白三烯B4对骨髓细胞及成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响

目的观察不同浓度白三烯B4(LTB4)干预后大鼠骨髓细胞及成骨细胞过氧化物酶体增生物激活受体γ2(PPARγ2)及骨代谢相关基因核因子-KB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、核因子-KB活化受体(RANK)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)mRNA表达水平的变化,探讨PPARγ2内源性配体LTB4在骨代谢中的作用。方法体外培养大鼠骨髓细胞及成骨细胞,分别加入不同浓度LTB4(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)干预24 h,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测骨髓细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平及成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表达水平,比较不同浓度LTB4对上述基因表达的影响。结果 (1)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调骨髓细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2、RANK、TRAP mRNA的表达水平,组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);(2)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调成骨细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制骨髓细胞及成骨细胞成骨标记物基因的表达,促进骨髓细胞破骨标记物基因的表达,从而参与与增龄相关的骨质疏松的发病过程。     

PPARγ2内源性配体15d-PGJ_2对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响

目的研究不同浓度15d-PGJ_2对大鼠成骨细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)及骨代谢相关基因核因子-κB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)及骨保护素(OPG)mRNA表达水平的变化,探讨PPARγ2内源性配体15d-PGJ_2对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响。方法体外培养大鼠成骨细胞,加入不同浓度15d-PGJ_2(0、10、20、30μmol/L)干预24小时后,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP及OPG mRNA表达水平,比较不同浓度15d-PGJ_2对成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响。结果不同浓度15d-PGJ_2呈剂量依赖性下调RANKL、ALP及OPG mRNA的表达水平,而呈剂量依赖性上调PPARγ2 mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 15d-PGJ_2可能通过激活PPARγ2转录活性抑制成骨基因mRNA的表达,参与增龄相关的骨质疏松的发病过程。     

比格列酮和15d-PGJ2抑制促炎细胞因子减轻自身免疫性心肌炎

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)在急性心肌炎发病中的作用;PPARγ配体治疗能否减轻心肌炎及其可能的机制.方法 6周龄雄性Lewis大鼠24只诱导自身免疫性心肌炎,随机分为阳性对照、15d-PGJ2治疗组及比格列酮治疗组(各组8只),正常大鼠8只作为正常对照.观察PPARγ配体15 d-PGJ2注射(200 μ·kg-1·d-1)和比格列酮口服(10 mg·kg-1·d-1)治疗对心肌炎症程度的影响;免疫组化检测心肌PPARγ表达、免疫杂交检测IκBα、 IL-1β和TNFα蛋白表达;核酸酶保护法检测心肌组织促炎细胞因子mRNA表达、电泳迁移率变动分析检测NF-κB的DNA结合活性.结果①PPARγ在炎症心肌组织中表达增强,主要定位在炎性浸润细胞的核和核周围区;②15d-PGJ2和比格列酮治疗使心肌炎症得到减轻,心重/体重、炎症分级严重程度明显减轻;③PPARγ配体15d-PGJ2和比格列酮治疗明显降低心肌组织中多种炎性细胞因子mRNA表达,及降低心肌内上调的IL-1β和TNFα蛋白表达;④与正常对照组相比,心肌炎阳性对照组心肌NF-κB的DNA结合活性增加5.6倍,15d-PGJ2和比格列酮治疗降低增强的NF-κB结合活性.⑤心肌炎阳性对照组心肌细胞核内NF-κB抑制物IκB蛋白含量明显降低;与心肌炎组相比,15d-PGJ2和比格列酮治疗分别增加IκB蛋白含量2.2和2.1倍.提示PPARγ配体治疗升高核内IκB水平而抑制NF-κB的活化.结论 PPARγ配体治疗减轻自身免疫性心肌炎,其机制与诱导IκB表达、阻断NF-κB活化、抑制促炎细胞因子表达有关.Ζ     

