siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的：观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法：采用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞（siRNA-eIF4E组）,同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果：与空白对照组及空质粒组比较, siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调（P<0.01）,Hep-2细胞生存率下降（P<0.05）,细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加（P<0.05）,凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调（P<0.05）。结论：siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

eIF4E基因下调对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响

目的应用化学合成的siRNA干扰乳腺癌Bcap37细胞真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiationfactor 4E,eIF4E)的表达,探讨其对乳腺癌细胞凋亡和生长周期的影响。方法化学合成eIF4E基因的siRNA,转染人乳腺癌Bcap37细胞,采用Western blotting法及RT-PCR法检测转染前后Bcap37细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达;应用流式细胞技术检测转染前后细胞周期的变化;AO/EB双染色法检测细胞凋亡;酶标仪检测caspase-3活性。结果 RT-PCR与Western blot-ting法检测结果显示,转染eIF4E-siRNA-3#组细胞eIF4E基因的mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.01);eIF4E-siRNA转染组G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异显著(P<0.05);转染eIF4E-siRNA可诱导细胞凋亡,caspase-3活性亦增强。结论 eIF4E-siRNA可下调eIF4E基因在乳腺癌Bcap37细胞中的表达水平,诱导细胞凋亡。     

细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2通过干预线粒体功能促进宫颈癌细胞增殖机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶亚基(CKS)2通过干预线粒体功能促进宫颈癌细胞增殖的机制。方法:对数生长期的宫颈癌SiHa细胞分为三组:空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染Hs-NC siRNA)与CKS2 siRNA组(转染Hs-CKS2 siRNA),采用MTT法检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞侵袭及转移,线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位,qPCR检测CKS2与线粒体整合蛋白2(Mfn2) mRNA水平,Western blot法检测Mfn2、CKS2蛋白水平。结果:转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的细胞增殖指数、细胞侵袭及转移指数低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05);转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的细胞线粒体膜电位水平高于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05);转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的CKS2与Mfn2 mRNA、蛋白相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05)。结论:抑制CKS2的表达可通过干预线粒体膜电位水平,抑制宫颈癌细胞Mfn2的表达,从而抑制宫颈癌细胞...     

SHIP2对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响及对放疗增敏的机制

目的:探究抑制SHIP2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及SHIP2的表达情况;探究靶向抑制SHIP2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏的可能机制。方法:(1)应用小分子干扰RNA技术抑制喉癌Hep-2细胞SHIP2的表达,实验分为5组:空白对照组(Control)、阴性对照组(Negative)、干扰组1(siRNA1)、干扰组2(siRNA2)、干扰组3(siRNA3)],RT-qPCR、Western Blot检测转染24 h后干扰效果;(2)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,分别给予0,4 Gy X射线(SSD=100 cm)处理,CCK-8检测细胞增殖活力,AnnexinPI-FITC/PI双染检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,RT-qPCR、Western Blot检测SHIP2 mRNA和蛋白的相对表达量;(3)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,实验分4组(空白对照组Control、单纯放射组4 Gy、干扰组siRNA-SHIP2、联合处理组siRNASHIP2+4 Gy)。Western Blot检测SHIP2、pSHIP2、pAKT、caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量。结果:(1)转染24 h后干扰组2 siRNA2下调作用最显著,较空白对照组SHIP2 mRNA下调达60. 1%(P<0. 05)、SHIP2蛋白下调达57. 8%(P<0. 05);与空白对照组对比,siRNA2抑制SHIP2表达后喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低,凋亡增加(P<0. 05)。(2)与0 Gy组比较,放射组各组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05);4Gy射线处理后SHIP2 mRNA、SHIP2和pSHIP2蛋白的相对表达量较空白对照组降低(P<0. 05)。(3)与空白对照组、siRNA-SHIP2组和4 Gy组比较,联合处理组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05),SHIP2和pSHIP2、pAKT的相对表达量降低(P<0. 05),caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量升高(P<0. 05)。结论:靶向抑制SHIP2可与放射治疗协同抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖活力,促进细胞凋亡和细胞周期G2期阻滞,从而发挥放射增敏的作用。其可能机制是靶向抑制SHIP2表达通过下调PI3K/Akt信号通路活性,进而解除对下游促凋亡因子caspase3和周期阻滞因子P21和P27的抑制作用,与放射线协同增强对喉癌Hep-2细胞的杀伤作用,从而发挥放疗增敏作用。     

靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况。结果各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（〈0.05）,survivinmRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivinmRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力.结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织(t=6.88,P=0.005).PCDGF在喉鳞癌组织中高表达.PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05),细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05),细胞侵袭数显著低与空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05).结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡.     

