白花蛇舌草多糖的分离纯化及PMP柱前衍生高效液相分析

经热水提取、醇沉、大孔树脂分离、三氯乙酸脱蛋白、H2O2脱色、透析、DEAE-52纤维素和Sephadex G-200凝胶柱层析,建立了白花蛇舌草多糖的分离纯化方法。制备的ODI经紫外扫描及HPGPC测试,证实为单一纯品。ODI经PMP柱前衍生高效液相法测定,确定其由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成。     

响应面分析法优化白花蛇舌草水溶性多糖的提取工艺

[目的]利用响应面分析法(RSA)优化白花蛇舌草多糖的提取工艺。[方法]通过单因素试验考察提取温度、提取时间、料液比及提取次数4个因素对白花蛇舌草多糖提取率的影响,并在此基础上通过中心组合试验设计和响应面分析优化白花蛇舌草多糖的提取工艺。[结果]白花蛇舌草多糖的最佳提取工艺为:液固比为31.26∶1、提取温度为84.71℃、提取时间为2.07h,提取2次,在此条件下白花蛇舌草多糖提取量为6.721mg/g。[结论]采用RSA分析法优化得到的提取条件参数准确可靠,具有实用价值。     

T型关联度分析法优化白花蛇舌草中多糖提取工艺

目的优化白花蛇舌草多糖的提取工艺。方法用T型关联度分析法对白花蛇舌草中多糖提取工艺进行研究。结果根据浓缩液总多糖量关联度结果,各因素相关度大小顺序为X3>X2>X1,各因素与指标浓缩液总多糖的量呈正相关。结论将T型关联度分析法用于白花蛇舌草多糖提取工艺优化,简便、可行。     

白花蛇舌草不同提取工艺对抗肿瘤活性的影响

目的 为研制低毒高效的抗癌制剂，确定不同的白花蛇舌草提取物（汤剂，亲脂提取物，粗多糖）的抗肿瘤作用。方法 采用水提取法，醇提取法，脱脂水提醇沉法分别制备了白花蛇舌草汤剂，亲脂提取物和粗多糖，用S-180细胞植入小鼠作为模型。进行了抑制肿瘤的试验。结果 白花蛇舌草的水提液（汤剂）对S-180肿瘤细胞没有明显的抑制作用。白花蛇舌草水溶性的多糖和亲脂提取物对S-180肿瘤细胞具有显著的抑制作用；在抑瘤的同时，多糖部分具有对化学损伤的保护作用；水溶性的多糖和亲脂提取物合并给药并未显示协同抗肿瘤活性。结论 白花蛇舌草的脂溶性部位和多糖具有良好的抗肿瘤应用前景。分别提取比简单的水提取效果好。     

bcl—xl和p53在人肝癌Bel7402细胞中的表达及中药的干预作用

目的：从基因水平探讨白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel7402细胞凋亡诱导的作用及机制。方法：水提醇沉法提取白花蛇舌草多糖，人肝癌Bel7402细胞常规体外细胞培养，设定空白对照组、5-氟尿嘧啶阳性对照组、白花蛇舌草多糖组。HE染色法光镜下观察细胞形态改变，计算凋亡指数，采用MTT法检测白花蛇舌草多糖对癌细胞的生长抑制作用，RT—PCR法检测原癌基因bcl—xl、抑癌基因p53基因mRNA表达的变化。结果：白花蛇舌草多糖体外抑制人肝癌Bel7402细胞生长、促进细胞凋亡，凋亡指数达16．97％，以MTT显色法检测细胞抑制率达到61．5％，以RT—PCR半定量法检测，上调p53基因mRNA表达，降低bcl—xl基因mRNA表达，以上各指标与空白对照组相比均有显著差异。结论：白花蛇舌草多糖抑制人肝癌Bel7402细胞增长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因bcl—xl基因表达有关。     

生脉散多糖的组成及其初级结构分析

目的：研究复方中药制剂中多糖与单方多糖之间的组成关系，以及生脉散多糖的初级结构分析。方法：提取和精制了生脉散（SMS）单方药材红参、麦冬、五味子中多糖成分；然后采用Sephadex G-75柱层析分离纯化SMS多糖，得一浅黄色SMS多糖纯品，经紫外光谱、Sephadex G－200凝胶柱层析和琼脂糖凝胶电泳检测证明为均一组分。同时采用Sephadex G-200凝胶柱层析，测得SMS多糖组成。运用TLC法和HPLC法测定了SMS多糖纯品的单糖组成；并采用IR，高碘酸氧化和Smith降解推知其初级结构。结果：SMS多糖由红参多糖，麦冬多糖和五味子多糖所组成，其中含有葡萄糖、L－鼠李糖、D－木糖、D－果糖、半乳糖和乳糖等多种单糖，主要糖苷键为α－构型；多糖糖苷键以1→4连接键为主，1→3为次。结论：首次报道了生脉散多糖的组成及其初级结构分析。     

贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

目的：分离纯化贻贝多糖MP—I，并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法：采用热水提取，Sevage法除蛋白分离得粗多糖，DEAE-Sepharose、SepharoseCL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP—I。用GC及TLC法进行单糖组分的分析，用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究。结果：得到贻贝多糖纯品MP—I，多糖的得率为2．14％。单糖组分分析显示MP—I主要由葡萄糖组成，MP—I（0．5，0．1，0．02mg／m1）对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用（P〈0．01），其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30．55％和36．38％。结论：贻贝多糖MP—I主要由葡萄糖组成，对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用。     

大孔吸附树脂分离纯化白花蛇舌草总黄酮的研究

目的 优选大孔吸附树脂法分离纯化白花蛇舌草总黄酮的最佳工艺条件和参数.方法 以白花蛇舌草总黄酮含量及回收率为考察指标,采用单因素考察法对树脂种类、上样溶液浓度、pH值、上样量、洗脱剂浓度、用量和流速等进行考察.结果 最佳纯化工艺参数为:按0.4 g/mL(生药量/树脂量)的上样量配制浓度为0.2 g/mL的上样溶液,调其pH值为5.0,上AB-8型大孔吸附树脂柱,静置1 h,采用去离子水以3 BV/h的流速,洗脱8 BV,然后再用5 BV的70%乙醇洗脱,流速为2 BV/h,所得精制品中总黄酮含量为38.9%,转移率高达80%.结论 AB-8型大孔吸附树脂对白花蛇舌草总黄酮的纯化效果较好,适合工业化大生产.     

淡菜多糖的制备及体外抗肿瘤作用研究

目的:制备淡菜多糖,并对其体外抗肿瘤活性进行研究。方法:采用热水提取,Sevage-酶联用法除蛋白分离得到粗多糖,DEAE-Sepharose和Sepharose CL-6B柱层析纯化的方法得到淡菜多糖纯品。用MTT法对其体外抗HL-60肿瘤细胞活性的研究。结果:淡菜多糖纯品的获得率为5.48%,淡菜多糖在50mg/L、100mg/L、200mg/L浓度时对体外培养的HL-60肿瘤细胞均有不同程度抑制作用(P<0.05)。结论:淡菜中制备得到的淡菜多糖具有体外抑制肿瘤细胞生长的作用。     

茵陈中多糖组分的提取及分析

目的提取茵陈中多糖组分并对其结构进行分析。方法采用水提醇沉法提取茵陈粗多糖,采用离子交换技术对茵陈粗多糖进行纯化,采用HPLC技术及紫外光色谱技术对茵陈多糖进行组分及结构鉴定。结果经分离纯化,多糖纯品为白色粉末,茵陈中多糖的得率为4.12%,纯度为92.6%,紫外光谱分析发现,茵陈多糖中含有羟基、氢键、β型糖苷键、吡喃糖环等结构,HPLC分析结果显示茵陈多糖中包含葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、半乳糖及果糖等组分。结论茵陈中含有多种多糖组分,分子结构复杂,采用水提醇沉结合离子交换技术能够获得多糖纯品。     

人血浆脂蛋白（a)的分离纯化

目的：探讨Lp(a)分离纯化的方法,为Lp(a)的研究,检测方法的建立奠定基础。方法：应用密度梯度超速离心结合Sepharose 6B凝胶柱层析的方法分离纯化Lp(a)。结果：经预染脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳及双层免疫火箭电泳鉴定,所得Lp(a)为纯品,结论：密度梯度超速离心结合Sepharose 6B凝胶柱层析是较好的分离纯化Lp(a)的方法。     

紫外荧光法鉴别白花蛇舌草及两种常见混淆品

白花蛇舌草为茜草科植物。白花蛇舌草Oldenlandia diffusa(Wild)Roxb的干燥全草有清热解毒、利湿消痈等功效。近年用于癌症治疗，用量较大。笔者对本区抽样质检中发现，白花蛇舌草最常见的混淆品有两种，经鉴定为白花蛇舌草的同属植物伞房花耳草和纤花耳草，二者与白花蛇舌草的植物形态极为相似，差别甚微，单凭外观难以区分。目前，白花蛇舌草和纤花耳草的理化鉴别法采用薄层色谱法，齐墩果酸反应。该法操作繁琐，条件苛刻，一般基层单位较难掌握控制。本文采取紫外荧光法，以辅助鉴别白花蛇舌草及其混淆品。     

