银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。     

山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:将对数期生长的H9C2心肌细胞随机分为6组:空白对照组、模型组、NAC阳性对照组和山楂有机酸(浓度分别为6.25、25、100μg/m L)组。心肌细胞在100μg/m L H_2O_2作用2 h后,采用MTT法检测细胞增殖,利用试剂盒测定细胞外液LDH漏出量和GSH-Px活性及细胞内SOD、MDA水平。对心肌细胞进行HE染色,用光学显微镜观察细胞形态变化。结果:与模型组比较,山楂有机酸可促进H9C2心肌细胞增殖,使LDH漏出量和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05~P<0.001),并能明显抑制H_2O_2引起的心肌细胞形态改变。结论:山楂有机酸对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制可能和有效地改善细胞内抗氧化酶的活性,抑制氧化应激损伤有关。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响,并探讨其可能作用机制。方法分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、黄芪多糖20μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组,每组设10个复孔。每组给予相应干预24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,采用紫外-可见分光光度计检测细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基(ROS)含量,采用全自动生化分析仪检测培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]和丙二醛(MDA)含量,通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用免疫印迹法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况并进行半定量分析。结果与H_2O_2组比较,黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组和黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高(P均0.05),ROS含量显著降低(P0.05),培养液中AST、CPK、LDH和MDA含量及细胞凋亡率、NF-k B蛋白表达量均显著降低(P均0.05);黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px活性均显著高于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05),CPK、MDA含量及细胞凋亡率、细胞中NF-κB蛋白表达量均显著低于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05)。结论黄芪多糖可能通过提高心肌细胞存活率、改善抗氧化酶活性、提高ROS清除能力、降低心肌酶含量、抑制细胞凋亡、下调NF-k B蛋白表达而对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起保护作用,且高剂量效果更好。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

人参皂甙Rh2抗海马脑片H_2O_2损伤作用及与GABAA受体的关系

目的:研究人参皂甙Rh2对H_2O_2损伤保护作用及与GABAA受体的关系。方法:采用小鼠制备离体海马脑片,随机分为正常组、模型组、GABA组、人参皂甙Rh2(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L)组、荷包牡丹碱组、荷包牡丹碱+人参皂甙Rh2组,每组20张脑片。采用碘化丙啶(PI)染色法测定H_2O_2损伤后海马CA1区细胞活力变化,免疫组化方法观察细胞色素C表达,电生理技术记录顺向群峰电位(OPS)观察突触传递变化。结果:人参皂甙Rh2(40μmol/L、60μmol/L)可明显提高H_2O_2损伤后海马CA1区细胞活力,降低海马CA1区细胞色素C表达,海马脑片OPS恢复率和OPS恢复程度亦明显提高。人参皂甙Rh2的保护作用和外源性GABA作用相似并可被GABAA受体抑制剂荷包牡丹碱所阻断。结论:人参皂甙Rh2可减轻H_2O_2对海马CA1区细胞损伤,促进神经元突触传递功能的恢复,其作用机制与激活GABAA受体而减少细胞色素C的释放有关。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤保护作用的研究

目的观察黄芪多糖(APS)对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制。方法无菌条件下分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、APS(20、40和80μmol/L)+H_2O_2组,每组设10个复孔。给药干预24 h后,观察比较各组细胞形态、细胞存活率、细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性、细胞凋亡状况及细胞凋亡率情况。结果倒置光学显微镜下,空白对照组呈单层簇状生长,且伪足多而饱满,搏动明显,节律一致;H_2O_2组细胞胞浆空泡、伪足少,细胞脱落、悬浮、溶解坏死,搏动弱且频率低、节律不齐等;APS各治疗组与H_2O_2组比较,心肌细胞形态不同程度好转,且以APS(80μmol/L)+H_2O_2组改善效果最明显。H_2O_2组心肌细胞存活率与空白对照组比较降低(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞存活率与H_2O_2组比较升高(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞SOD、GSH-Px、CAT活性与空白对照组比较降低,MDA含量则升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组SOD、GSH-Px、CAT活性与H_2O_2组比较均升高(P0.05或P0.01),MDA含量则降低(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞培养液中AST、CPK、LDH活性与空白对照组比较均升高(均P0.01)。APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组AST、CPK、LDH活性与H_2O_2组比较均降低(均P0.05或P0.01)。Flow Cytometry检测空白对照组仅存在少量凋亡细胞,H_2O_2组凋亡细胞数量较空白对照组增多;与H_2O_2干预组比较,APS干预24 h可明显改善H_2O_2诱导损伤乳鼠心肌细胞凋亡状况,其以APS(80μmol/L)+H_2O_2组效果最明显。H_2O_2组乳鼠心肌细胞凋亡率与空白对照组比较升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞凋亡率与H_2O_2组比较则降低(P0.01)。结论APS可通过有效改善细胞生存状态、提高细胞存活率、降低氧化应激损伤、抑制细胞凋亡而发挥对H_2O_2乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。     

