大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后GAP-43及IGF-1促进神经元再生表达的实验研究

目的探讨Wistar大鼠脑缺血再灌注损伤后生长相关蛋白GAP-43抑制神经元凋亡和胰岛素样生长因子-I(IGF-1),促进神经元再生的可塑性表达机制。方法将80只成年健康雄性Wistar大鼠,分为GAP-43组和IGF-1组,每组各40只,并随机分为正常对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组,每组4只(n=4)。应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注动物模型,并采用免疫组织化学方法检测GAP-43与IGF-1在神经元凋亡中的表达情况,并进行图像分析。结果GAP-43组:缺血再灌注2h,海马、皮质区及纹状体区神经元GAP-43呈基础表达,6~48h表达逐渐增高,7d达高峰,14d达最低,P<005。与假手术组比较有显著性差异,P<005。IGF-1组:正常对照组及假手术组在海马区、皮质区及纹状体区IGF-1阳性标记出芽细胞呈基础表达。缺血再灌2hIGF-1表达明显增高,24h达高峰,P<0.05。48h恒定表达。3~14d仍维持高值表达,P<0.05。结论GAP-43与IGF-1参与抑制并促进神经元轴突再生的表达。     

脑缺血再灌注损伤后GAP-43蛋白的表达和意义

目的 探讨脑缺血再灌注损伤后生长相关蛋白-43（GAP-43）的表达对神经元轴突再生的可塑性变化.方法 成年健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组,每组各4只（n=4）.应用线栓法制备大鼠脑中动脉闭塞再灌注模型（MCAO）,采用免疫组织化学方法检测GAP-43的表达并观察神经元轴突再生的变化,并进行计算机图像分析.结果 缺血再灌注2h,海马、皮质区及纹状体区GAP-43呈基础表达,6h、12h、24h、48h表达逐渐增高,7d达高峰,P＜0.05,14d达最低表达,P＜0.05.与假手术组比较有显著性差异,P＜0.05.正常对照组无表达.缺血再灌注48h～7d损伤区域神经元轴突呈出芽征,发出突触纤维.结论 脑缺血再灌注损伤后GAP-43呈非特异性表达,并促进神经元的修复和再生.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡与Survivin和IGF-1表达的关系

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和IGF-1因子表达与细胞凋亡的关系.方法 将80只成年健康雄性Wistar大鼠,分为Survivin组和IGF-1组,每组各40只,并随机分为对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组,每组4只(n=4).应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO),采用免疫组织化学方法检测Survivin蛋白与IGF-1蛋白在神经元凋亡中的表达情况.结果 Survivin组:假手术组Survivin阳性神经元在海马、皮质区及纹状体区呈基础表达,缺血再灌注2h表达明显增加,48h达高峰,14d表达最低,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05).IGF-1组:正常对照组及假手术组IGF-1阳性神经元在海马、皮质区及纹状体区呈基础表达,缺血再灌2h时IGF-1表达明显增高,48h达高峰,3～14d仍维持高表达,与正常对照组及假手术组比较有显著性差异(p＜0.05).结论 内源性Survivin与IGF-1因子可能具有在抑制神经元凋亡的作用.     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤c—los表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后c-los表达的影响及与缺血时间关系，探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组（n=5）、对照组（n=25）、IGF-1治疗组（n=25），其中后2组按缺血再灌时间（6h、12h、1d、3d、7d）不同可分为5个亚组，每组5只，治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg／kg稀释为1ml的IGF-1，假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4％多聚甲醛经心脏灌注固定，取大鼠脑组织，应用免疫组化S-P法和HE染色检测c-fos蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果与对照组相比，治疗组大鼠脑组织c-fos表达明显减少，神经细胞坏死程度明显减轻。结论IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用，其作用机制包括降低c-fos的表达，发挥神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后胰岛素样生长因子－1的表达及意义

