溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达

目的 通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用.方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7d造模,第3组予5％ DSS溶液自由饮用14 d造模.取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达.结果 ①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达;②造模7d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达;③造模14d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加.结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制.     

A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究

目的通过分析A族链球菌(GAS)感染巨噬细胞后TLR2及TLR4的活化情况,以此来研究GAS感染后产生炎症反应的信号通路,为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。方法 GAS及热灭活GAS以感染复数(MOI)为100∶1感染小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞后1,2,4,6 h,提取总RNA采用real-time PCR技术检测TLR2/4的表达情况;同时GAS及热灭活的GAS注射C57小鼠腹腔,24 h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白,利用Western blot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进行分析。结果巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后1 h活化不明显,但作用2 h后TLR2及TLR4表达明显升高(P<0.05),4 h时达到高峰,6 h后开始降低。热灭活GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与GAS感染比较未见到统计学差异(P>0.05),但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异(P<0.05)。结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2及TLR4受体,其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活,TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

TLR2和TLR4在大鼠光滑念珠菌肺部感染中的表达及意义

目的：研究Toll样受体2（TLR2）和TLR4在光滑念珠菌肺部感染大鼠中的作用。方法将36只大鼠分为3组,每组12只：对照组（A组）、未免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（B组）及免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（C组）。每组分别在造模成功后第1、3天各处死大鼠6只,观察肺组织病理变化,用逆转录PCR（RT-PCR）法检测肺组织 TLR2、TLR4 mRNA的表达、酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定TNF-α蛋白水平。结果 A组肺组织正常;B组部分肺泡塌陷、炎症细胞浸润,未见孢子或菌丝;C组大部分肺泡塌陷,部分扩张,大量炎症细胞浸润、并有孢子菌丝聚积。第1、3天 TLR2 mRNA和 TNF-α蛋白表达水平C组明显高于其他两组（P＜0．01）,B组高于A组（P＜0．05）;C组第3天 TLR2、TLR4 mRNA ,TNF-α表达水平高于第1天（P＜0．05,P＜0．01）,且TLR4表达高于A组（P＜0．05）。结论 TLR2和 TNF-α可能参与光滑念珠菌肺部感染的发生发展,TLR4可能起协同作用。     

结直肠腺瘤及结直肠癌中TLR7 TLR9及MyD88的表达

目的：通过检测不同组织类型的腺瘤中Toll样受体7、9与MyD88的表达情况,探讨其在结直肠癌发生发展中的临床意义。方法：采用免疫组织化学EnVision法,检测50例增生性息肉、62例管状腺瘤、46例绒毛状腺瘤、26例混合型腺瘤、42例结直肠癌中TLR7、TLR9及MyD88的表达情况,其中8例绒毛状腺瘤与5例混合型腺瘤局灶发生癌变。结果：TLR7、TLR9的表达随着结直肠黏膜上皮病变程度增加,其阳性表达率均先升高后降低（P〈0.05）。TLR7、TLR9蛋白表达均与腺瘤的病理类型及异型性相关（P〈0.05）,而与年龄、性别及部位无关（P〉0.05）。MyD88的表达随着腺上皮病变程度增加,其阳性表达率逐级升高（P〈0.05）。MyD88蛋白表达仅与腺瘤的异型性相关（P〈0.05）,而与年龄、性别、部位及病理类型均无关（P〉0.05）。结直肠腺瘤组织TLR7、TLR9两者的表达均与MyD88表达呈负相关（P〈0.05）。结论：TLR7、TLR9两因子的表达与MyD88蛋白的表达在结直肠肿瘤的发生发展中可能具有拮抗抑制作用,其联合检测能为结直肠肿瘤的早期临床诊断和治疗提供有利的生物学信息。     

运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响

目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.     

