HERG钾通道在肿瘤细胞的表达与阿霉素化疗敏感性的关系及红霉素的调节作用

背景与目的:HERG钾通道在许多肿瘤组织中表达,而在肿瘤起源的相应正常组织中却是低表达或不表达。本研究探讨HERG钾通道蛋白在肿瘤细胞的表达及其与阿霉素化疗敏感性的关系,同时观察红霉素的生化调节作用。方法:采用Westernblot法检测HERG钾通道蛋白在肿瘤细胞的表达情况,经过质粒的分离和纯化、基因转染技术、MTT法研究HERG钾通道蛋白的表达与阿霉素的抗肿瘤作用的关系,同时采用MTT法检测红霉素的抗肿瘤作用及其与阿霉素联用时的协同作用,荧光显微镜观察阿霉素进入肿瘤细胞的情况。结果:HERG在不同肿瘤细胞的表达量不同,表达较高的HT鄄29细胞对阿霉素敏感性比表达较低的A549细胞弱。将herg基因转染入表达较低的A549细胞后,从IC50来看,阿霉素的增殖抑制作用明显降低。红霉素能明显抑制HT鄄29细胞的增殖,与阿霉素联用能协同抑制HT鄄29细胞的增殖。herg转染入A549细胞后,阿霉素在肿瘤细胞内的含量基本没有改变。结论:HERG钾通道蛋白的表达与阿霉素的化疗敏感性可能呈一种负相关。红霉素对HERG高表达的HT鄄29细胞增殖具有明显的抑制作用,而对HERG低表达的A549细胞基本无作用,且与阿霉素联用存在明显的协同作用。     

EAG1和 HERG 在卵巢癌中的表达及其意义

目的探讨EAG1和HERG在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测75例卵巢癌组织、42例卵巢良性肿瘤组织和10例正常卵巢组织中EAG1和HERG的表达情况。结果卵巢癌组EAG1和HERG的阳性表达率显著高于良性组和正常组(P均<0.01);卵巢癌低分化、有淋巴结转移组EAG1的阳性表达率高于高中分化组和无淋巴结转移组(P均<0.05);卵巢癌有淋巴结转移组HERG的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论 EAG1和HERG在卵巢癌的发生发展中可能起重要作用。     

钾离子通道与肿瘤细胞的关系

钾离子通道是细胞膜上种类最多的一类离子通道,广泛分布在包括肿瘤细胞在内的多种细胞,在细胞的多种生理活动中发挥重要作用,与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关.现综述近年有关钾离子通道在肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的研究进展.     

钾离子通道与肿瘤细胞的关系

钾离子通道是细胞膜上种类最多的一类离子通道,广泛分布在包括肿瘤细胞在内的多种细胞,在细胞的多种生理活动中发挥重要作用,与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关.现综述近年有关钾离子通道在肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的研究进展.     

电压门控钾离子通道Kv1.5与肿瘤

电压门控钾离子通道Kv1.5广泛表达于多种类型肿瘤并参与肿瘤细胞增殖、凋亡、周期等过程.某些抗肿瘤药物可通过影响Kv1.5通道的表达进而影响肿瘤的生物进程.Kv1.5通道是肿瘤治疗的新靶点,研究Kv1.5通道可以进一步了解肿瘤细胞发生、发展的机制,并有助于研制出新的抗肿瘤药物,为肿瘤治疗提供新的更好的方法.     

HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

目的：检测HERG（human ether-à-go-go-related gene）钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA（siRNA）沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为：HERG-siRNA 处理为实验组,control-siRNA 处理为对照组,未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示,实验组[（75．34±4．45）％]与对照组[（100．60±5．31）％]和空白组[（100．00±5．66）％]的细胞增殖水平相比,差异有统计学意义（t ＝3．64,P ＝0．007;t ＝3．43,P ＝0．009）。克隆形成结果示,实验组（134．30±11．82）与对照组（225．30±11．56）和空白组（232．80±12．21）的克隆形成数相比,差异有统计学意义（t ＝5．51,P ＝0．002;t ＝5．80,P ＝0．001）。流式细胞凋亡结果示,实验组[（28．10±2．21）％]与对照组[（9．36±2．42）％]和空白组[（10．92±2．51）％]的早期凋亡所占比例相比,差异有统计学意义（t ＝5．72,P ＝0．005;t ＝5．14,P ＝0．007）。Tunel 法结果示,实验组[（31．57±2．08）％]与对照组[（10．35±1．82）％]和空白组[（7．96±0．88）％]的凋亡指数相比,差异有统计学意义（t ＝7．69,P ＝0．002;t ＝10．48,P ＝0．001）。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1（cIAP-1）、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Bcl-2和 Survivin 的活性,同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白（IκB）α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达,其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

钾离子通道改变对肺癌细胞系A-549细胞转移能力的影响及其机制研究

 目的　研究钾离子通道拮抗剂和激动剂对肺癌细胞系A-549转移能力的影响及相关机制。方法　采用重建基底膜趋化运动和侵袭实验分别研究钾离子通道改变对A-549细胞趋化运动侵袭的影响;采用免疫荧光技术从形态学上观察钾离子通道改变对A-549细胞骨架的影响;Western blotting检测Ezrin和HuR的表达。结果　钾离子通道拮抗剂格列本脲（10.0 μmol／L）可以抑制A-549细胞迁移和穿过基底膜,趋化运动的抑制率为（57.18±5.46）%,侵袭抑制率为（54.92±3.27）%,同时使细胞内微管结构紊乱,微丝形态趋于规整,且格列本脲组Ezrin和HuR低表达;钾离子通道的激动剂吡那地尔（100 μg／ml）的作用则相反。结论　钾离子通道改变影响了人类肺腺癌细胞系A-549的趋化运动和侵袭能力,其机制可能是钾离子通道功能变化影响了细胞骨架相关蛋白而改变了细胞骨架的形态结构,从而影响A-549细胞转移能力。     

miR-96通过靶向HERG1对胰腺癌细胞系PANC-1放疗敏感性的影响

HERG₁也被称为KCNH₂或KvlLl,是快速延迟整流的电压门控钾离子通道家族成员之一^[1],有越来越多的证据表明HERG₁在多种肿瘤细胞中高表达^[2-6],对肿瘤细胞增殖、调亡、分化及侵袭密切相关,而在相应正常细胞中不表达^[4-7]。miR-96胰腺癌组织中表达下调,其靶基因HERG₁可通过调控相关信号通路影响细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力。有关研究表明过表达miR-96的胰腺癌细胞PANC-1增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力都明显减弱,细胞凋亡增加^[8]。本研究以PANC-1细胞为研究对象,研究miR-96对其放射敏感性的作用,以期为胰腺癌的临床治疗提供新思路。     

不同肿瘤细胞株三种糖基转移酶家族的差异表达谱研究

目的采用低密度cDNA表达阵列研究人不同肿瘤细胞中的糖基转移酶基因家族的表达谱差异。方法TOPO—TA克隆获得硫酸基（磺基）转移酶、半乳糖基转移酶和N．乙酰氨基葡萄糖转移酶三种糖基转移酶基因家族的cDNA文库，PCR获得目的基因，逆转录标记不同肿瘤细胞株的cDNA探针，化学发光法表达阵列对人不同肿瘤细胞进行表达谱分析。结果建立了硫酸基（磺基）转移酶、半乳糖基转移酶和N一乙酰氨基葡萄糖转移酶三种糖基转移酶家族的cDNA文库，并制成低密度cDNA表达阵列。通过阵列分析发现：在不同肿瘤细胞中，除SHG44和PCI2等神经细胞未检出1-GlcNAc6ST表达外，其余几种肺癌、胃癌和白血病肿瘤细胞株中均有高水平的表达；其它糖基转移酶在不同的肿瘤细胞中也存在差异表达，与目前文献报道的肿瘤细胞的糖基化特征基本一致。结论在不同肿瘤细胞中，糖基转移酶基因家族表达谱有差异，特别是磺基转移酶1-GlcNAc6ST高水平表达更值得关注，其表达差异可能与肿瘤的发生、发展有着一定的相关性。     