脂联素调控人成骨细胞OPG/RANKL表达的信号转导机制

目的 研究脂联素调控人成骨细胞护骨素(OPG)和NF-кB受体活化凶子配体(RANKL)表达的作用机制.方法 人成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达以实时PCR检测,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平用Western印迹法检测.廊用小分子RNA干扰技术(siRNA)阻断脂联素受体(AdR)表达,并以p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)干预,以观察脂联素对人成骨细胞OPG/RANKL作用的调节机制.结果 用siRNA沉默AdRl的表达可消除脂联素促进人成骨细胞RANKL表达和抑制OPG表达的作用;脂联素干预前予SB203580阻断p38 MAPK后,也可消除脂联素对成骨细胞RANKL和OPG的作用,而SP600125并无作用.结论 在人成骨细胞中,脂联素通过AdR1/p38 MARK途径促进RANKL表达和抑制OPG的表达.     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ配体15d-PGJ2对肝星状细胞增殖活化的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)的天然配体15d-PGJ2对HSC增殖及活化的影响,以探讨PPARγ在HSC活化过程中的作用。方法采用MTT法和RT-PCR方法观察5μmol/L及10μmol/L 15d-PGJ2对体外培养的HSC自发活化及血小板衍生生长因子(PDGF)引起的HSC增殖及活化的影响。结果以5μmol/L 15d-PGJ2处理原代HSC 3 d后,可明显抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白的表达,而PPARγ的表达较未处理组明显增高(0.64±0.03对比0.09±0.01,t=36.0517,P<0.01);15d-PGJ2可剂量依赖性地抑制PDGF引起的HSC增殖;经5μmol/L和10μmol/L 15d-PGJ2预处理后再用PDGF干预,则PPARγ的表达较单用PDGF干预组明显增高(分别为0.03±0.02对比0.60±0.03,t=42.6616,P<0.01;以及0.03±0.02对比0.69±0.04,t=33.83,P<0.01),而HSC的活化指标α-平滑肌肌动蛋白、α1(I)型胶原及单核细胞趋化蛋白-1的表达则受抑制。结论激活PPARγ可调控HSC的促纤维化和促炎症作用,促进PPARγ的表达可能成为抗肝纤维化的新手段。     

过氧化物酶增殖物活化受体γ在胰腺癌生长中的调节作用

目的 探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在人胰腺癌生长中的调节作用。方法 应用逆转录(RT)-PCR检测胰腺癌细胞系SWl990中PPARγ和维甲酸受体α(RXRα)的表达。培养细胞经PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)及RXRα配体9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)作用后,用四唑氮蓝还原法测定细胞活力,并评价药物的抗增殖效果。建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型,并予以PPARγ激动剂罗格列酮体内干预,75d后处死裸鼠,测量移植瘤的大小,计算抑瘤率。应用免疫组化观察移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 RT-PCR结果显示SW1990细胞系存在PPARγ和RXRα mRNA表达。15d-PGJ2和9-cis-RA及其联合应用对胰腺癌细胞的增殖具有抑制作用,且作用呈剂量依赖性。9-cis-RA对15d-PGJ2抑制胰腺癌细胞增殖具有协同效应。罗格列酮治疗组裸鼠移植瘤的平均体积和重量均显著低于对照组,抑瘤率达80．7％。免疫组化显示治疗组和对照组移植瘤组织中均表达PCNA,但治疗组的阳性表达强度和表达区域均呈下降趋势。结论 PPARγ的活化在体内外均对胰腺癌的生长呈负向调节作用,提示PPARγ可能是胰腺癌治疗的一个新分子靶点。RXRα的激活可协同增强PPARγ激动剂的抗增殖作用。     