TLR2和TLR4在单肺通气麻醉中的表达

目的:研究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在单肺通气麻醉过程中的表达变化并探讨其临床意义。方法:选择胸科肺癌行肺叶切除手术30例,随机分为两组,A组(n=11,双肺通气),B组(n=19,单肺通气组),收集开胸后/单肺通气后15(T1),30(T2),45(T3),90(T4)min血清,采用ELISA法检测两组血清中IL-8,TNF-α的表达;收集切除标本后的肺组织,电子显微镜观察细胞形态病理变化,采用RT-PCR检测TLR2mRNA和TLR4mRNA,免疫组化检测肺组织TLR2和TLR4蛋白的表达。结果:电镜检测表明:两组均发生肺细胞炎症反应,其中B组发生炎性反应明显比A组显著;两组TLR2mRNA和TLR4mRNA表达比较,B组的TLR2mRNA和TLR4mRNA表达明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组中的IL-8,TNF-α浓度在各时点均有不同程度的升高,其中组内比较T4时点的IL-8,TNF-α浓度明显高于T1时点,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组间比较,在T4时点IL-8,TNF-α浓度B组明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),其余时点表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B两组免疫组化比较,B组的TLR2和TLR4阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:单肺通气期间,随着时间的延长,炎症反应更为显著,TLR2、TLR4表达上调并参与炎症反应。     

TLR4、TLR9基因多态性与浅表性膀胱癌复发的关系

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、Toll样受体9（Toll-like receptor 9,TLR9）基因多态性与浅表性膀胱癌肿瘤复发之间的关系。方法 选取2013年3月~2017年3月笔者医院收治的300例膀胱癌患者为研究对象,其中初发膀胱癌150例、复发膀胱癌150例,同期选取100例体检健康者作为对照组,利用限制性内切酶片段长度多态性PCR （polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术检测TLR4、TLR9基因多态性,分析TLR4 rs10759932、TLR9 1486T/C、C2848T基因多态性与浅表性膀胱癌肿瘤复发之间的关系。结果 3组TLR4 rs10759932、TLR9 1486T/C、C2848T基因多态性分布均符合Hardy-Weinberg平衡。与对照组比较,初发膀胱癌组及复发膀胱癌组TLR4rs10759932基因多态位点T/C、C/C基因型频率及C等位基因频率明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,T/T、T等位基因明显升高（P<0.05）,且复发膀胱癌组TLR4rs10759932基因多态位点T/C、C/C基因型频率及C等位基因频率明显低于初发膀胱癌组（P<0.05）,T/T、T等位基因明显高于初发膀胱癌组（P<0.05）。3组TLR9 1486T/C、C2848T基因多态性比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TLR4基因rs10759932多态性与浅表性膀胱癌肿瘤复发密切相关,该基因位点T/C、C/C基因型及C等位基因可能会降低浅表性膀胱癌复发风险。     

乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义

目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L;(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

慢性牙周炎吸烟患者外周血单核细胞TLR 受体的表达及意义

目的探讨慢性牙周炎吸烟患者外周血CDl4+单核细胞TLR2和TLR4的表达及意义。方法选择慢性牙周炎吸烟患者(PS组)20例、慢性牙周炎非吸烟患者(PNS组)31例及健康不吸烟者20例(NS组),应用流式细胞仪(FCM)全血双色免疫荧光直标法检测外周血单核细胞的TLR2和TLR4表达水平,结果以CDl4+细胞TLR相对平均荧光强度(mfi)和TLR相对阳性细胞百分率(rpcp)表示,对各组进行对比研究。结果①慢性牙周炎吸烟患者(PS组)CDl4+单核细胞TLR2表达的mfi及rpcp均明显低于慢性牙周炎非吸烟患者组(PNS组)和健康组(NS组);PNS组TLR2的mfi明显低于NS组,而rpcp与NS组相比差异无统计学意义。②PS组CDl4+单核细胞TLR4表达的mfi明显低于PNS组,与NS组相比差异无统计学意义,而rpcp低于PNS组和NS组;PNS组TLR4表达的mfi明显低于NS组,而rpcp与其相比无统计学意义。结论慢性牙周炎吸烟患者外周血单核细胞TLR表达显著降低,其先天性免疫可能受到抑制。     

