丁基苯酞对大鼠局灶缺血脑组织VEGF及bFGF表达的影响

目的研究丁基苯酞(NBP)对大鼠缺血脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠,用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立永久缺血模型。实验分为假手术组、模型对照组和NBP组,每组各20只大鼠。NBP组术后予以NBP灌胃,每天2次,每次25mg/kg;假手术组、模型对照组每天灌胃相应剂量食用植物油。局灶性缺血72h后行神经功能评分(Longa评分),然后断头取脑。TTC染色观察脑梗死体积,免疫组织化学(SP)方法观察梗死周围区、海马区和梗死核心区脑组织VEGF和bFGF蛋白的表达,原位杂交方法(POD法)检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。结果NBP组神经功能缺损评分低于模型对照组(P<0.05),NBP组在梗死周围区和海马区VEGF和bFGF蛋白,VEGF mRNA和bFGFmRNA表达均高于模型对照组和假手术组(P<0.05),在梗死核心区差异均无统计学意义(P>0.05)。结论NBP明显改善缺血后大鼠的神经功能,上调大鼠梗死周围区和海马区脑组织VEGF、bFGF蛋白和mRNA的表达,可能通过此机制治疗保护缺血脑组织。     

脂肪源性干细胞穴位注射对大鼠脑缺血/再灌注后海马中血管生成的影响

目的探讨脂肪源性干细胞(ADSC)穴位注射对大鼠脑缺血/再灌注损伤后海马中血管生成的影响。方法24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组(穴位注射生理盐水)和治疗组(穴位注射ADSC),每组6只。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,治疗组在大鼠大椎、双侧内关穴位注射PKH-26标记ADSC细胞悬液,对照组相同穴位注射同剂量生理盐水。缺血72 h后行神经功能损害评分(NSS),采用免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链反应检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白和mRNA表达,免疫组织化学法进行CD34染色计数微血管密度(MVD)。结果脑缺血后72 h,治疗组大鼠海马区可见PKH-26标记的ADSC表达,而其他3组未发现红色荧光信号。模型组、对照组和治疗组NSS评分高于假手术组(P<0.05);与模型组比较,对照组和治疗组NSS评分显著降低(P<0.05),其中治疗组NSS评分低于对照组(P<0.05)。假手术组海马区中未见VEGF蛋白和mRNA表达,模型组、对照组和治疗组VEGF蛋白和mRNA表达及MVD较假手术组显著增加(P<0.05),其中治疗组VEGF蛋白和mRNA表达及MVD较模型组和对照组显著增高(P<0.05),而模型组和对照组3个指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论穴位注射ADSC对大鼠脑缺血/再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与促进海马VEGF表达,增加MVD有关。     

丁基苯酞对大鼠缺血脑组织NGF及BDNF表达的影响

目的 研究丁基苯酞对大鼠缺血脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠,用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立永久性缺血模型,按照Zea-Longa的方法对动物的神经功能进行评分,选取1～3分的大鼠按随机数字表随机分成2组:丁基苯酞治疗组(A组),大脑中动脉永久缺血对照组(B组),每组各20只.A组于术后予以丁基苯酞,每天2次,每次25 mg/kg,B组给予相应剂量食用油灌胃给药,72 h后行神经功能评分,然后处死,分别取脑梗死周围、海马区和梗死区脑组织作免疫组化染色检测BDNF、NGF蛋白表达变化,原位杂交检测BDNF mRNA、NGF mRNA的表达.结果 丁基苯酞治疗组神经功能评分(1.35±0.81)低于对照组(1.75±0.55),差异有统计学意义(P=0.04).丁基苯酞治疗组BDNF和NGF蛋白BDNF mRNA和NGF mRNA在梗死区周围和海马区表达均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),在梗死区差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 丁基苯酞可上调大鼠梗死区周围和海马区缺血脑组织中BDNF和NGF的表达,并可能通过此机制起到保护作用.     