前列腺素E_2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6(IL-6)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(L igand of receptor activator ofNF-κB,RANKL)表达的调节,探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株(MG-63),分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验,用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达;用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用;提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析,检测IL-6,OPG,RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达,抑制MG-63细胞的增殖,并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA,RANKL/OPG mRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6,RANKL/OPG mRNA基因水平的上调,促进骨吸收,此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞护骨素、RANKL表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法用酶消化法分离24h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养。在培养液中加入不同浓度的淫羊藿甙(10~(10)～10~(14)mol/L),培养48h后,抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG和RANKL mRNA表达的变化。结果淫羊藿甙可明显促进成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,且呈浓度依赖性,均以10~(-7)mol/L时作用最显著(P＜0.05)。预先用淫羊藿甙干预成骨细胞,可逆转地塞米松的降低OPG mRNA(0.570±0.093vs 1.083±0.081)、升高RANKL mRNA(1.079±0.050vs 0.718±0.082)的作用(均P＜0.05)。结论淫羊藿甙可以上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从而调节骨吸收,这可能是淫羊藿甙防治骨质疏松症的重要机制之一。     

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。     

PPARγ激动剂抑制脂多糖诱导肾小管上皮细胞分泌趋化因子及机制

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对脂多糖(LPS)诱导的趋化因子表达的影响及可能机制。方法:用15d-PGJ2(5μM)预处理人近端肾小管上皮细胞2h后加入LPS(1μg/ml),与LPS组、15d-PGJ2组及未加任何刺激组进行比较。用Real-time PCR方法检测IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达水平;用ELISA法检测细胞上清中IL-8和MCP-1蛋白水平;通过RNAi技术沉默肾小管上皮细胞PPARγ,观察15d-PGJ2的作用是否依赖于PPARγ;用间接免疫荧光法观察NF-κB在细胞内的定位;用Western blot法检测胞质中IκB的磷酸化水平。结果:在HK-2细胞中,与对照组相比,LPS刺激4h使IL-8 mRNA及蛋白分别升高(5.67±1.83)和(1.62±0.12)倍,使MCP-1 mRNA及蛋白分别升高(5.24±1.33)和(2.25±0.40)倍,且胞质中IκBα磷酸化水平明显增加(P0.05)。与LPS组相比,15d-PGJ2+LPS组,IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降74.23%和79.42%,在蛋白水平分别下降69.03%和49.44%,差异有统计学意义;在PPARγ沉默的HK-2细胞中,与LPS刺激组相比,15d-PGJ2使IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降59.21%和44.08%,在蛋白水平分别下降47.11%和39.40%(均P0.05),并明显抑制LPS诱导NF-κB核易位,下调IκBα磷酸化水平。结论:15d-PGJ2可抑制LPS诱导的趋化因子表达,且不完全依赖于PPARγ,可能与抑制IκBα磷酸化有关。     

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子κB受体活化素配体表达的调节

目的 探讨脂联素对人成骨细胞护骨素(OPG)和核因子κB受体活化素配体(RANKL)表达的作用.方法 RT-PCR及Western印迹检测体外培养的人成骨细胞的脂联素受体(Adipo R)mRNA及Adipo R蛋白表达.分别用0、3、10 μg/ml和30 μg/ml脂联素干预人成骨细胞48 h以观察剂量效应和分别用0、30μg/ml脂联素干预人成骨细胞0、12、24 h和48 h以观察时间效应,干预前后OPG、RANKL的mRNA及蛋白表达分别用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和ELISA检测.结果 (1)人成骨细胞可表达Adiop R1 mRNA、Adiop R1蛋白和Adiop R2 mRNA.(2)30μg/ml脂联素干预人成骨细胞12、24 h或48 h后,OPG的mRNA表达分别为0 h的(69±6)%、(51±7)%和(26±8)%(P＜0.05),OPG蛋白表达分别为0 h的(66±5)%、(32±8)%和(14±6)%(P＜0.05);RANKL的mRNA表达分别为0 h的(1 80±12)%、(220±19)%和(316±14)%(P＜0.05),可溶性RANKL(sRANKL)蛋白的表达分别为0 h的(236±12)%、(272±9)%和(308±14)%(P＜0.05).(3)3、10 μg/ml或30μg/ml脂联素干预人成骨细胞48 h时,OPG的mRNA表达分别为对照组的(66±9)%、(44±10)%和(29±7)%(P＜0.05),OPG蛋白的表达分别为对照组的(52土9)%、(38±4)%和(17±4)%(P＜0.05);RANKL的mRNA表达分别为对照组的(168±6)%、(214±7)%和(314±11)%(P＜0.05),sRANKL蛋白的表达分别为对照组的(156±6)%、(196±8)%和(212±7)%(P＜0.05).结论 脂联素呈时间和剂量依赖性调节人成骨细胞OPG和RANKL的表达,可能是新的骨代谢调节因子.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ2活化与大鼠增龄骨丢失关系的研究