痛风泰颗粒对TOLL样受体基因TLR2、TLR3的调控作用

目的:分析痛风泰颗粒剂对Toll样受体基因TLR2、TLR3的调控作用,进而为解释该药物治疗痛风的作用机制提供理论依据。方法:首先痛风大鼠造模,获得原代炎性关节滑膜细胞。其次,将15只正常的SD大鼠随机分为生理盐水组,戴芬溶液组,低剂量、中剂量、高剂量痛风泰颗粒组,制备5种含药血清。最后,分别用上述5种血清刺激培养的炎性关节滑膜细胞,8 h后检测5组细胞TLR2和TLR3基因mRNA的表达。结果:经过不同条件的刺激后,TLR2基因只有中剂量痛风泰颗粒组的mRNA相对表达量与生理盐水组比较,具有显著差异(P0.05),但总体趋势不明显;TLR3基因的mRNA相对表达量无任何趋势及表达差异(P0.05)。结论:Toll样受体基因TLR2和TLR3可能并不是痛风泰颗粒剂治疗痛风的关键基因,更有价值的靶基因或调控因子有待于被发现。     

基于TLR2与TLR4研究刺血加艾灸疗法对急性痛风性关节炎大鼠

目的 通过观察刺血加艾灸疗法对急性痛风性关节炎大鼠的疗效及对TLR2与TLR4的影响;方法 将40只Wistar雄性大鼠随机分为随机分为正常对照组(Normal control group,N),秋水仙碱阳性对照组(Colchicine group,C),刺血加艾灸组(moxibustion combined with pricking blood group,MP)及模型组(Model group,M)每组10只,除正常组外其余各组大鼠于右后踝关节注入0．2ml尿酸钠混悬液,复制成痛风性关节炎大鼠模型。分别在造模时、造模后24h及灌胃后24h测量右后足肿胀度,灌胃3天后,从腹主静脉取血,采用RT-PCR法检测TLR2mRNA与 TLR4mRNA的表达水平;结果 与N组大鼠相比较较,造模后各组足肿胀度明显增高,TLR2mRNA与 TLR4mRNA的表达水平均明显上调;而经治疗后MP组和C组的足肿胀度,TLR2mRNA与 TLR4mRNA的表达水平均明显下调,MP组较C组下调更为明显;结论 刺血加艾灸能够提高急性痛风性关节炎大鼠疗效,其制可能是降低了血浆中TLR2与 TLR4的表达。     

心理应激对大鼠氧化应激的影响及TLR4的作用

目的 观察心理应激对大鼠氧化应激和炎症反应的影响,探讨心理应激在动脉粥样硬化病变形成中的作用、机制.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NC)、无应激组(NS)、生理应激组(PS)和心理应激组(ES),每组各10只,并制作心理应激模型.于末次应激结束后采集血标本,检测血清SOD活力和MDA含量、放免法测定血清TNF-α水平; HE染色观察大鼠主动脉形态学变化；免疫组化法测定主动脉TLR4表达.结果 (1)血清学指标显示ES组大鼠较其他三组出现了明显的氧化应激损伤(血清SOD活力明显下降而MDA含量明显升高,均P＜0.05)和炎症反应(血清TNF-α升高,P.＜0.05)；同时HE染色发现ES组大鼠主动脉出现早期动脉粥样硬化性改变；(2)ES组大鼠主动脉TLR4表达较其他三组明显上调(P＜0.05).结论 氧化应激有可能在AS形成的早期,通过激活TLR4释放TNF-α等炎性因子促进血管壁的炎症反应,进而导致AS形成.     

TLR4在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤（ALI）在临床上以顽固性低氧血症、弥漫性肺浸润和肺微血管通透性增高引起的肺水肿为主要表现,是肺部失控的炎症反应。TLR4是识别脂多糖（LPS）的受体,介导炎症反应,可以使中性粒细胞聚集,介导肺组织的损伤。TLR4表达水平决定了内毒素造成急性肺损伤的程度,以TLR4为靶点,对其转录信号的特异性抑制干扰介入治疗有望对肺损伤的预后有益。     

