TLR4信号通过对miR-21的表达调控影响乳腺癌4T1细胞的凋亡和增殖

目的：探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法：体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Western blotting 检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化。转染miR-21抑制剂和阴性对照后, Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况。结果：LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时: 207±0.33 vs 1; t=5.61, P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14±0.32; t=-7.357,P=0.002)。与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高\[(24.2±2.4)% vs (14.8±5.1)%; t=2.891, P=0.044\],4T1细胞的增殖能力明显降低(042±0.02 vs 0.55±0.01;t=-8.528, P=0.001)。结论：TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖。     

硼替佐米作用不同时间对K562耐药细胞株核因子-κB途径的影响

 目的　观察硼替佐米（商品名：万珂,PS-341）对柔红霉素（DNR）诱导的K562耐药细胞株（K562／DNR）核因子-κB（NF-κB）、抑制蛋白κB（IκB）及P-糖蛋白（P-gp）表达的影响,探讨PS-341逆转耐药的分子机制。方法　以100 μg／ml DNR单用或联合应用4 μg／L PS-341分别作用于K562／DNR 12、24及36 h,检测不同时间点各组NF-κB、IκB及P-gp表达情况,同时测定NF-κB p65活性,检测各组细胞凋亡率。结果　Western blot结果显示：与阴性对照组相比,DNR可诱导NF-κB表达上调及活性增强、IκB表达下调、P-gp表达上调;加用PS-341可显著抑制 DNR诱导的NF-κB及P-gp表达,使IκB表达增加。加用PS-341后,NF-κB活性12 h为（15.3±1.87）%[DNR组为（23.8±2.27）%],24 h为（10.2±1.69）%[DNR组为（25.4±1.98）%],36 h为（6.08±2.53）%[DNR组为（26.9±2.58）%],与相应单用DNR组相比均有明显下降,差异有统计学意义（P值均＜0.05）。DNR与PS-341联用后,细胞凋亡率12 h为（35.23±5.15）%[DNR组为（15.56±4.12）%],24 h为（40.26±6.89）%[DNR组为（17.25±2.89）%],36 h为（43.58±7.69）%[DNR组为（22.47±4.58）%],与DNR组相比,细胞凋亡率均明显增加,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）。上述作用呈时间依赖性。结论　PS-341可减少K562／DNR细胞NF-κB的活化,降低P-gp表达,逆转细胞耐药,促进细胞凋亡。     

IL-1基因多态性对胃粘膜TNF-α、NF-κB的表达和活性的影响

 目的 探讨IL-1的基因多态性影响H.pylori感染后胃癌发生的机制。 方法 通过多态性分析和血清H.pylori抗体测定,收集105例癌低发区的学生作为研究对象,其中IL-1-511T/T 基因型32名（13名H.pylori+）,C/C基因型36名（15名H.pylori+）,C/T基因型37名（14名H.pylori+）。 结果 在胃体组织,H.pylori阴性个体TNF-α和NF-κB表达量极少,而且IL- 1B-511各基因型间也无显著差异。在H.pylori阳性个体,胃体部TNF-α和NF-κB mRNA有较为明显的表达,IL-1B-511T/T基因型个体比C/T和C/C基因型明显增加,分别为1.20±0.17 vs. 0.87±0.18和0.94±0.16;1.10±0.16 vs 0.90±0.15和0.97±0.17,F=33.4和12.9,P=0.0001和0.001。H.pylori阴性的NF-κB mRNA活性很低。在H.pylori阳性个体,NF-κB 活性显著增加。而且IL-1B-511T/T基因型个体比C/T和C/C基因型明显增加,分别为0.99±0.12vs 0.89±0.15和0.90±0.14,F=5.6,P=0.005。 结论 H.pylori感染促进TNF-α和NF-κ B mRNA表达,上调NF-κB活性,在IL-1B-511T/T基因型个体更明显。提示H.pylori感染后,存在IL-1B基因多态性→IL-1β↑→炎症细胞因子↑→胃癌发生的完整通路。     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.     