滇产白花蛇舌草生药学初步研究

目的：对滇产白花蛇舌草Oldenlondia diffusa（willd） Rond进行生药学研究。为建立白花蛇舌草的质量控制方法及开发利用提供生药学资料，为该药材的深入研究奠定基础。方法：采用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别的方法对白花蛇舌草进行生药学研究。结果：显微鉴别、理化鉴别结果与报道一致。结论：通过比较，滇产白花蛇舌草与报道的其他产地的白花蛇舌草组织结构相似，化学成分类似。     

白花蛇舌草及水线草的紫外谱线组法鉴别

目的：鉴别白花蛇舌草及其混淆品水线草。方法：应用紫外谱线组法，测试两在不同极性溶剂中的紫外吸收光谱。结果：两的水浸液、石油醚浸液及氯仿浸液的紫外吸收光谱几乎一致，而无水乙醇浸液白花蛇舌草在229nm波长处有一吸收峰，水线草在此处没有吸收峰。结论：无水乙醇浸液229nm波长处吸收峰的有无可作为白花蛇舌草及其混淆品水线草的鉴别特征。     

基于响应面分析法优化白花蛇舌草黄酮提取工艺

[目的]探讨利用响应面分析法(Response surface methodology,RSM)优化白花蛇舌草总黄酮的提取工艺的可行性。[方法]通过单因素试验考察液固比、提取温度、提取时间、乙醇浓度及提取次数等5个因素对白花蛇舌草总黄酮提取率的影响,并在此基础上通过中心组合试验设计和响应面分析优化白花蛇舌草总黄酮的提取工艺。[结果]当液固比为26.93、提取温度80℃、提取时间为110.21 min、乙醇浓度为77.77%时,白花蛇舌草总黄酮提取率最高,为0.94%。[结论]采用RSM法优化得到的提取条件参数准确可靠,具有实用价值。     

贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

目的:分离纯化贻贝多糖MP-Ⅰ,并进行体外抗肿瘤活性的研究.方法:采用热水提取,Sevage法除蛋白分离得粗多糖,DEAE-Sepharose、Sepharose CL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ.用GC及TLC法进行单糖组分的分析,用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究.结果:得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ,多糖的得率为2.14﹪.单糖组分分析显示MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,MP-Ⅰ(0.5,0.1,0.02 mg/ml)对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用(P＜0.01),其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30.55﹪和36.38﹪.结论:贻贝多糖MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用.     

南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究

目的对南蛇藤中扁蒴藤素提取纯化工艺进行研究。方法南蛇藤根粉经丙酮冷浸提取后,采用聚酰胺柱层析及硅胶柱层析进行分离纯化;以HPLC法测定产品中扁蒴藤素的含量,并以其为指标对分离纯化的主要工艺参数进行优化。结果将待分离的南蛇藤丙酮浸膏和聚酰胺（60～100目）按物料比0．02（质量比）装入层析柱中,常压下用体积分数75％的甲醇洗脱至洗脱液近无色,收集流分,浓缩后得到粗品,经硅胶柱层析进一步纯化,再经重结晶后纯度提高到98．0％以上。结论该工艺简单、成本较低,适于工业化。     

反相高效液相色谱法测定白花蛇舌草中熊果酸的含量

为建立白花蛇舌草中熊果酸含量的测定方法,采用正交试验法,对提取率的影响因素：乙醇浓度、溶剂用量、煎煮时间、煎煮次数以L9（34）正交表进行设计,用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）采用蒸发光闪射检测器对白花蛇舌草中熊果酸含量进行测定.结果,提取最佳条件为加入相当于生药材12倍量60%的乙醇,每次1h,共煎煮3次.白花蛇舌草中熊果酸平均百分含量为0.278%.该方法简便可靠,提取率高,适宜对不同产地白花蛇舌草中熊果酸含量测定时采用.     

白花蛇舌草与常见伪品的鉴别

从植物分类学角度对白花蛇舌草及其伪品进行比较鉴别,通过分析白花蛇舌草及其常见伪品分种依据,结合日常工作经验,确定白花蛇舌草的鉴别要点。通过真伪品对比研究,明确了白花蛇舌草与其近似物种主要的区别点,总结出白花蛇舌草的鉴别要点。     

白花蛇舌草的三效动态逆流提取工艺研究

目的 采用多指标综合评价和SPSS软件分析,研究白花蛇舌草三效动态逆流提取工艺条件。方法 以总黄酮、总多酚的量、清除DPPH自由基能力以及提取率为优化指标,采用正交实验设计,考察乙醇浓度、固液比 、提取温度和提取时间对优化指标的影响。结果 最佳提取工艺条件为：阶段提取时间为70 min,固液比为1∶14,乙醇体积分数为50%,提取温度为85 ℃。结论 实验室摸拟多效动态逆流提取白花蛇舌草的工艺研究可为企业大规模生产探索条件。