Hp感染性胃癌组织中TLR2、TLR4的表达及其临床意义

【摘要】目的：探讨Hp感染性胃癌组织中TLR2、TLR4的表达及其临床意义。方法：选取2013年9月至2015年3月我院收治的胃癌患者128例[取病灶组织128例（病灶组）和癌旁正常组织90例（癌旁组）]和胃黏膜增生患者（增生组，68例）。测定胃癌患者病灶组织中Hp感染情况，并按检查结果分为Hp阳性组（68例）和Hp阴性组（60例）；并采用SP法检测两组患者病理组织中TLR2、TLR4的表达情况。并分析TLR2、TLR4的表达与胃癌患者临床病理特征的关系；采用Cox回归模型分析Hp感染性胃癌患者预后影响因素；采用ROC曲线分析预测Hp感染性胃癌患者的价值；采用Kaplan-Merier进行生存分析。结果：胃癌组TLR2、TLR4的阳性率均显著高于癌旁组和增生组（P<0.05）；Hp阳性组TLR2、TLR4的阳性率均显著高于Hp阴性组（P<0.05）；Spearman相关性分析结果显示，Hp感染水平与TLR2（r=0.697，P=0.00）和TLR4（r=0.684，P=0.00）均呈显著正相关（P<0.05）；TNM分期越高、分化程度越高和伴淋巴结转移者其Hp阳性率TLR2和TLR4的阳性率明显更高（P<0.05）；多因素Cox回归结果显示，TNM分期、分化程度、淋巴结转移、TLR2阳性、TLR4阳性均为影响GC患者死亡的独立危险因素（P<0.05）；ROC结果显示，拟合TLR2、TLR4预测GC患者预后的灵敏度和特异性高达92.31%和91.67%；TLR2阳性患者中位生存期21个月，TLR2阴性患者中位生存期36个月；TLR4阳性患者中位生存期23个月，TLR2阴性患者中位生存期37个月（P<0.05）。结论：Hp感染是胃癌发生的高风险因素，Hp感染性胃癌中TLR2、TLR4的表达上调，且TLR2和TLR4可作为Hp感染性胃癌早期诊断和预后评估的可靠血清标志物。     

TLR4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨TLR4蛋白在膀胱尿路上皮癌（BUEC）中的表达及意义。方法膀胱BUEC组62例标本经病理复检,WHO和ISUP病理分级具低度恶性潜能的乳头状尿路上皮肿瘤（G1） 5例,低度恶性乳头状尿路上皮肿瘤（G2）24例,高度恶性乳头状尿路上皮肿瘤（G3）33例。11例正常膀胱粘膜和13例癌旁膀胱粘膜组织标本作为对照组。应用免疫组化非生物素即用型二步法检测组织TLR4的表达。结果两对照组TLR4均100%呈强阳性表达,G1中60%强阳性、40%弱阳性,G2中21%弱阳性、79%阴性,G3中3%弱阳性、97%阴性,随肿瘤病理分级上升,TLR4阳性表达率逐渐下降。结论TLR4表达与BUEC分级相关,可成为估计肿瘤预后的一项指标。     

TLR4在壶腹部周围癌中的表达及临床意义

[目的]探讨壶腹部周围癌中Toll样受体4(TLR4)的表达水平及其临床意义.[方法]选取某医院43例壶腹部周围癌手术患者,采用逆转录聚合酶链反应(RT?PCR)检测TLR4 mRNA表达水平,采用免疫组化染色技术检测TLR4的蛋白表达水平情况,同时收集患者年龄、性别、术前总胆红素水平、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、分化程度等临床资料.[结果]43例配对的壶腹部周围癌患者肿瘤组织中TLR4 mRNA水平明显高于癌旁组织,且二者差异具有统计学意义(P<0.05).43例癌组织中TLR4蛋白表达的阳性率为58.1％,TLR4的表达在年龄、性别、术前胆红素水平、肿瘤大小等方面差异无统计学意义(P>0.05),而不同临床分期、肿瘤分化程度以及淋巴结是否转移、患者的TLR4蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).[结论]壶腹部周围癌患者TLR4高表达,对于判断预后和指导治疗具有一定的临床价值.