麝香及其代用品人工麝香对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用比较研究

目的:研究麝香及其代用品人工麝香对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:将对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组、模型组、NAC组、天然麝香组及人工麝香组。心肌细胞在H_2O_2 100μmol/L作用2 h后,采用MTS法检测细胞光密度值,利用试剂盒测定培养液LDH漏出量和GSH-Px活性,测定细胞内SOD活性和MDA含量。利用绿色荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)水平,对心肌细胞进行伊红染色,光学显微镜观察细胞形态变化。结果:与模型组比较,50μg/mL天然麝香能显著升高细胞存活率,降低LDH漏出量和细胞内MDA含量及ROS水平,升高细胞内SOD活性及培养液GSH-Px活性(P<0.05～P<0.001),并能抑制H_2O_2对心肌细胞形态的改变。50μg/mL人工麝香对心肌细胞也有一定保护作用,但差异无统计学意义。结论:麝香对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与清除ROS和改善细胞内抗氧化酶活性有关。天然麝香对心肌细胞的保护作用强于人工麝香。     

松果菊苷通过调节Nrf2表达减轻H_2O_2致心肌细胞损伤的实验研究

目的观察松果菊苷(ECH)对过氧化氢(H_2O_2)所致心肌细胞H9c2损伤的保护作用并探讨其机制。方法体外培养H9c2细胞系,采用MTT法检测H_2O_2对细胞存活率的影响,筛选最适作用浓度。将细胞分为5组,空白对照组、H_2O_2模型组(300μmol/L)、松果菊苷低剂量组(5 mg/L)、中剂量组(10 mg/L)、高剂量组(20 mg/L)。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(MMP);采用试剂盒检测培养基心肌激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)释放量;采用蛋白免疫印记(WB)检测细胞质、细胞核中Nrf2蛋白表达水平。采用Nrf2抑制剂鸦胆苦醇预处理心肌细胞,检测细胞凋亡率和线粒体膜电位。结果 H_2O_2最适作用浓度为300μmol/L。与空白对照组相比,H_2O_2模型组心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05),MMP显著降低(P0.05);与H_2O_2模型组比较,松果菊苷处理组心肌细胞凋亡率明显下降(P0.05),MMP显著升高(P0.05)。与空白对照组相比,H_2O_2模型组CK、LDH和MDA释放率明显升高(P0.05);松果菊苷处理后CK、LDH和MDA释放率显著降低(P0.05)。与空白对照组相比,H_2O_2模型组Nrf2蛋白核转移水平增加(P0.05),与H_2O_2模型组比较,松果菊苷处理组Nrf2蛋白核转移水平进一步显著增加(P0.05)。与松果菊苷处理组比较,鸦胆苦醇处理组心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05),MMP显著降低(P0.05)。结论松果菊苷可以减轻H_2O_2对心肌细胞造成的损伤,推测其机制是通过促进Nrf2蛋白核移位激活Nrf2通路实现的。     