SHH信号通路对MCAO模型大鼠脑缺血后的保护机制分析

目的:探讨人重组Shh蛋白(SHH)信号通路对大脑中动脉梗死(MCAO)模型大鼠脑缺血后的保护机制。方法:SPF级SD大鼠36只随机分为假手术组、模型组和SHH组,每组各12只。大鼠MCAO模型制备采用线栓法制成,侧脑室注射外源性SHH蛋白激活SHH信号通路。神经功能依据Longa标准评分进行评价;采用TTC测定大鼠梗死体积;采用激光多普勒血流仪,记录左侧大脑中动脉供血区域血流变化值;实时荧光定量PCR法(RT-PCR)测定VEGF和Ang-1mRNA表达;采用Western blot测定VEGF和Ang-1蛋白表达。结果:模型组和SHH组大鼠神经功能评分高于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠神经功能评分低于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠梗死体积高于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠梗死体积低于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠脑血流值低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠脑血流值高于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠VEGF和Ang-1相对表达量低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠VEGF和Ang-1相对表达量高于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠VEGF和Ang-1蛋白表达灰度值低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠VEGF和Ang-1蛋白表达灰度值高于模型组(P<0.05)。结论:SHH信号通路可改善MCAO大鼠神经功能,降低梗死体积,通过上调VEGF和Ang-1表达促进血管新生。     

电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究电针对脑缺血/再灌注大鼠梗死侧海马区血管内皮生长因子(VEGF)、内源性神经干细胞(NSCs)及学习记忆功能的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及电针组,每组10只动物,模型组及电针组大鼠采用Zea Longa线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型,电针组于制备模型后24 h给予电针治疗,连续治疗14 d后,采用RT-PCR法检测梗死侧海马区VEGF mRNA的表达,免疫组化法检测梗死侧海马区内源性神经干细胞的增殖,水迷宫检测其学习记忆能力.结果 与模型组比较,电针治疗组大鼠脑梗死侧海马区VEGF mRNA表达明显增强,内源性神经干细胞增殖显著增加,而逃避潜伏期明显缩短,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 电针可能通过增加脑梗死侧海马区VEGF的表达而促进血管新生,进而诱导内源性神经干细胞的增殖,从而改善其学习记忆能力.     

大株红景天注射液对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮损伤的影响

目的观察大株红景天注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血管内皮损伤的影响,并探讨其作用机制。方法 Sprague Dawley大鼠80只,其中24只未造模型大鼠作为对照组;另56只大鼠采用线栓阻塞大脑中动脉法建立脑缺血再灌注损伤模型,术后选择其中造模成功的48只大鼠随机分为模型组和观察组,每组24只。观察组大鼠经尾静脉注射大株红景天注射液2 m L·kg~(-1),每日1次;对照组及模型组大鼠经尾静脉注射等量生理盐水。14 d后断头处死各组大鼠,每组取8只大鼠采用酶联免疫吸附试验检测脑组织血管内皮生长因子(VEGF)、受体胎肝激酶-1(FLK-1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白,另取8只大鼠采用反转录聚合酶链反应测定其脑组织VEGF mRNA、FLK-1mRNA、HIF-1αmRNA表达,余下8只大鼠采用氯化三苯基四氮唑染色法测定脑缺血梗死区比例。结果对照组、模型组、观察组大鼠全脑质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组大鼠脑组织无缺血梗死;模型组、观察组大鼠的脑缺血梗死区质量及梗死比例均显著高于对照组(P<0.05);观察组大鼠脑缺血梗死区质量及梗死比例均显著低于模型组(P<0.05)。模型组和观察组大鼠脑组织VEGF、FLK-1、HIF-1α蛋白及其m RNA表达与对照组比较均显著增高(P<0.05);观察组大鼠脑组织VEGF、FLK-1、HIF-1α蛋白及其m RNA表达与模型组比较均显著增高(P<0.05)。结论大株红景天注射液可以升高大鼠缺血脑组织VEGF、FLK-1、HIF-1α蛋白及其m RNA表达,有助于诱导缺血部位血管内皮分化与再生,促进脑缺血区动脉侧支循环重建,维持成熟血管的完整性,增加脑组织供血,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。     

黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注后海马血管生成的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ对大鼠缺血/再灌注损伤后海马中血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、尼莫地平对照组、黄芪皂苷Ⅳ组。缺血2h再灌注72h后,各组进行神经功能评分,采用Westernblot及免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,免疫组化法进行CD34染色计数MVD。结果黄芪皂苷Ⅳ组神经功能损害评分低于模型组和尼莫地平对照组(P<0.05);与尼莫地平对照组和模型组比较,黄芪皂苷Ⅳ组可明显上调VEGF蛋白表达及MVD(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与促进海马VEGF蛋白表达,增加MVD有关。     

胰岛素样生长因子-1对局灶性脑缺血大鼠神经功能评分及碱性成纤维生长因子表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-1）对脑缺血大鼠神经功能及碱性成纤维生长因子（bFGF）蛋白和bFGF mRNA表达的影响.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和IGF-1治疗组,制备脑缺血模型,分别于脑缺血后12h、24 h、3d、7d采用改良mNSS评分量表评价大鼠的运动、感觉、平衡功能及反射等神经功能,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF mRNA表达的变化.结果 在12h、24 h、3d、7d各时间点,IGF-1治疗组的mNSS评分值[（8.67±1.21）分,（7.50±1.52）分,（4.33±1.03）分,（3.67±1.37）分]均低于脑缺血组[（11.0±1.26）分,（9.83±1.33）分,（7.83±1.17）分,（7.17±1.72）分]（P＜0.05）.IGF-1治疗组各时间点bFGF蛋白表达均较脑缺血组升高（P＜0.05）,尤其是脑缺血后12h有统计学意义（P＜0.01）.IGF-1治疗组各时间点bFGF mRNA表达均较脑缺血组高（P＜0.05）,脑缺血后24 h有统计学意义（P＜0.01）.结论 IGF-1可促进脑缺血大鼠的神经功能恢复,可能与调控bFGF蛋白和bFGF mRNA表达有关.     

丁苯酞对急性缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用及其机制

目的：探讨丁苯酞对急性缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用,阐明其对急性缺血性脑卒中的治疗机制。方法：48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组（局灶性脑缺血大鼠模型）和丁苯酞组（局灶性脑缺血大鼠模型+丁苯酞治疗）,每组16只。对各组大鼠进行神经症状评分测定,对大鼠脑组织进行HE染色,采用氯化三苯基四氮唑（TTC）测定脑梗死面积百分率,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定大鼠脑组织中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、核转录因子κB抑制蛋白α（IκBα）和核转录因子κB（NF-κB）亚单位p65（NF-κB p65）蛋白及mRNA表达水平。结果：假手术组大鼠脑组织无梗死灶形成,无神经功能缺损症状;与模型组比较,丁苯酞组大鼠脑梗死面积百分率和神经功能评分明显降低（P<0.01）。假手术组大鼠脑组织细胞结构完整、分布均匀;模型组大鼠脑组织大部分细胞坏死,胞浆破裂,细胞核破裂、凝缩;丁苯酞组大鼠脑组织少量细胞肿胀和坏死。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中HGF、VEGF、MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白及mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）,IκBα蛋白及mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠脑组织中HGF、VEGF、MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白及mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）,IκBα蛋白和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：丁苯酞可改善急性缺血性脑卒中大鼠的神经功能,减少脑梗死面积,其机制可能与丁苯酞升高脑组织HGF水平,并通过干扰NF-κB信号通路而促进脑血管形成有关。     

依达拉奉对大鼠缺血脑组织NGF及BDNF表达的影响

目的 研究依达拉奉对大鼠缺血脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠,采用改良的Zea-Longa法建立大脑中动脉局灶缺血模型(MCAO).实验分为模型对照组和依达拉奉组,每组各20只大鼠.依达拉奉组予以腹腔内注射依达拉奉,1次/d,每次3mg/kg;模型对照组每天注射等量生理盐水.72h后行神经功能评分,然后处死,分别取脑梗死周围、海马区和梗死区脑组织作免疫组化染色检测BDNF、NGF蛋白表达变化,原位杂交检测BDNFmRNA、NGFmRNA的表达.结果 依达拉奉组神经功能缺顿评分低于模型对照组(p＜0.05).依达拉奉治疗组BDNF和NGF蛋白BDNFmRNA和NGFmRNA在梗死区周围和海马区表达均高于模型对照组,差异有统计学意义(p＜0.05),在梗死区差异均无统计学意义(p＞0.05).结论 依达拉奉可上调大鼠梗死区周围和海马区缺血脑组织中BDNF和NGF的表达,并可能通过此机制起到保护作用.     