微小RNA-24对骨肉瘤细胞U2OS体外增殖与迁移能力的影响及作用机制

目的 探讨微小RNA-24(miR-24)对人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移能力的影响及其可能的机制.方法 通过转染miR-24模拟物(miR-24 mimic)建立miR-24过表达的U2OS细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、细胞活力检测方法(CCK-8法)和Transwell检测对照组、阴性对照组和miR-24过表达组3组细胞增殖及迁移能力的变化;Western blotting检测细胞的上皮间质转化(EMT)进程及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的活性.结果 对照组、阴性对照组和miR-24过表达组miR-24的表达水平分别为1.00±0.00、1.03±0.08和2.46±0.29,3组间差异有统计学意义(F=11.026,P=0.012),转染了miR-24 mimic后,人骨肉瘤细胞株U2OS中的miR-24表达水平与对照组相比显著升高(t=4.604,P=0.009).与对照组相比,人骨肉瘤细胞株U2OS过表达miR-24 24 h[(3.56±0.27)%∶(8.63±0.79)%]、48 h[(20.16±1.09)%∶(54.77±5.42)%)]和72 h[(45.47±3.16)%∶(95.52±8.56)%]后细胞增长率均明显降低,差异均有统计学意义(t=3.896,P=0.016;t=4.813,P=0.008;t=7.173,P=0.002).过表达miR-24 24 h后,对照组、阴性对照组和miR-24过表达组细胞相对迁移率分别为(100.00±0.00)%、(99.26±5.85)%和(31.37±2.09)%,3组间差异有统计学意义(F=12.175,P=0.009);与对照组相比,过表达miR-24后细胞迁移率明显降低(t=3.843, P=0.014).同时过表达miR-24上调细胞中上皮细胞标志物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadhe-rin,t=3.852,P=0.018)和β-连环素蛋白(β-catenin)的表达(t=3.512,P=0.024),而下调间质细胞标志物神经钙黏蛋白(N-cadherin,t=3.832,P=0.018)和波形蛋白(vimentin)的表达(t=4.058,P=0.012),抑制U2OS的EMT进程.此外,过表达miR-24可下调NF-κB(p65)(t=4.813,P=0.008)、磷酸化核因子IκB激酶抑制剂α(p-IKK-α)(t=3.764,P=0.013)和磷酸化激活IκB激酶复合物α(p-IκB-α)的表达(t=4.064,P=0.012),抑制NF-κB信号通路的激活.结论 miR-24可抑制人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活,进而抑制细胞的EMT进程相关.提示miR-24可作为治疗骨肉瘤迁移的一个潜在作用位点.     

苹果多糖抑制脂多糖引起宫颈癌Hela细胞的TLR-4/NF-κB 通路活化

目的:探讨苹果多糖(AP)对脂多糖(LPS)活化人宫颈癌细胞 Hela 中 TLR-4/NF-κB 通路的影响及相关机制.方法:培养Hela 细胞,将其分为对照组、LPS 处理组(1 μg/ml)、AP(0.5 mg/ml)+LPS处理组 (1 μg/ml),采用免疫荧光法观察 NF-κB 在细胞质、细胞核内的分布情况,免疫印迹法检测 Hela 细胞中 IκB-α,磷酸化 IκB-α,细胞核中NF-κB 以及细胞膜上TLR-4的蛋白变化.结果:AP 可抑制 LPS 刺激引起的 Hela 细胞的 NF-κB 核转位,可有效抑制 IκB-α 降解及 IκB-α的磷酸化,可降低细胞膜表面的 TLR-4表达.结论:AP可能通过抑制脂多糖活化 TLR-4分子来抑制NF-κB通路的激活.     

5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

 [摘要] 目的 研究5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导结肠癌细胞HCT116凋亡与核转录因子-κB (NF-κB) 活化以及uPA表达的关系，并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）抑制NF-κB活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响。方法 采用流式细胞仪Annexin Ⅴ-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化。结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-κB活化，1umol/LPDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P<0.05), uPA变化与NF-κB一致。结论5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κB，uPA表达亦随之增强；PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用，uPA表达也相应下降     

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人结肠癌细胞(HCT116)凋亡与核转录因子-κ B(NF-κ B)活化以及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的关系,并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)抑制NF-κ B活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响.方法 采用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化.结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-кB活化,1μmol/L PDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P＜0.05),uPA变化与NF-κB一致.结论 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κ B,uPA表达亦随之增强;PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT16细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用,uPA表达也相应下降.     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

食管鳞癌及癌旁粘膜中核转录因子κB p65及IκBα基因和蛋白表达及意义

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65基因及其抑制基因IκBα的表达与食管鳞癌发生的关系。方法:用RT-PCR及免疫组化SP法检测了61例食管鳞癌及其正常粘膜上皮、癌旁粘膜上皮中NF-κBp65基因、IκBα基因mRNA及蛋白的表达。结果:食管鳞癌中p65mRNA、IκBαmRNA的表达量明显高于正常上皮(P<0.01),p65蛋白、IκBα蛋白胞浆表达或胞核表达率均明显高于正常上皮(P<0.01)。癌旁粘膜中,NF-κBp65蛋白、IκBα蛋白在癌旁正常上皮中的胞浆或胞核阳性率均明显低于不典型增生上皮、原位癌和浸润癌(P均<0.05)。结论:NF-κBp65、IκBαmRNA表达和蛋白表达均与食管鳞癌的发生有关。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。