UbcH10基因沉默联合紫杉醇干预对NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响。方法化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照。以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组。结果Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P0.01)。MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P0.05)。siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性。     

Effects of UbcH10 gene silencing combined with paclitaxel treatment on proliferation and apoptosis of NCI-H226 cells

目的 观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响.方法 化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照.以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组.结果 Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P＜0.01).MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P＜0.05).siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P＜0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性.     

SPARCL1基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteines like 1,SPARCL1)基因对肝癌SMMC 7721细胞增殖与凋亡的影响。方法: 将肝癌SMMC 7721细胞随机分为5组,即空白对照组,pIRES2 ZsGreen组,pIRES2 ZsGreen SPARCL1组,阴性 siRNA组和SPARCL1 siRNA组,空白对照组不转染,其余4组分别转染pIRES2 ZsGreen空质粒、pIRES2 ZsGreen SPARCL1、阴性 siRNA及SPARCL1 siRNA;蛋白质印迹法检测SPARCL1蛋白表达,同时联合荧光显微镜检测转染效果;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。 结果： 蛋白质印迹和荧光镜结果同时证实转染效果良好。MTT结果显示5组细胞抑制率差异有统计学意义(F=55.45,P＜0.01),pIRES2 ZsGreen SPARCL1组增殖抑制率明显高于其余4组(P＜0.05);SPARCL1 siRNA组细胞增殖抑制率低于其余4组(P＜0.05)。流式细胞结果显示pIRES2 ZsGreen SPARCL1组凋亡率明显高于其余4组 (P<0.05);SPARCL1 siRNA组凋亡率明显低于其余4组(P＜0.05)。结论： 过表达SPARCL1抑制肝癌细胞SMMC 7721生长和促进凋亡,沉默SPARCL1则反之。     

人凋亡诱导因子C-末端截短体AIFΔ1-480的表达对MCF-7细胞的影响

目的观察人亡诱导因子(AIF)C-末端端截短体AIFΔ1-480重组基因表达对MCF-7细胞生物学行为的影响。方法利用脂质体将重组质粒PcDNA3.0-FDT-AIFΔ1-480瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,通过Western blot、流式细胞术、MTT、集落形成试验、线粒体膜电位测定等方法,检测目的基因在细胞中的表达及其对转染细胞凋亡相关分子cytC表达的变化及细胞增殖、凋亡等的影响。结果重组质粒PcDNA3.0-FDT-AIFΔ1-480转染肿瘤细胞后AIF蛋白表达明显增加;重组质粒能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖;上调细胞色素C的表达;减低线粒体膜电位,正常细胞、空载体组和重组质粒的线粒体膜电位(Δψ)分别为4.69±1.07、3.86±1.52和1.51±0.79 mV,重组质粒组与对照组相比,线粒体膜电位明显下降(P<0.05);并诱导细胞凋亡,正常细胞组、脂质体组、PcDNA3.0组、重组质粒组细胞凋亡率分别为:(9.2±5.1)%、(15.4±4.5)%、(20.5±3.9)%、(32.2±6.0)%,重组质粒组与对照组相比,细胞凋亡明显增加(P<0.05)。结论人AIF C-末端端截短体可通过诱导cytC从线粒体中释放促进MCF-7细胞凋亡。     