大鼠大脑中动脉梗塞模型的同步辐射活体血管影像学研究

目的通过同步辐射微血管造影研究大鼠大脑中动脉梗塞脑缺血模型。方法20只300～350gSD大鼠平均分为两组：4．0线组和4—0线包裹硅橡胶组。施行大脑中动脉缺血手术后,立即进行同步辐射血管成像。结果单纯用4—0线组大鼠大脑中动脉没有发生完全阻塞,大脑前动脉和颈内动脉的尚有部分血供;4—0线包裹硅橡胶组,大鼠大脑中动脉均成功阻塞。10％大鼠具有两侧的孔型大脑中动脉（2／20只）。栓线进入深度17mm能够有效阻塞这种异常的大鼠大脑中动脉。结论包裹硅橡胶的4—0线栓能够成功造成300—350g大鼠大脑中动脉缺血,单纯4—0栓线无法完全造成这一体重范围内的大鼠缺血。由于同步辐射可以进行大鼠的脑血管造影,因此可适合研究和大鼠线栓法缺血模型以及评价大鼠脑部血管变异。     

大鼠局灶性脑缺血模型及其与C反应蛋白变化的关系

目的 改进大鼠大脑中动脉梗塞法,建立更接近于临床缺血性脑卒中及其再扩灌注的可靠模型,并观察其与血甭Ｃ反应蛋白变化的。方法沿大鼠右颈内动脉插入长２．１￣２．３ｃｍ直径０．２０５ｍｍ的单股尼龙丝,直达大脑中动脉起始部开口,阻断其血流,观察大鼠神经病学改变及脑组织形态学变化,并测定血清Ｃ反应蛋白含量。结果 术后大鼠表现特殊体态及典型追尾征,６ｈ大脑中动脉供血区出现缺血性外观（ＴＴＣ染色）及相应组织学变化     

外源性VEGF和bFGF基因治疗大鼠脑缺血疗效的比较研究

目的通过观察和比较单独或联合进行外源性血管r8皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因治疗大鼠局灶性脑缺血的疗效,从而寻找出安全有效的基因治疗方法。方法用线栓加环扎方法建立SD大鼠大脑中动脉持续性闭塞（MCAO）模型。36只大鼠模型随机分为正常对照组、假手术组、VEGF基因治疗组、bFGF基因治疗组、基因联合治疗组和MCAO组,治疗组于术后24h内将分别表达VEGF和bFGF基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体rAAV—VEGF和rAAV—bFGF通过大鼠侧脑室输注。术后14d取脑,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测脑缺血边缘区脑细胞凋亡数,HE染色观察脑组织坏死情况。结果与MCAO组比较,VEGF基因治疗组、bFGF基因治疗组、基因联合治疗组脑缺血边缘区脑细胞凋亡数明显减少（P〈0．05）,脑组织坏死体积缩小（P〈0．05）,其中以基因联合治疗组更为显著。结论外源性VEGF和bFGF基因联合比VEGF或bFGF基因单独治疗大鼠脑缺血的效果更优。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究

目的改进大鼠大脑中动脉梗塞法，建立更接近于临床缺血性脑卒中及其再灌注的可靠模型。方法沿大鼠右颈外动脉入栓，经颈内动脉到达大脑中动脉，入栓线长15～18mm，直径0．205mm，阻断其血流，观察大鼠神经病学改变及脑组织形态学变化。结果术后大鼠表现出特殊体态及典型追尾征，6h后大脑中动脉供血区出现缺血性外观（TTC染色）及相应组织学变化（HE染色），模型成功率近83％。结论本方法既可构成缺血性病灶，又能形成再灌注模型，具有可逆性重复操作的特点，其神经病学与形态学的特殊表现，可作为鉴定模型的可靠依据。     

脑缺血后肝细胞生长因子的表达

目的 研究大鼠局灶性脑缺血后肝细胞生长因子(HGF)表达的动态变化.方法 采用尼龙线栓法制作大鼠局灶性永久性大脑中动脉闭塞模型,用免疫组织化学方法观察了缺血后3h、6h、24h、7d、14d时,HGF表达的动态变化.结果 大鼠缺血后3h,缺血侧脑组织开始出现HGF表达,7d时明显增多,14d时密集表达.各时间点HGF的表达主要集中在梗死灶周围.结论 脑缺血后可上调HGF在大脑的表达,HGF参与了缺血性脑损伤的病理发展及修复过程.     