目的 观察胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在大鼠脑缺血再灌注后在缺血不同部位的表达及组织病理学改变，探讨其对神经元的保护作用。方法 72只清洁级、成年健康雄性SD大鼠随机等分为假手术对照（sham）组和脑缺血再灌注（CIR）组，CIR组缺血3 h后，按再灌注时间的长短不同分为0、6、24、48、72 h和7 d 6个亚组，每亚组均为6只大鼠。于各相应时间点以Longa法、Berderson法和平衡木法分别进行行为学评分后处死动物，制做脑组织病理切片，苏木精-伊红染色后观察组织病理学改变，采用免疫组织化学方法测定IGF-1的动态表达变化。结果 （1）大鼠在大脑中动脉阻断后手术对侧肢体存在不同程度瘫痪，24 h后行为学评分结果逐渐趋于稳定,根据观察大鼠病变对侧肢体出现不同程度的瘫痪，其功能异常程度与病变严重程度一致；（2）除假手术对照（sham）组外，其余各组在脑梗死后6 h局部可见少量散在炎性细胞浸润，梗死后48 h炎性细胞浸润明显增多，并持续到7 d；（3）IGF-1在sham组神经元中呈弱阳性表达（灰度值127±6）；CIR组各缺血时段IGF-1表达分别为147±5（0 h）、153±6（6 h）、170±7（24 h）、169±5（48 h）、150±6（72 h）和147±5（7 d）。其中，缺血3 h及缺血3 h再灌注6 h组中心区、半影区阳性细胞数均增多，表达增强；随再灌注时间延长，中心区表达接近正常水平，半影区阳性细胞数增多，表达呈持续升高趋势，再灌注24 h和48 h达高峰，72 h表达有所下降，但仍表达高水平。结论 高表达的IGF-1参与了脑缺血再灌注后内源性神经保护过程，IGF-1在缺血半影区与中心区的演变病理生理中起重要作用，说明IGF-1对缺血半影区的保护作用。     

运动训练对大鼠脑缺血再灌注后神经修复及GAP-43和Neurocan表达的影响

目的 观察运动训练对大鼠脑缺血再灌注后不同时间神经修复及GAP-43与Neurocan表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠72只,随机分成运动训练组、对照组、假手术组.采用线栓法制作一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,以神经功能缺损评分和Morris水迷宫试验进行神经功能评价,免疫组化法观察对脑缺血周围GAP-43与Neuorcan的表达.结果 与对照组比较,脑缺血再灌注后14d、21d,运动组的肢体运动及记忆功能明显恢复;缺血再灌注后7d,对照组缺血周围出现GAP-43阳性细胞,14d减少,21d、28d明显减少,运动组GAP-43表达在14d、21d、28d较对照组显著增加(P<0.05).Neurocan阳性细胞在对照组缺血再灌注7d出现,14d达高峰,21d、28d时下降;运动组Neurocan表达在缺血再灌注14d、21d、28d较对照组显著减少(P<0.05).结论 运动训练上调大鼠脑缺血区GAP-43表达与下调Neurocan表达,可能是其促进脑损伤区中枢神经修复的重要机制之一.     

环维黄杨星D对高血压大鼠脑缺血GAP-43与Neurocan表达的影响

目的 观察中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血一复流不同时间脑组织生长相关蛋白43(GAP-43)与神经粘蛋白(Neurocan)表达的影响.方法 采用环形银夹使SD大鼠双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.用免疫组化方法观察CVB-D对MCAO大鼠脑缺血2h后复流1、7、14、30d脑组织GAP-43与Neurocan表达的影响,并与生理盐水组对照.结果 缺血2h后再灌注1d,对照组缺血周围半暗区出现GAP-43阳性细胞,7d明显增多,14d减少,30d明显减少,各时间点阳性细胞数表达差异有显著性意义(P＜0.01);治疗组GAP-43阳性细胞数表达在各时间点较对照组显著增加(P＜0.01).Neuroean阳性细胞数表达对照组在缺血再灌注ld出现,7d明显增多,14d达高峰,30d时下降,但仍高于假手术组水平(P＜0.05);治疗组neurocan阳性细胞数表达在缺血再灌注7、14、30d则较对照组显著减少(P＜0.01).结论 CVB-D上调RHRSP脑缺血区GAP-43阳性细胞数表达与下调Neurocan表达的作用,可能是其促进脑损伤区中枢神经修复的重要机制之一.     