目的 观察自然增龄大鼠骨髓过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）表达与氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）及骨量的关系，探讨其在大鼠自然增龄骨丢失发生过程中可能的作用机制。方法 选择不同月龄（6、12及18月龄）大鼠作为研究对象，逆转录PCR（RT—PCR）检测骨髓PPARγ2、核因子-κB活化受体配体（RNAKL）、骨保护素（OPG）、核因子-κB活化受体（RANK）mRNA表达水平；ELISA法检测骨髓上清Ox-LDL、脂肪酸结合蛋白（aP2）水平，图像分析仪测定骨髓脂肪组织含量并检测股骨骨密度。结果 骨密度随增龄进行性减低，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；骨组织HE染色，6月龄大鼠骨髓腔中脂肪极少，而在18月龄约占40％骨髓腔空间，组间比较差异有统计学意义（P〈0．01），脂肪髓的发生与年龄呈正相关（r=0．762），与骨密度呈负相关（r=0．626）；骨髓中aP2及Ox-LDL浓度随增龄明显增高，组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）；PPARγ2表达随增龄明显升高，3组差异有统计学意义（P〈0．05或P〈O．01）；RANKL表达随增龄呈进行性升高，而OPG在18月龄组明显下降，组间比较差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05），RANK随增龄无明显变化。结论 随增龄Ox-LDL水平升高可激活骨髓PPARγ2转录活性，引起骨髓脂肪生成增多并参与骨量减低的发生，是Ⅱ型原发性骨质疏松发生的可能机制之一。     

17β-雌二醇对大鼠骨髓基质细胞PPAR-γ2 mRNA表达的影响

目的　研究 17β 雌二醇 (E2 )对大鼠骨髓基质细胞过氧化物酶增殖物活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Western印迹技术 ,观察不同浓度E2 对骨髓基质细胞分化过程中PPAR γ2 mRNA及蛋白表达的影响 ,这些细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原含量也被测定。结果　E2 能显著促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2 mRNA及蛋白的表达 ,且呈剂量依赖性。E2 浓度为 10 -6mol/L时 ,PPAR γ2 mRNA的表达从 (1.3± 0 .5 ) %增至 (17.7± 2 .5 ) % (P <0 .0 1) ;PPAR γ2 蛋白的表达从 (1.16± 0 .10 ) %增至 (4 .0 8± 0 .13 ) % (P <0 .0 1)。细胞ALP活性明显受E2 的抑制 ,在上述E2 浓度时ALP的活性从 (4 2 .6± 2 .5降至 3 .6± 0 .7)mU/mg蛋白 (P <0 .0 0 1)。Ⅰ型胶原含量均随E2 浓度增加而降低。结论　E2 促进体外培养的骨髓基质细胞向脂肪细胞分化而抑制其向成骨细胞分化。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂在骨代谢中作用的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferatoractivated receptor,PPAR)是一种核激素受体,最常见的PPAR-γ激动剂是天然的15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和人工合成的噻唑烷二酮类降糖药物.近年来,关于PPAR-γ激动剂对骨代谢的影响报道不一.有学者认为PPAR-γ激动剂会使骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向脂肪细胞分化,使造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)向破骨细胞前体细胞分化,而使MSCs向成骨细胞分化的方向受阻,造成骨质疏松(11;也有学者认为PPAR-γ激动剂可抑制核因子-κB受体活化因子配体(ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)等介导的破骨细胞分化,很有希望被应用于治疗炎症性骨吸收疾病[2-3];故而,PPAR-γ激动剂对骨代谢影响,尤其是噻唑烷二酮类降糖药对骨代谢的影响备受争议,全方位地了解PPAR-γ激动剂对骨代谢的作用及其机制对于更好地防治骨质疏松具有重要的意义,为此本文将从如下几方面对其作一综述.     