川芎嗪对缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤及凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨川芎嗪在缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤中的保护作用。方法:体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧损伤及川芎嗪预处理模型。细胞随机分为5组:对照组(NC组)、缺氧复氧损伤组(HR组)、川芎嗪预处理L组(TMP-L组,60μg/mL),M组(TMP-M组,200μg/mL)和H组(TMP-H组,800μg/mL)。心肌细胞损伤程度以心肌细胞活力(OD值)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量表示;细胞凋亡程度通过细胞凋亡率测定,并检测bcl-2和bax基因的表达。结果:与NC组比较,HR组细胞活力显著减弱,LDH释放量显著增加,SOD活性降低,MDA含量增多,出现大量心肌细胞凋亡,bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与HR组比较,TMP-M组和TMP-H组细胞活力显著增强,LDH释放量显著减少;SOD活性增强,MDA含量下降;TMP-L组、TMP-M组和TMP-H组心肌细胞凋亡率及bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:川芎嗪预处理能减轻心肌细胞的缺氧复氧损伤,其作用可能与提高心肌细胞活力、增强SOD活性、降低LDH释放量、减少MDA生成、抑制心肌细胞凋亡有关。     

蛭龙活血通瘀胶囊对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨蛭龙活血通瘀胶囊(以下简称“ZL”)对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用.方法:以正常H9C2心肌细胞、PC12细胞作为对照,分别以不同浓度的H2O2处理细胞4h,建立氧化损伤模型;在H2O2处理细胞前用ZL预处理24 h,作为ZL药物组,采用CCK-8法检测以上各组细胞存活率.结果:与未经H2O2处理的细胞比较,400 μmol/L H2O2处理的H9C2心肌细胞存活率下降至(47.25±4.14)％(P＜0.01);600 μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率下降至(52.53±4.31)％(P＜0.01);经10～320 mg/ml的ZL预处理后,H9C2心肌细胞、PC12细胞的存活率均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:ZL对H2O2诱导的H9C2心肌细胞、PC12细胞氧化损伤有保护效果.     

薯莨抗H_2O_2致H9c2细胞氧化损伤作用的有效部位筛选研究

目的:利用H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,筛选薯莨抗氧化损伤的主要活性部位。方法:利用不同浓度的H_2O_2诱导H9c2细胞氧化损伤,选择最佳造模浓度;以不同浓度(100、200、400 mg/L)的薯莨提取物不同部位样品孵育H9c2细胞24 h后,再以H_2O_2进行氧化损伤模型处理,采用MST法检测H9c2细胞的存活率,以化学试剂盒的方法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平,评价薯莨提取物不同部位抗氧化损伤的作用,筛选其主要抗氧化活性有效部位。结果:H_2O_2浓度为600μmol/L时可使H9c2细胞存活率下降至50%左右(P0.001),可用该浓度的H_2O_2建立氧化应激损伤模型。与模型组比较,薯莨总提物和水洗脱物能显著提高H_2O_2诱导下H9c2细胞存活率(P0.05～P0.001),并能明显改善细胞形态;与模型组比较,薯莨水洗脱物高浓度组LDH泄漏量显著降低,薯莨水洗脱物各组细胞中ROS、MDA水平显著降低,SOD、CAT水平显著升高(P0.05～P0.001)。结论:在本研究的浓度下,薯莨水洗脱物具有显著的抗H_2O_2致H9c2细胞氧化损伤作用,是薯莨抗H9c2细胞氧化损伤的主要活性部位。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的:探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞损伤模型存活率及维生素D受体mRNA表达的影响。方法:取正常生长的细胞,用80μmol·L~(-1)的异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导H9C2心肌细胞肥大的模型,并随机分为5组:正常组,模型组,模型组+黄芪甲苷(10μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(30μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(60μmol·L~(-1))组。运用MTT法检测心肌细胞的存活率,Real-Time PCR法检测各组H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA的表达量。结果:MTT法显示使用异丙肾上腺素会诱导H9C2心肌细胞损伤,而不同剂量的黄芪甲苷可提高心肌细胞的活性,且黄芪甲苷的浓度在30μmol·L~(-1)时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,不同剂量的黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的肥大H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量与模型组相比,其表达均明显上调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其通过维生素D轴调节VDR基因表达水平有关。     

