构建出ｍＴＮＦｍ,并测序验证;建立只表达模型ＴＮＦ的夫核细胞株。结果：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析及活性测定结果表明,ｍＴＮＦｍ不再发生     

可溶性TRAIL分子的同源性模建

目的:为进一步研究其结构与功能的关系.方法:利用MSI公司的Insight Ⅱ分子模拟软件,参照TNF-α的三级结构信息文件,对TRAIL分子胞外区的R117到G281共165个氨基酸残基进行了同源性模建;并利用Profile-3D程序中的Inverse Fold-ing方法对模建结果进行可靠性分析.结果:模建出的TRAIL分子共含10个β-片层结构,且这些β-片层均对应于TNF-α中相应的β-片层区.这与同一家族的分子在结构保守区,特别是形成二级结构的保守区中序列组成变化不大的理论相吻合.而且验证模建结果的结果可靠性积分值为55.80.结论:模建结果基本正确,为TRALL的结构与功能研究提供了基础.     

新一代治疗用抗体——改型抗体

改型抗体是在嵌合抗体基础上构建的新一代人源化抗体,因其免疫原性进一步降低而适用于临床治疗。本文较为详细地介绍了改型抗体有关研究进展,包括改型抗体的产生与发展、设计和构建、优点及应用等。