慢病毒介导的miRNA-197-3p-siRNA对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响

 【摘要】目的 通过构建慢病毒介导(lentivirus,LV)的miRNA-197-3p-siRNA,探讨下调miRNA-197-3p对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响。方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-197-3p-RNAi-LV3转染喉鳞状细胞癌Hep-2。Hep-2细胞设为干扰组 (miRNA-197-3p-siRNA,MI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和空白对照组(blank,B组);分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-197-3p的表达情况;用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-197-3p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-197-3p的表达。CCK8实验显示细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05)。流式细胞仪检测表明转染后对Hep-2细胞周期及细胞凋亡均无明显影响(P>0.05)。结论 miRNA-197-3p-siRNA通过下调miRNA-197-3p的表达,可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

siRNA干扰沉默bFGF基因对肺腺癌A549增殖和凋亡的影响

目的利用小分子RNA干扰沉默碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因的表达,探讨其对肺腺癌A549细胞Oct-4表达、细胞增殖和凋亡的影响。方法将A549细胞分为转染干扰质粒组(干扰质粒组)、转染阴性对照质粒组(阴性对照组)和未转染质粒组(空白对照组)。采用Real-Time PCR检测质粒干扰后A549细胞bFGF基因mRNA表达的变化;Western Blot检测Oct-4蛋白表达的变化;CCK-8比色分析法绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化及Annexin-V-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Real-Time PCR结果显示质粒干扰后A549细胞中bFGFmRNA表达下降(P<0.01);Western Blot显示干扰组A549细胞Oct-4蛋白表达下降(P<0.01);生长曲线结果显示干扰质粒组细胞增殖活力下降明显(第2～4天P<0.0 5,第6～7天P<0.01);流式细胞仪检测凋亡结果显示细胞凋亡增加(P<0.0 5)。结论靶向bFGF基因的小分子RNA可以抑制bFGF表达;bFGF基因被抑制后下调Oct-4表达,细胞凋亡增加,增殖能力下降。     

蛋白激酶CK2α对喉癌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2α对人喉癌细胞凋亡和超微结构的影响及其可能机制.方法 用脂质体转染法分别将蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2α及非特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-cont转染人喉癌Hep-2细胞.Western印迹法检测转染细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测转染细胞凋亡率的变化,透射电镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 转染psiRNA-hH1neo-CK2α质粒后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达明显下降(P＜0.01).和未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成.psiRNA-hH1neo-CK2α转染细胞凋亡率明显高于未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组(25.66%±0.83%比3.66%±0.43%、5.18%±0.22%,均P＜0.05);与其他2组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞bcl-2蛋白表达较低(相对吸光度比值为0.20±0.09 vs 0.72±0.16、0.56±0.11,均P＜0.01),Bax蛋白表达较高(相对吸光度比值为0.81±0.17 vs 0.26±0.12、0.33±0.17,均P＜0.01),bcl-2/Bax较低(0.25±0.05 vs 2.76±0.21、1.70±0.22,均P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α与喉癌细胞凋亡密切相关,该作用可能与bcl-2/Bax降低有关,蛋白激酶CK2α可能是一个有潜力的喉癌治疗靶点.     

中药艾迪诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的 研究中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用.方法 四亚基噻唑蓝(MTT)法测定中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长的抑制作用,荧光显微镜观察人喉癌细胞Hep-2的凋亡状况,流式细胞仪技术(FCM)观察人喉癌Hep-2细胞周期及凋亡,荧光定量PCR法测定人喉癌细胞Hep-2环氧化酶(COX-2)的表达量.结果 不同浓度的中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长均有抑制作用,并有明显的时间和剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析显示中药艾迪能减少G1期的比例,增加G2和S期的比例,并能诱导细胞凋亡.中药艾迪作用人喉癌细胞Hep-2 24h后其环氧化物酶-2的表达量升高,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中药艾迪在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,其机制可能是诱导细胞凋亡.     

异甘草素诱导人宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制的研究

目的 研究异甘草素(ISL)抑制宫颈癌Hela细胞增殖作用及促进细胞凋亡的作用机制.方法 采用 0.025、0.050、0.100、0.200、0.300、0.400 mg/mL浓度ISL处理HeLa细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色 法检测HeLa细胞增殖;采用流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡情况;应用罗丹明123染色法检测HeLa细胞线粒体跨膜 电位的变化;采用RT-PCR检测6种不同浓度ISL对Bcl-2、P53、P21、E6 mRNA基因表达的影响.结果 (1)MTT 检测结果显示:随着ISL浓度增加,对不同时间段HeLa细胞的抑制作用明显增加(P<0.05);(2)流式细胞仪 检测:相比于空白对照组,随着ISL浓度逐渐增加,Hela细胞凋亡率明显升高(P<0.01),且凋亡率呈剂量依赖性;(3)罗丹明123荧光染色检测结果:随着ISL浓度逐渐增加,细胞线粒体膜电位下降(P<0.01);(4)RT-PCR 结果显示:随着ISL浓度逐渐增加,E6、Bcl-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而P53、p21 mRNA表达水平越 升高(P<0.05).结论 ISL通过下调E6、Bcl-2的表达和上调P21、P53基因的表达来抑制宫颈癌细胞的增殖.     