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区星形胶质细胞与突触可塑性的关系

目的 研究大鼠脑组织缺血再灌注后星形胶质细胞与GAP-43变化的关系.方法 建立局灶性脑缺血再灌注模型.72只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组,在各时间点处死取脑,应用免疫组化法检测海马CA1区GFAP、GAP-43的表达.结果 不同时间点缺血再灌注组GFAP、GAP-43表达均高于同时期假手术组(P＜0.01);缺血再灌注组GFAP与GAP-43高度相关(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注后,海马CA1区星形胶质细胞与GAP-43变化具有高度相关性.     

8溴-环磷酸腺苷对脑缺血再灌注大鼠PKA及GAP-43蛋白表达的影响

目的:观察脑室注射8-溴-环磷酸腺苷(8-B-cAMP)对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)表达的影响。方法:采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,将45只大鼠分为假手术对照组,缺血组(单纯脑缺血再灌注组)和8-B-cAMP组(脑缺血再灌注并脑室注射8-B-AMP)。用放免法测缺血周边区脑组织cAMP的含量,Westernblot(免疫印迹法)检测蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)的表达。结果:脑缺血组6h、24h cAMP的含量下降,GAP-43及PKA蛋白表达减少;8-B-cAMP治疗组脑组织GAP-43蛋白表达较缺血组增加,且这种变化与cAMP的含量及PKA蛋白表达增加相一致。结论:8-B-AMP能够增加PKA及GAP-43的表达从而促进脑缺血再灌注后的轴突再生。     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤c-fos表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后c-fos表达的影响及与缺血时间关系,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=5)、对照组(n=25)、IGF-1治疗组(n=25),其中后2组按缺血再灌时间(6h、12h、1d、3d、7d)不同可分为5个亚组,每组5只,治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg/kg稀释为1 ml的IGF-1,假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1 ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4%多聚甲醛经心脏灌注固定,取大鼠脑组织,应用免疫组化S-P法和HE染色检测c-fos蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果与对照组相比,治疗组大鼠脑组织c-fos表达明显减少,神经细胞坏死程度明显减轻。结论IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用,其作用机制包括降低c-fos的表达,发挥神经保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclin 1的表达变化

目的研究自噬相关蛋白Beclin 1在大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马中的表达情况,并探讨其意义。方法使用四动脉结扎法制作大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型,实验动物随机分为：假于术组和缺血再灌注组。存全脑缺血15min后,分别再灌注0min、30min、3h、6h、12h、24h、1d、3d,使用Western blot检测各个时阃点大鼠全脑缺血-再灌后海马自噬相关蛋白Beclin1的表达情况。结果与假手术组比较,大鼠全脑缺血-再灌注损伤后1d,海马区Beclinl蛋白的表达最强（P〈0．05）。结论大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclinl表达上调,表明脑缺血-再灌注损伤后海马区域的自噬活性上调．     

环维黄杨星D对高血压大鼠脑缺血GAP-43 mRNA表达与细胞损伤的影响

目的观察中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血再灌注不同时间脑组织生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA表达与细胞超微结构损伤的影响。方法采用环形银夹使SD大鼠的双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。用原位杂交等方法观察CVB-D对脑缺血2h后复流1d、7d、14d、30d不同时间点大鼠脑组织GAP-43mRNA表达、水含量、梗死面积百分率、行为学评分及细胞超微结构的干预作用。结果脑缺血2h复流后1d缺血区周围及海马可见GAP-43mRNA表达,7d明显增多至高峰,14d开始下降,30d时则明显减少,CVB-D治疗组在上述区域各时间点较对照组显著增加。脑缺血再灌注7d后,治疗组较对照组大鼠脑水含量及梗死面积显著降低,受损脑组织神经元和血管壁的超微结构亦明显改善。结论CVB-D对RHRSP缺血性脑细胞损伤有一定保护作用,其促进轴突的再生可能与上调脑组织GAP-43mRNA表达有关。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组（60只）和假手术组（15只）。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只;假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分（mNSS）、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组（P＜0.05）,脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义（P＜0.05）,而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平;与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。     

