多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨。方法:用不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2mRNA表达。结果:经不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态。此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低。结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

藤黄酸抑制人结肠癌SW480细胞增殖过程中APC蛋白的表达变化

目的观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和APC蛋白表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法以不同浓度（0、0.5、1、4μg/ml）的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析APC蛋白的变化。结果 1μg/ml以上浓度的藤黄酸可以显著抑制人结肠癌细胞株SW480细胞增殖,且随浓度增加效果增强,随着时间增加抑制率显著增加（P〈0.01）。藤黄酸浓度达到4μg/ml时,G2/M期细胞达到54.74%;藤黄酸浓度为0、0.5、1、4μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为（0.17±0.08）%、（0.85±0.19）%、（7.12±1.21）%、（15.87±1.59）%。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,APC蛋白的表达随药物浓度的升高而增加（P〈0.01）。结论藤黄酸能够抑制人结肠癌细胞株SW480增殖并诱导其凋亡,干扰SW480细胞周期使其阻断于G2/M期,高表达APC蛋白有可能是藤黄酸抗癌作用的重要机制。     

蟾蜍灵对结肠癌SW-480细胞polo-like kinase-1表达及细胞凋亡的影响

目的：观察蟾蜍灵对人结肠癌细胞系增殖的抑制作用，并探讨其作用机理。 方法： 采用不同浓度的蟾蜍灵作用结肠癌SW-480细胞后，采用MTT法检测细胞的恶性增殖，分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡情况，分别采用Western blotting、Northern blotting分别检测polo-like kinase-1 (PLK1)蛋白、mRNA水平。 结果： 蟾蜍灵能抑制结肠癌细胞的恶性增殖，且与浓度相关。蟾蜍灵能诱导结肠癌细胞凋亡，且呈浓度依赖性。流式细胞仪检测发现，蟾蜍灵将细胞阻滞在G2/M期。蟾蜍灵能下调结肠癌PLK1蛋白、mRNA水平，且呈药物浓度和作用时间依赖性。 结论： 蟾蜍灵有效地抑制结肠癌SW-480细胞增殖，其机制可能与其下调PLK1表达，从而诱导凋亡有关。     

奥沙利铂对结肠癌SW480细胞迁移侵袭及细胞凋亡的影响

目的探讨奥沙利铂对结肠癌细胞SW480细胞的增殖、凋亡及迁移作用的影响。。方法体外培养结肠癌SW480细胞,加入不同浓度的奥沙利铂(5, 10, 20, 40μg/mL),分别培养0,24,48,72h后,平板克隆形成实验检测奥沙利铂对结肠癌SW480细胞生长能力的影响;细胞划痕实验观察实验处理前后SW480细胞的迁移能力的变化;Matrigel细胞侵袭实验检测奥沙利铂对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响;Real-time PCR和Western blot验证Bcl2、Bax、Bcl-Xl、E-Cadherin等基因的表达水平。结果奥沙利铂降低结肠癌SW480细胞的克隆形成率,显著抑制细胞的迁移能力,但奥沙利铂对结肠癌SW480细胞的侵袭能力无抑制作用;下调原癌基因Bcl2和Bcl-Xl的表达水平、上调抑癌基因Bax的表达水平。结论奥沙利铂抑制SW480细胞增殖、促进凋亡与下调Bcl2/Bax比值相关。     

槲皮素抗结肠癌细胞SW480生长的作用机制研究

【摘要】　目的　研究槲皮素抗结肠癌细胞SW480 生长的作用, 并探索其可能的作用机制。方法　通过CCK-8 法来检测SW480 细胞在槲皮素处理下的增殖变化; 运用HE 染色、电镜观察和流式细胞术方法检测SW480 细胞在槲皮素处理下的凋亡变化; 运用Transwell 检测槲皮素处理情况下SW480 细胞在体外的粘附、运动和侵袭能力变化; 运用明胶酶谱分析法检测槲皮素处理情况下SW480 细胞基质金属蛋白酶分泌能力的变化。结果　CCK-8 法检测显示槲皮素处理使SW480 细胞受到了显著的增殖抑制, 且具有剂量和时间依赖 性; HE 染色、流式细胞术及电镜分析发现槲皮素明显诱导细胞凋亡, 并将SW480 细胞周围阻滞于G2 / M期; 此外, 槲皮素也能够使结肠癌SW480 细胞的体外侵袭和运动能力受到抑制, 且该抑制作用呈剂量依赖性关系; 明胶酶谱法显示槲皮素处理后, SW480 细胞对金属蛋白酶2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase-9, MMP-9) 的分泌均下降。结论　槲皮素对人结肠癌SW480 细胞的增殖有明显的抑制作用, 并能促进SW480 细胞发生凋亡。槲皮素对结肠癌SW480 细胞的迁移及侵袭能力均表现出抑制作用, 并且呈剂量依赖性, 这可能和槲皮素能够抑制MMP-2 及MMP-9 的分泌有关。     

槲皮素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用

目的:检测槲皮素体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用.方法:采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制率;丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光染色观测细胞形态结构变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位（△ψm）.结果:槲皮素对人宫颈癌Hela细胞有明显的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.经槲皮素作用48 h后,AO/EB染色可见细胞呈凋亡形态学改变.100 μmol/L槲皮素作用Hela细胞24、48 h后,与对照组相比线粒体膜电位下降.结论:槲皮素体外能抑制人宫颈癌Hela细胞生长,引起线粒体膜电位下降,诱导细胞凋亡.     