特异性沉默α-catulin基因的表达对舌鳞状细胞癌TSCCA细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨α-catulin基因对人舌鳞状细胞癌(TSCC)TSCCA细胞增殖和凋亡的影响,阐明α-catulin在TSCCA细胞生物学行为中的作用。方法: 取对数生长期的TSCCA细胞,分为α-catulin-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组。RT-PCR法检测各组TSCCA细胞中α-catulinmRNA相对表达水平;Western blotting法检测各组TSCCA细胞中α-catulin蛋白的相对表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测各组TSCCA细胞凋亡率。结果: RT-PCR检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulinmRNA相对表达水平降低(P<0.01),且随着时间的相对延长,α-catulinmRNA相对表达水平逐渐降低,72h时其相对表达水平低于24和48h时(P<0.01)。Western blotting法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。MTT法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞生长抑制率升高(P<0.001)。流式细胞术检测,与空质粒对照组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞凋亡率升高(P<0.001)。结论: 特异性沉默α-catulin基因的表达可抑制TSCC的TSCCA细胞的增殖,促进其凋亡。     

辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统联合放射对Hep-2细胞的生长抑制作用

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)自杀基因系统联合放射对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,观察HRP/IAA系统是否具有放射增敏性。方法:将构建成功的pcDNA3.1-HRP转染Hep-2细胞,RT-PCR及Western blotting分别在mRNA和蛋白质两个水平检测其表达;分别以0.5 mmol/L IAA、2 Gyγ-射线及两者联合作用于转染HRP后的Hep-2细胞,实验分为4组:A、对照组;B、加药组;C、放射组;D、加药及放射组。克隆形成实验观察HRP/IAA系统对细胞存活分数的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERSF2;流式细胞仪分析各组细胞周期时相的变化;AnnexinV-FITC试剂盒比较各组细胞凋亡率。结果:转染pcDNA3.1-HRP的Hep-2细胞,RT-PCR和Western blotting能检测到HRP的表达;加药及放射组比单纯放射组细胞存活分数降低,SERSF2为1.302;与A组相比,B、C、D组G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率均显著增高(P<0.01);D组与B组相比,G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01);D组与C组比较,G0/G1期、G2/M期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01)。结论:HRP/IAA系统与放射联合应用能更有效地抑制Hep-2细胞生长、诱导其凋亡,HRP/IAA系统具有放射增敏性。     

miRNA-29c在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响

目的 观察miRNA-29c 在喉癌组织和喉癌Hep-2 细胞株中的表达情况,研究其与肿瘤临床分期、淋巴转移及预后等临床病理参数的关系,并探讨miRNA-29c 对喉癌Hep-2 细胞增殖、侵袭的影响。 方法 选取2006 年1 月～2016 年12 月在我院确诊的86 例喉癌患者的蜡块标本,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测喉癌组织和癌旁正常喉黏膜上皮组织中miRNA-29c 的表达,并分析其与临床病理学特征的关系;通过Q-RT-PCR 检测转染后每组细胞中miRNA-29c 的表达;CCK-8 检测细胞增殖能力变化情况;Transwell 实验检测跨膜细胞数量的变化。 结果miRNA-29c 在喉癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达量与不同临床分型、TNM分期、淋巴转移密切相关（P<0.05）;转染miRNA-29c 模拟物组细胞中的miRNA-29c 表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）,并可抑制喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭力（P<0.01）。 结论 在喉癌中,miRNA-29c 是一个抑制性miRNA,miRNA-29c 低表达可能是影响喉癌预后的重要因素;过表达miRNA-29c 可显著降低喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭能力,miRNA 表达水平的下调可能参与了喉癌的发生发展及侵袭转移过程。