基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗对Hela细胞的杀伤作用研究

目的：构建基于人乳头状瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）16型的肿瘤疫苗，并检测其对Hela肿瘤细胞的杀伤活性。方法：利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白，在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP和白喉毒素（Diphtheriatoxin，DT）A链（DT—A）的双表达质粒，形成伪病毒疫苗。透射电镜观察病毒样颗粒（virus-likeparticle，VIJP）的结构，并转染Hela肿瘤细胞，荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率和对Hela肿瘤细胞的杀伤能力。结果：透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP，在转染Hela肿瘤细胞后，荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达和对Hela肿瘤细胞的杀伤作用。结论：基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗能成功转染Hela肿瘤细胞并产生杀伤活性，为肿瘤的基因治疗提供了依据。     

shRNA干扰HERG钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤

目的：探讨发卡结构小片段RNA（small hairpin interfering RNA，shRNA）干扰人ERG（human ether-α—go-go—related gene，HERG）钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤的疗效和作用机制。方法：用真核转录载体mU6pro构建针对herg基因的发卡状RNA干扰质粒（shRNA-herg）。18只BALB／c裸小鼠皮下接种成神经细胞瘤SH—SY5Y细胞，建立裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤模型，当瘤体积达到100mm^3时随机分成3组，分别为生理盐水组（Ⅰ）、对照质粒组（Ⅱ）、干扰质粒组（Ⅲ）。各组瘤内分别注射生理盐水、对照质粒、干扰质粒，以后每7d注射1次，连续15d。观察各组肿瘤生长情况，RT—PCR测定肿瘤组织herg基因mRNA含量变化，免疫组化检测肿瘤组织中HERG钾通道蛋白变化。结果：经治疗后，第Ⅲ组肿瘤生长受到明显抑制，Ⅱ、Ⅲ组抑瘤率分别为3．04％和29．78％（P〈0．05）。肿瘤组织内berg基因mRNA含量、HERG钾通道蛋白，Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组表达减弱。结论：构建的shRNA干扰质粒可通过靶向性抑制herg基因及其编码的HERG钾通道蛋白的表达，有效地抑制人成神经细胞瘤的生长。     

增殖诱导配体及其在肿瘤发生发展中的作用

增殖诱导配体（APRIL）是近年来发现的肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员。通过对APRIL的基因蛋白结构、组织表达、信号传导通路的研究，发现它在多种肿瘤细胞内表达，并对肿瘤细胞的增殖和抗凋亡发挥重要作用。抑制APRIL与其受体结合、阻断其信号传导通路可明显抑制肿瘤细胞的增殖从而为肿瘤的治疗提供新途径。     

砷剂诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

砷可诱导多种肿瘤细胞凋亡，其主要作用机制是通过影响肿瘤细胞生长周期、癌基因和抑癌基因的表达、改变细胞内氧化还原状态等途径来诱导肿瘤细胞凋亡。现就砷剂诱导肿瘤细胞凋亡的机制进行综述。     

趋化因子与肿瘤的定向转移

肿瘤转移预后不良，其形成涉及许多病理机制。近来研究表明，肿瘤细胞表达特定的趋化因子受体，而其转移好发部位高表达相应的配体，后者对肿瘤细胞有化学趋向性，由此形成了肿瘤细胞定向转移的“归巢”理论。这一理论提示，通过干预受体与配体问的相互作用，可能成为抗肿瘤转移治疗的新途径。     