地奥心血康对培养H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制

目的:探讨地奥心血康对培养H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制。方法:建立缺氧/复氧损伤心肌细胞模型,用地奥心血康进行干预。将培养的H9c2心肌细胞随机分为6组,正常对照组(C组);缺氧/复氧模型组(H/R组);缺氧/复氧模型+吡那地尔(pinacidil,Pin)阳性对照组(H/R+Pin组);缺氧/复氧模型+地奥心血康(DAXXK)低剂量、中、高剂量(10mg/L、20 mg/L、40mg/L)干预组(H/R+L、M、H组)。MTT法测定细胞存活率;用罗丹明123(Rh123)荧光探针标记线粒体,在荧光显微镜下采集被Rh123染色的各组心肌细胞荧光图片;收集培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量。结果:与正常组比较,缺氧/复氧模型组细胞存活率、线粒体膜电位及SOD活性均下降,而LDH活性、MDA含量均升高。地奥心血康用药组可有效提高心肌细胞存活率、升高线粒体膜电位,同时降低受损心肌LDH的释放量,并有效提高SOD的活性,减少MDA的生成量。结论:地奥心血康对缺氧/复氧造成的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与保护细胞线粒体膜、增强细胞清除氧自由基能力、减少脂质过氧化物的产生有关。     

北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的比较北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法 H_2O_2诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,同时加入北葶苈子生品及炮制品(400、200、100μg/mL)处理细胞6 h。MTT法检测H9c2细胞存活率,流式细胞术检测细胞ROS、线粒体膜电位、细胞凋亡率、自噬空泡,Incell-Western法检测细胞凋亡相关蛋白,并检测细胞LDH、MDA、T-SOD、GSH-PX水平。结果与模型组比较,北葶苈子炮制前后均能降低H9c2细胞凋亡率、自噬空泡、ROS水平及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值(P0.01),增加线粒体膜电位(P0.01),降低细胞培养液中LDH及细胞MDA水平(P0.01),提高细胞T-SOD、GSH-PX水平(P0.05,P0.01);北葶苈子炮制品抑制caspase-3蛋白表达(P0.05)。结论北葶苈子炮制前后均可有效改善由H_2O_2诱导的心肌细胞损伤,可能与其调节氧化应激的作用有关。     

红参对H_2O_2诱导H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨红参有效成分对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法过氧化氢(H_2O_2)诱导H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌细胞氧化应激损伤模型;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞因子LDH释放、SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测ROS、细胞凋亡;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果与模型组相比,红参有效成分预处理后,心肌细胞存活率显著提高,LDH水平下降,SOD活性显著提高,MDA水平受到抑制,ROS水平显著降低,细胞凋亡率显著降低。同时红参干预后心肌损伤细胞促凋亡蛋白Bax下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高。结论红参通过降低ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤。     

黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大损伤的机制研究

目的:探讨黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导H9c2心肌细胞肥大损伤的保护作用及潜在机制。方法:以100μmol/L ISO作用H9c2细胞建立细胞肥大损伤模型。将细胞分为正常对照组、模型组及黄芪甲苷6.25、12.5、25μmol/L组,黄芪甲苷预给药2 h,ISO作用24 h。CCK-8法检测细胞活力,荧光染色测定细胞表面积,Hoechst 33342和TUNEL染色测定细胞凋亡率。比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。q RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P62、LC3 m RNA水平。Western Blot检测Sirt1、P62、Caspase-3、Beclin、P53蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平。结果:黄芪甲苷能显著减轻ISO诱导的H9c2细胞肥大损伤,减少心肌细胞表面积及LDH的释放,降低细胞凋亡率及细胞内ROS水平,升高SOD水平,上调自噬相关m RNA及蛋白的表达,下调凋亡相关m RNA及蛋白的表达。结论:黄芪甲苷能有效抑制ISO诱导的H9c2细胞肥大及凋亡,其机制可...     