Hyperbaric oxygen preconditioning induces neuroprotection against is chemia in transient not permanent middle cerebral artery occlusion rat model

Ｉｎ 1990 ,Ｋｉｔａｇａｗａｅｔａｌ1　ｆｉｒｓｔｆｏｕｎｄｔｈａｔｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｇｅｒｂｉｌｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｃｏｕｌｄｄｅｖｅｌｏｐｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｉｓｃｈｅｍｉｃｎｅｕｒｏｎａｌｄａｍａｇｅａｆｔｅｒａｂｒｉｅｆｐｅｒｉｏｄｏｆｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｉｓｃｈｅｍｉａ Ｔｈｉｓｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ,ｃａｌｌｅｄ“ｉｓｃｈｅｍｉｃｔｏｌｅｒａｎｃｅ” ,ｈａｓｄｒａｗｎａｔｔｅｎｔｉｏｎｂｅｃａｕｓｅｔｈｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｗｉｌ…     

通心络对脑缺血再灌注损伤后神经巢蛋白及VEGF表达的影响

目的 探讨神经巢蛋白(nestin)和血管内皮细胞因子(VEGF)在脑缺血再灌注损伤后脑组织内的表达变化关系及中药通心络的影响.方法 采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型.分别应用荧光免疫组织化学方法 、RT-PCR法观察缺血后3、7、14、21 d缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ)、海马齿状回(HDG)神经巢蛋白、缺血病灶周围脑组织内VEGFmRNA的表达变化及二者关系.给予模型大鼠大、小剂量通心络灌胃,观察其对不同时间段上述指标表达变化的影响.结果 神经巢蛋白阳性细胞荧光强度值、VEGF mRNA含量随缺血再灌注时间的延长,表达均增加,第7、14、21天组与假手术组比较,差异具有显著性(P<0.05).经通心络大小剂量治疗后,各组nestin阳性细胞荧光强度值、VEGF mRNA含量均高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05),而VEGF mRNA含量除第3天无差别(P>0.05)外,第7、14、21于均高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P>0.05),而以大剂量组效果更为显著.结论 大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ、HDG区神经干细胞反应和增殖,其机理可能与其促进缺血灶周围的VEGFmRNA表达增加有关.     

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织神经生长因子表达的影响。方法SD大鼠48只随机分4组：假手术组、缺血再灌注模型组、GSP大剂量组、GSP小剂量组，每组12只，应用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，术后观察动物神经行为学变化并进行神经病学评分，采用免疫组织化学染色检测各组半暗带区颞顶部脑皮质神经生长因子的表达。结果神经功能评分显示模型组有明显的神经功能缺损症状，GSP用药组神经功能评分明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）；与模型组比较，各GSP组神经生长因子的表达明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论原花青素可上调脑缺血再灌注后缺血脑组织内源性神经生长因子的表达，而起到脑保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血血管内皮生长因子表达的研究

目的 研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor VEGF）在局灶性脑缺血中不同时相的表达，以探索血管内皮生长因子在局灶性脑缺血中的作用。方法 制作大鼠自体血栓性MCAO模型，在不同时点用免疫组化染色观察血管内皮生长因子表达情况。同时观察局灶性脑缺血后血管形成情况。结果 VEGF在局灶性脑缺血后6h表达增强。24h达高峰，在1周、2周恢复到对照水平。VEGF主要在缺血半暗带神经元、胶质细胞及血管内皮细胞表达；在缺血后48h半暗带周边出现血管增生，1周后达高峰。结论 在局灶性脑缺血早期VEGF在神经细胞、胶质细胞、血管内皮细胞等均有表达，可促进缺血半暗带的血管增生，对改善缺血半暗带血供有重要作用。