致癌受体EGFRⅧ通过微囊泡在肿瘤细胞间传递

人脑胶质细胞瘤细胞表达表皮生长因子受体的一种变异形式，称之为EGFRⅧ。这种受体的表达使得肿瘤细胞拥有了转化表型，侵袭能力增加。一个脑胶质细胞瘤的患者其EGFRⅧ性的细胞只占极少数，但是大部分的肿瘤细胞却都拥有恶性侵袭的能力，其机制尚不清楚。     

组织蛋白酶D与人低分化鼻咽癌单克隆株转移的关系

作者采用免疫组化技术检测了鼻咽癌裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中组织蛋白酶Ｄ的表达，并探讨其与转移的关系。结果表明：不同代之间裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中组织蛋白酶Ｄ的表达有差异。其中第四代裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞组织蛋白酶Ｄ的表达明显高于原代移植瘤及原代细胞（Ｐ＜０．０５）。裸鼠移植瘤中组织蛋白酶Ｄ的表达与肿瘤转移率成正比。提示组织蛋白酶Ｄ的表达与肿瘤转移关系密切。     

乳腺癌survivin和TK1的表达及其与腋窝淋巴结转移的关系

目的 探讨乳腺癌survivin蛋白的表达及其与肿瘤细胞增生和腋窝淋巴结转移的关系。方法收集乳腺癌60例，其中有腋窝淋巴结转移的28例，用免疫组化染色检测survivin和胞质胸腺嘧啶核苷激酶(cytosolic thymidinekinase，TK1)蛋白的表达情况。结果 ①乳腺癌组织中有survivin蛋白的表达，其阳性表达率为64．9‰②survivin蛋白表达阳性的乳腺癌细胞TK1的标记指数明显高于survivin蛋白表达阴性者。③无腋窝淋巴结转移的乳腺癌survivin蛋白阳性表达率明显低于有腋窝淋巴结转移者。结论 乳腺癌组织中有survivin蛋白的表达，且其表达与肿瘤细胞增生和腋窝淋巴结转移有关。     

血管内皮生长因子反义cDNA对人肺癌抑瘤作用的体外实验研究

目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)反义cDNA对肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响，并探讨其对肿瘤细胞生长、增殖过程的作用。方法：以脂质体介导VEGF反义cDNA转染肺癌细胞，通过原位杂交法检测细胞VEGF mRNA．免疫组化法检测细胞VEGF蛋白和PCNA增殖活性，ELISA法检测分泌型VEGF蛋白，MTT法测定细胞生长率．研究VEGF反义cDNA对肿瘤细胞的作用。结果：转染后肺癌细胞内源性VEGF mRNA和蛋白的表达受抑．细胞生长及增殖受抑。结论：VEGF反义cDNA转染可降调节肿瘤细胞的VEGF生成并抑制其生长与增殖．     

非经典HLA I类分子（HLA—G和HLA—E）在人肿瘤细胞系的表达及IFN—γ的调节作用

目的：探讨非经典HLA I类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用。方法：用RT-PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA-G和HLA-E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA-G和HLA-E mRNA的表达；12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA-G3的mRNA表达，经IFN-γ处理后，Karpas出现HLA-G1/G5和HLA-G2/G4的表达，宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA-G3 mRNA的表达；12株肿瘤细胞中有9株表达HLA-E mRNA。结论：肿瘤存在HLA-G和HLA-E mRNA的表达，IFN-γ可促进HLA-G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA-G和HLA-E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。     

人CD46、CD55和CD59与肿瘤免疫逃逸及免疫治疗

膜结合补体调节蛋白CD46、CD55和CD59在肿瘤细胞膜上表达或过表达,保护肿瘤细胞免受免疫系统的攻击,成为肿瘤细胞免疫逃逸的途径之一.如何下调肿瘤细胞表面三者表达或抑制其功能以增强其对补体依赖的细胞毒作用的敏感性备受关注.