AEG1蛋白在结肠癌细胞中表达异常及其调控IL-6/STAT3通路影响结肠癌增殖和凋亡的机制研究

目的探讨星形细胞上调基因1(AEG1)在结肠癌细胞中的表达及其调控IL-6/STAT3通路影响结肠癌增殖和凋亡的潜在机制。方法 RT-qPCR检测人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460和结肠癌细胞株SW480、HCT116中AEG1 m RNA表达,Western blot实验检测AEG1蛋白表达。将结肠癌SW480细胞随机分为5组:对照组、SH5-07处理组、si-NC组(siRNA干扰对照组)、si-AEG1组(siRNA干扰AEG1组)和si-AEG1+IL-6组,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果与NCM460细胞相比,结肠癌SW480、HCT116细胞中AEG1 mRNA和蛋白表达均升高(P0.05);与si-NC组比较,si-AEG1组结肠癌SW480细胞增殖活性降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),细胞中IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平降低(P0.05);与对照组比较,SH5-07组结肠癌SW480细胞增殖活性降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05);与si-AEG1组比较,si-AEG1+IL-6组结肠癌SW480细胞增殖活性增强(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05)。结论在结肠癌细胞中干扰AEG1的表达,能通过抑制IL-6/STAT3信号通路进而抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

苦参碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡与侵袭的作用及机制研究

目的探讨苦参碱(MAT)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及机制。方法将人结肠癌HT-29细胞分为空白对照组与苦参碱组(0.125、0.25、0.5、1mg/L)。不同浓度MAT干预24、48、72h后,MTT方法检测苦参碱对HT-29细胞增殖的抑制作用。1mg/L MAT干预48 h后,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡率;Transwell侵袭实验检测苦参碱对HT-29细胞侵袭能力的抑制作用;Western blot实验检测苦参碱对HT-29细胞Bcl-2、Bax、MMP-2与MMP-9的表达。结果不同浓度苦参碱均能显著抑制HT-29细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性。1mg/L MAT干预48 h后,HT-29细胞凋亡率升高;侵袭能力降低(P0.01);Bax、MMP-2与MMP-9蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P0.01)。结论苦参碱能够抑制人结肠癌HT-29细胞增殖与侵袭,并促进凋亡。     

敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

RNAi双沉默Survivin和hTERT基因抑制人结肠癌SW480细胞增殖促进凋亡

目的探讨双向沉默Survivin和h TERT基因对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法设计并构建能够稳定转录shRNA并可分别及联合干扰Survivin和h TERT分子表达的质粒,将其转染结肠癌SW480细胞后,分阴性对照组、空白质粒对照组、Survivin RNAi组、h TERT RNAi组和Survivinh TERT RNAi组。转染48h后TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测Survivin和h TERT mRNA的表达,Western blot检测Survivin和h TERT蛋白的表达,流式细胞仪及cck-8法分别检测细胞凋亡和细胞增殖的变化。结果 Survivin-h TERT RNAi组SW480细胞端粒酶活性明显下降(P0.01),Survivin-h TERT RNAi组Survivin及h TERT的mRNA水平较正常对照组分别减低82.8%和73.6%(P0.01),蛋白表达抑制率分别为79.2%和66.7%(P0.01)。实验各组中Survivin-h TERT RNAi组细胞增殖抑制率和凋亡率最高,分别为43.6%±0.1%和39.2%±2.3%(P0.01)。结论 Survivin和h TERT双干扰质粒可明显下调Survivin和h TERT蛋白的表达,抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。     

RNA干扰沉默增殖诱导配体基因对结肠癌细胞周期的影响

目的 探讨沉默增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因对人结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNA-APRIL)转染结肠癌SW480细胞株,以非特异性序列载体转染组(nontargeting control)及未转染组(nontransfected control)作为对照.Real-time PCR和Western blot评价APRIL沉默效率;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测细胞周期调控基因p21及p27的表达.结果 与非特异性序列载体转染组及未转染组相比,siRNA-APRIL显著抑制APRIL mRNA及蛋白的表达(P＜0.05);siRNA-APRIL转染SW480细胞48 h、72 h和96 h后细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);转染48 h,siRNA-APRIL组G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡的数量增加,同时p21及p27 mRNA的表达上调(P＜0.05);而上述指标两对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 siRNA-APRIL能特异性抑制结肠癌SW480细胞APRIL的表达,并抑制细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,其机制可能与上调p21和p27的表达有关.     