姜黄素调控PI3K/Akt信号通路抑制H9c2心肌细胞的炎症损伤

目的探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症损伤的保护效应,并对其作用机制进行初步研究。方法将H9c2心肌细胞分为对照组、LPS组和姜黄素干预组。除对照组外,其余各组构建LPS诱导的心肌细胞炎症损伤模型。姜黄素干预组分别以10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L姜黄素处理细胞。培养24 h后,CCK8法检测各组细胞的存活率,ELISA法检测各组细胞分泌炎症因子IL-6和TNF-α的水平,Western blot法检测各组细胞PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002(5μmol/L)预先处理细胞4 h后,加入LPS诱导细胞损伤,再以20μmol/L姜黄素干预细胞,检测各组(对照组、LPS组、LPS+抑制剂组、LPS+姜黄素组和抑制剂+LPS+姜黄素组)细胞的相对存活率、炎症因子水平及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS组细胞的相对存活率显著降低(P0.05),细胞上清中炎症因子IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著降低(P0.05)。与LPS组细胞相比,不同浓度姜黄素干预后,H9c2细胞相对存活率显著升高(P0.05),细胞分泌的IL-6和TNF-α水平显著降低(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(P0.05)。与LPS+姜黄素组相比,抑制剂LY294002干预细胞后,姜黄素对LPS诱导的H9c2细胞炎症损伤的保护作用减弱,细胞存活率明显下降(P0.05),IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论姜黄素对LPS诱导的H9c2心肌细胞炎症损伤具有保护效应,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

甲基莲心碱对H_2O_2损伤心肌细胞的保护作用

目的:探讨甲基莲心碱(neferine)对氧化损伤的大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞过氧化损伤模型,将细胞分为7组,即空白对照组(control)、溶剂对照组(DMSO)、氧化损伤组(H2O2)、氧化损伤加入槲皮素对照组(quercetin+H2O2)、氧化损伤加入莲心碱低、中、高浓度组(甲基莲心碱+H2O2、甲基莲心碱-M+H2O2、甲基莲心碱-H+H2O2)。将300μmol/LH2O2作用于加入槲皮素及不同浓度甲基莲心碱预培2 h的心肌细胞,继续培养24h,以细胞毒四唑盐(MTT)比色试验,乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)、流式细胞凋亡率、Caspase酶活性为检测指标。结果:甲基莲心碱呈剂量依赖性降低H2O2对心肌细胞活力的影响,降低MDA、LDH量,增加细胞GSH-px活性,并显著抑制Caspase-3和9活性,减少细胞凋亡数量,各指标差异具有统计学意义(P0.01)。结论:甲基莲心碱可保护和修复过氧化氢诱导的心肌细胞的损伤,其作用可能是通过抗氧化、增加细胞GSH-px活性,进而抑制Caspase-3和9活性,减少细胞凋亡。     

地黄多糖对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的:研究地黄多糖(rehmannia polysaccharide)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法:无菌环境下分离并培养SD大鼠乳鼠心肌细胞72h后随机分为:空白对照组、H_2O_2干预组、地黄多糖(10、20和40μg/ml)+H_2O_2干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)+H_2O_2干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6h后,通过光学纤维镜观察细胞形态并采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶:谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过酶联免疫(ELISA)法测定培养液中炎症因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)含量水平;通过Flow Cytometry检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过RT-PCR检测细胞中AKT mRNA、bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值。结果:较H_2O_2干预组,地黄多糖(20、40μg/ml)+H_2O_2干预组乳鼠心肌细胞形态明显好转,细胞存活率显著升高,培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,培养液中TNF-α、IL-1、IL-6含量显著降低,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,bcl-2 mRNA表达显著上调且Bax mRNA表达显著下调、bcl-2/Bax表达比值显著升高,其中地黄多糖40μg/ml+H_2O_2干预组AKT mRNA表达显著上调。结论:地黄多糖能够有效改善H_2O_2诱导损伤的乳鼠心肌细胞生存状态、提高细胞存活率、降低细胞凋亡率,提示地黄多糖对H_2O_2诱导损伤的乳鼠心肌细胞具有保护作用;其作用机制可能与地黄多糖能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,调节凋亡相关基因表达,抑制炎症反应相关。