硫辛酸对体外培养的MC3T3-E1成骨细胞骨形成的影响

目的研究硫辛酸对体外培养的H2O2处理后的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的影响,并初步探讨硫辛酸促成骨细胞骨形成的作用机制。方法在体外培养的MC3T3-E1培养基中分别加入不同浓度(0.1、0.2和0.4 mmol/L)的硫辛酸作用20 h,接着加入1 mmol/L H2O2作用4 h,用MTT法检测药物对成骨细胞活力的影响;用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测成骨细胞内ALP、SOD、LDH活性和MDA含量;用Von Kossa染色法检测矿化结节数目;用real time-PCR方法检测成骨细胞内Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、转录因子Osterix、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase4,Nox4)、护骨素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配基(receptor activator nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)mRNA表达,用流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果硫辛酸可增加ALP活力和矿化结节数目,促进骨形成相关指标COL-Ⅰ、Osterix、BMP-2和OCN mRNA表达(P0.05);硫辛酸提高H2O2损伤后MC3T3-E1细胞活力,上调细胞内SOD活性并降低细胞中MDA含量和上清中LDH活性;硫辛酸上调MC3T3-E1细胞OPG/RANKL比值及下调ROS和Nox4 mRNA表达水平(P0.05)。结论硫辛酸在一定浓度范围内(0.1~0.4 mmol/L)促进H2O2处理后MC3T3-E1细胞的骨形成过程,这种促进作用是通过下调Nox4和ROS水平,降低氧化应激发挥抗氧化作用上调OPG/RANKL实现的。     

PPARγ表达上调体外抑制肝星状细胞的增殖

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达上调对肝星状细胞增殖及凋亡的影响.方法:体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞,应用1,2,3μmo/L不同浓度的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h.同时以不加药物只加无血清培养基作为对照组,24 h后应用RT-PCR的方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγmRNA表达的变化,MTT检测HSC增殖.流式细胞仪分析HSC-T6细胞凋亡.结果:经1,2,3μmo/L 15d-PGJ2处理的HSC-6细胞中PPARγmRNA表达比例上调(0.513±0.031,0.697±0.018,0.674±0.03 2 vs 0.198±0.021).MTT结果显示不同浓度的15d-PGJ2对HSC-T6细胞的增殖均有抑制作用,以2μmol/L组最为显著(54.6%±11.1%).流式细胞仪结果显示15d-PGJ2处理组凋亡细胞数明显增多.结论:PPARγ表达上调能够抑制HSC-T6增殖并诱导其凋亡.     