人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的探讨人工合成E-选择素对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性以及紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1含量表达的影响。方法 180只SD大鼠随机分为假手术组(用线栓法将线栓插入颈内动脉及颈外动脉分叉处,其余操作同模型组)、模型组(用改良Zea Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型)、治疗组(建模前10 min从股静脉缓慢注射人工合成E-选择素10 mg·kg-1)。每组分为3、6、24、48和72 h 5个时间点(每个时间点大鼠n=12),应用多功能酶标仪测量血脑屏障对伊文思蓝(EB)的通透性,应用免疫组化法和Western blot法测定咬合蛋白及闭锁小带蛋白-1的表达含量。结果与假手术组比较,模型组缺血再灌注损伤后3 h脑组织EB含量开始上升,6 h继续上升,24 h达峰值,48~72 h下降但仍高于初始值;治疗组各时间点EB含量均低于模型组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达都于缺血再灌注3 h开始下降,6 h继续下降,24 h达最低值,48~72 h上升但低于初始值;治疗组各时间点咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达含量均高于模型组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论人工合成E-选择素可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤造成的血脑屏障破坏,其机制可能与抑制紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1表达的减少有关。     

iASPP在大鼠脑缺血再灌注中的表达及其意义

目的 观察p53凋亡刺激蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）家族的抑制因子（inhibitorymember of the ASPP family,iASPP）在大鼠脑缺血再灌注后的表达及其意义。方法 48只清洁级、成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（8只）和脑缺血再灌注组（40只）。脑缺血再灌注组又分为缺血2h再灌注4h、12h、24h、48h和72h 5个时间点,其中每个时间点8只大鼠。苏木素-伊红染色测定脑梗死体积;原位末端转移酶标记技术检测半暗带细胞凋亡情况;免疫印迹法测定半暗带iASPP的表达变化。结果 脑缺血再灌注4h组和24h组的凋亡细胞阳性率与假手术组存在统计学差异（P <0.01）。脑缺血再灌注组的脑梗死体积百分比与假手术组相比具有统计学意义（P <0.05）。与假手术组相比,在脑缺血再灌注12h时iASPP表达开始下降（P <0.01）,再灌注24h降至最低（P <0.01）,再灌注48h开始回升（P <0.01）。结论 在脑缺血再灌注后,缺血半暗带凋亡细胞显著增多,iASPP表达下降,提示在脑缺血再灌注中iASPP的表达下降可能在细胞凋亡的发生中发挥重要作用,其表达上调可能具有神经保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑、肝中IGF-1的动态表达及其意义

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑、肝中的表达变化及其意义.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色方法检测大鼠脑缺血再灌注后2h、1d、3d、7d时脑、肝标本中IGF-1蛋白的含量.结果 正常脑组织有低水平的IGF-1表达,脑缺血再灌注后2h后表达即有明显升高,1d时持续升高,至3d时达高峰,7d时又有所回落,其表达主要位于大脑皮质区.经方差分析,脑组织中IGF-1蛋白含量脑缺血再灌注组与对应各时间点假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.05);假手术组各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05);脑缺血再灌注组1d和7d间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余脑缺血再灌注组各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05).正常肝组织中有极低水平IGF-1表达,脑缺血再灌注2h、1d、3d后肝组织中IGF-1蛋白含量与假手术组各对应时间点比较差异无统计学意义(p>0.05),脑缺血再灌注7d时与脑缺血再灌注组其余各时间点及假手术组对应时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脑缺血再灌注损伤后大鼠脑、肝中内源性IGF-1水平有明显变化,提示IGF-1的变化与脑缺血再灌注损伤有关联.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。