TIPE3 干扰质粒对SW480 结肠癌细胞生长的作用及相关机制探讨

目的:通过TIPE3 干扰质粒转染SW480 结肠癌细胞,验证干扰TIPE3 表达对SW480 结肠癌细胞生长的影响并探讨相关机制。方法:构建TIPE3-shRNA-pSIREN-RetroQ 干扰质粒,通过脂质体转染法成功将干扰质粒导入SW480 细胞,通过RT-PCR、Western blot 检测重组质粒的干扰效率。应用CCK-8 方法检测SW480 细胞生存率。AnnexinV-FITC/ PI 流式细胞法检测细胞凋亡。使用Western blot 检测细胞增殖、凋亡相关分子的表达情况。结果:成功设计、构建和筛选具有生物活性且干扰效率最佳的TIPE3-shRNA-pSIREN-RetroQ 干扰质粒。CCK-8 检测证实干扰SW480 结肠癌细胞TIPE3 表达可以抑制细胞生长。流式结果显示,TIPE3-shRNA3 干扰组的凋亡率为(27.99±1.087)%,显著高于正常细胞组(12.10±2.213)% 及转染空载质粒组(11.44±0.277 0)%。证实了降低TIPE3 表达可以增加SW480 对aDR5ScFv 所诱导的细胞凋亡敏感性。Western blot结果显示干扰TIPE3 表达可以活化caspase3 蛋白,降低p-AKT、p-PDK1、PCNA 等分子的表达。结论:干扰TIPE3 的表达对 SW480 结肠癌细胞具有促进凋亡,抑制增殖的作用。     

土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P<0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P<0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。     

GSK-3β抑制剂对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂(2'Z,3'E)-6-溴靛'-3'-肟(BIO)对结肠癌SW480细胞β-catenin 、Bcl-2蛋白表达及细胞周期、凋亡的影响。方法: 应用不同浓度BIO作用于结肠癌SW480细胞,采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting检测β-catenin 和Bcl-2蛋白表达,免疫细胞化学检测β-catenin 及cyclin D1的表达,HE染色观察细胞形态。结果: 与BIO处理前SW480细胞相比,BIO处理组SW480细胞β-catenin蛋白表达明显上调并出现部分细胞核移位,cyclin D1蛋白表达及S期和G₂/M期细胞不同程度增多,Bcl-2蛋白表达有所下调,细胞凋亡率明显下降,并出现细胞形态改变。结论: GSK-3β抑制剂BIO作用于结肠癌SW480细胞呈现促增殖及抑凋亡作用,其机制主要与β-catenin信号转导通路激活以及与Bcl-2调控通路的平衡有关,其中β-catenin上调可能是影响结肠癌SW480细胞转归的主要因素。     

RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨抑制HOXB7 基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法:通LipofectamineTM2000 脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7 转染组)转染人结肠癌SW480 细胞,未经特殊处理的细胞为空白组。收集转染48 h 的细胞,RT-PCR 及Western blot 分别检测细胞中HOXB7 的mRNA 及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8 法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h 细胞的凋亡情况;Western blot 检测凋亡相关蛋白B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bc-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Notch1 信号通路Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:HOXB7 转染组HOXB7 的mRNA 及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h 后三组细胞的OD 值间差异无统计学意义(P>0.05),48、72、96 h 后,与空白组比较,HOXB7 转染组OD 值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7 转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1 蛋白显著下调表达,Bax 蛋白显著上调表达(P<0.05)。结论:RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达可通过抑制Notch1 信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

CD40配体对结肠癌细胞株的体外抑制作用

研究免疫共刺激分子CD40在结肠癌细胞株的表达及重组可溶性人CD40配体(rshCD40L)对结肠癌细胞株的体外抑制作用。采用流式细胞仪分别检测4株结肠癌细胞(HCT116、Caco-2、SW48和COLO-320)CD40分子的表达,同时利用流式细胞仪检测γ干扰素(IFN-γ)对结肠癌细胞株CD40表达的影响。MTT法检测rshCD40L对结肠癌细胞的抑制作用,TUNEL法检测rshCD40L对结肠细胞的促凋亡作用,同时检测联合rshCD40L和IFN-γ抗结肠癌作用。结果流式细胞仪检测有3株结肠癌细胞(HCT116、Caco-2和SW48)表达CD40分子,IFN-γ能增强CD40+结肠癌细胞CD40分子的表达。rshCD40L能明显抑制CD40+结肠癌细胞的增殖作用(抑制率分别为HCT116:33.5%±5.5%;Caco-2:21.5%±3.6%;SW48:30.1%±4.2%),而对CD40-结肠癌细胞株(COLO-320)无明显抑制作用(P<0.05)。rshCD40L能诱导CD40+结肠癌细胞的凋亡作用(凋亡细胞百分比为HCT116:25.6%±4.52%;Caco-2:15.71%±2.27%;SW48:18.0%±3.7%),而对CD40-结肠癌细胞株(COLO-320)无诱导凋亡作用(P<0.05)。另外,IFN-γ能明显增强rshCD40L对结肠癌细胞的抑制增殖和促凋亡作用。重组人CD40配体与IFN-γ联合可显著诱导CD40阳性的结肠癌细胞凋亡,抑制其增殖,具有潜在的抗肿瘤作用。