15-脱氧前列素2抑制MG63细胞活性并诱导其凋亡的机制

目的研究过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)γ的内源性配体15-脱氧前列素2(15d-PGJ2)对骨肉瘤细胞株MG63的增殖活性的影响及诱导其凋亡可能的作用机制。方法采用人骨肉瘤细胞MG63,分别用终浓度为0.1、1、5、10和50μmol/L15d-PGJ2处理,对照组不给予药物,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定药物作用24 h、48 h、72 h及96 h细胞增殖的变化;流式细胞术(FCM)结合Annexin V/PI双染色观察终浓度5μmol/L和20μmol/L15d-PGJ2作用48 h和72 h MG63细胞周期变化及诱导细胞凋亡和坏死情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2处理48 h对MG63细胞中PPARγm RNA的表达影响;通过免疫细胞化学技术检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2作用48 h,MG63细胞中凋亡相关蛋白caspase3,p53和Bax/bcl-2的表达情况。结果 MTT结果显示:1各浓度15 d-PGJ2作用24 h、48 h、72 h及96 h,对MG63细胞增殖均有抑制作用,48 h达到最佳抑制效果。48 h、72 h及96 h抑制率两两比较均无差异(P>0.05),且50μmol/L对细胞的抑制率几乎达100%;2在各时间点,各浓度组间比较均有差异(P=0.000),在0.1⁵0μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而递增的趋势。流式细胞术检测结果显示:不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P=0.000)。加药组G0/G1期细胞比例均高于对照组,S和G2/M期相应减少,且细胞凋亡率增高,表明加药组可使细胞G0/G1期阻滞且诱导细胞凋亡;RT-PCR检测PPARγm RNA的表达,并同时逆转录稳定的内参片段β-actin,以二者的面积灰度值比值作为该m RNA的相对表达量,20μmol/L 15d-PGJ2作用48 h,PPARγm RNA的相对表达量(2.06±0.35)与对照组(0.94±0.23)比较有差异(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:药物干预组凋亡相关蛋白caspase3和Bax表达与对照组比较显著增加,而p53和bcl-2表达下降(P<0.05)。结论 1PPARγ激动剂15d-PGJ2能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的生长,引起细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。215d-PGJ2可能通过增加PPARγm RNA表达,上调凋亡相关蛋白caspase3和Bax及下调p53和bcl-2表达而诱导细胞凋亡。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对TGF-β1诱导肾成纤维细胞细胞外基质表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)致肾间质纤维化作用的影响,探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用.方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞株(NRK/49F),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达的影响,利用Western Blot方法观察PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的FN蛋白表达的影响.结果:TGF-β1能显著增加NRK/49F细胞CTGF、FN和ColⅢmRNA表达,并呈剂量依赖和时间依赖效应.与TGF-β1刺激组相比,10 μM 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组α-SMA、CTGF、FN和ColⅢmRNA表达量显著减少,FN蛋白表达量显著下降.结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞CTGF表达和细胞外基质(ECM)合成.     

雷洛昔芬对小鼠成骨细胞中护骨素核因子-κB受体活化因子配体表达的影响

目的 雷洛昔芬对小鼠成骨细胞中护骨素(OPG)、核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)表达的影响. 方法 取出生24 h内的小鼠30只,无菌的条件下取出颅骨,应用酶消化法进行成骨细胞的培养,在培养成骨细胞的培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬(0、1012、1010、109mol/L),应用反转录聚合酶链扩增(RT-PCR)法检测其对OPG/RANKL mRNA的表达及酶联免疫吸附法(ELISA)法检测OPG蛋白分泌的影响. 结果 OPG mRNA在实验组中表达较对照组强,并且不同浓度组间的比较,差异有统计学意义(均为P<0.05),1010.mol/L组较10～mol/L、1012mol/L组的表达明显增强;RANKL mRNA在实验组的表达均较对照组弱,其组间的差异亦有统计学意义(P<0.01).并且随着雷洛营芬浓度的增加,RANKL mRNA的表达明显减弱,呈现明显的浓度依赖性.在试验组小鼠成骨细胞培养液中OPG浓度(10-9mol/L组为3.017±0.459,1010mol/L组为3.981±0.762,1012mol/L组为2.864±0.416)较对照组(2.106±0.316)增高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 雷洛昔芬能促进成骨细胞的中OPG的mRNA的表达及其蛋白的分泌,同时抑制RANKL的mRNA的表达.     

成骨细胞Toll样受体4信号通路研究进展

Toll样受体4(TLR4)为天然免疫的关键模式识别受体,在骨丢失发病机制中发挥重要作用。TLR4通路与影响成骨细胞的其他通路如Wnt/β-catenin、TGF-β/BMP、Notch通路间存在密切联系。TLR4通路通过抑制NF-κB配体受体活化剂(RANKL)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)等成骨相关标志物表达抑制成骨细胞的分化、增殖、矿化等。TLR4通路还能促进成骨细胞凋亡、降低骨密度。本文就TLR4结构、功能及其对成骨细胞的作用进行综述。