兔不同节段椎间盘髓核细胞培养特性的比较

目的:探讨兔颈段、胸段及腰段椎间盘髓核细胞的培养特性.方法:3～4月龄兔10只,麻醉后,在无菌条件下手术分离整段脊柱,分别取颈段(C1/2～C7/T1)、胸段(T1/2～T1/L1)、腰段(L1/2～L7/S1)髓核细胞进行培养,于培养后的24h计算贴壁率.并于贴壁后的第3、7、14及21天计算细胞死亡/成活比,判断细胞活力并检测蛋白多糖的含量.结果:颈段、胸段、腰段细胞贴壁率差异具有显著性,腰段细胞贴壁牢最高(P<.01).不同节段之间,在多个时间点观察髓核细胞死亡/存活比差异具有显著性,腰段椎间盘髓核细胞的死亡/成活比最低(P<0.01).不同节段之间,不同时间点观察的蛋白多糖含量差异具有显著性,且腰段椎间盘髓核细胞的蛋白多糖含量最高(P<.01).结论:腰段椎间盘髓核细胞较颈段及胸段的髓核细胞生长状态好,兔腰椎髓核细胞更适宜作为细胞培养的种子细胞.     

腰痛患者腰椎3.0T MR弥散加权成像腰椎间盘表观弥散系数与椎间盘退变分级的相关性

【摘要】 目的：分析腰痛患者腰椎3.0T MR弥散加权成像（diffusion weighted image,DWI）椎间盘的表观弥散系数（apparent diffusion coefficient,ADC）与椎间盘退变形态学分级的相关性。方法：2012年6月~2012年11月对60例腰痛患者行腰椎3.0T MR T2加权成像（T2 weighted image, T2WI）和DWI扫描。男30例,女30例,年龄19～66岁,平均42.5±11.9岁。在MR常规T2WI序列上对腰椎间盘按Pfirrmann标准进行形态学分级,在矢状面ADC图上对正中层面椎间盘进行ADC值测量。对腰椎间盘ADC值与Pfirrmann分级之间的相关性采用Spearman相关分析,并对椎间盘不同Pfirrmann分级的ADC值进行单因素方差分析,如有差异进一步进行LDS法两两检验。结果： 腰椎间盘Pfirrmann分级为Ⅰ级45个（15%）,Ⅱ级61个（20.3%）,Ⅲ级74个（24.7%）,Ⅳ级113个（37.7%）,Ⅴ级7个（2.3%）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级椎间盘的ADC值分别为1.73±0.21、1.74±0.15、1.62±0.24、1.23±0.37、0.81±0.32（10-3mm2/s）。腰椎间盘不同Pfirrmann分级的ADC值有显著性差异（F=56.9,P=0.000）,不同分级间差异进一步行LDS法两两检验,Ⅰ级的ADC值与Ⅱ级比较无显著性差异（P＞0.05）,Ⅲ级、Ⅳ级、Ⅴ级分别与Ⅰ级、Ⅱ级比较均有显著性差异（P＜0.05）,Ⅲ级、Ⅳ级、Ⅴ级之间两两比较均有显著性差异（P＜0.05）。腰椎间盘ADC值与其Pfirrmann分级呈明显负相关（r=-0.624,P=0.000）。结论： 腰痛患者腰椎3.0T MR DWI腰椎间盘的ADC值与椎间盘退变分级呈负相关。     

不同Pfirrmann分级椎间盘内髓核细胞生物学特性的比较

目的比较不同Pfirrmann分级椎间盘内髓核细胞的生物学特性,验证腰椎间盘退变Pfirrmann分级能否反应髓核组织在细胞水平的退变程度。方法取术中获得的患者的髓核组织,按腰椎椎间盘退变Pfirrmann分级标准进行分组。组织切片甲苯胺蓝观察比较各组髓核内细胞的密度。采用酶消化法分离培养髓核细胞。台盼蓝染色计算各组细胞活性比率,光镜观察细胞形态,透射电镜观察细胞的超微结构。MTT法绘制各组2代细胞的生长曲线。阿利辛蓝法检测各组细胞的蛋白聚糖含量,比较各组差异。结果随退变级别升高,标本内胶冻样物质含量减少,透明度降低,纤维化组织增多,Ⅴ级标本完全纤维化,并伴有钙化,无法区分髓核组织。Ⅰ级和Ⅱ级髓核内细胞密度明显高于Ⅲ级,Ⅳ级又明显高于Ⅳ级。Ⅰ级组髓核细胞的活性比率为（93.5±3.7）%;Ⅱ级组细胞活性比率为（91.6±4.3）%;Ⅲ级组细胞活性比率为（83.5±6.7）%;Ⅳ级组细胞活性比率为（74.8±5.9）%。除Ⅰ级与Ⅱ级比较差异无统计学意义外,其余各组两两比较差异均具有统计学意义（P〈0.05）。光镜下Ⅰ级和Ⅱ级组细胞呈短梭形或多角形轮廓清晰饱满,折光性强。Ⅲ级组胞突较长,Ⅳ级组胞突更长,细胞轮廓模糊。电镜下Ⅰ级和Ⅱ级组细胞相似,胞浆内含有大量粗面内质网和线粒体,Ⅲ级组细胞内的粗面内质网和线粒体减少,出现小的空泡,可见溶酶体出现。Ⅳ级组细胞溶酶体大量聚集,可见巨大的空泡样结构。Ⅰ级组和Ⅱ级组细胞生长速率快于Ⅲ级组（P〈0.01））。Ⅲ级组细胞生长速率快于Ⅳ级组（P〈0.05）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组细胞GAG含量分别为（423.19±41.21）mg/L,（408.23±29.25）mg/L、（273.05±52.44）mg/L、（91.73±38.06）mg/L,Ⅰ级组和Ⅱ级组细胞高于于III级组（P〈0.05））。Ⅲ级组细胞高于Ⅳ级组（P〈0.05）。结论椎间盘退变的Pfirrmann分级,能很好的反映髓核组织在细胞水平的退变程度。是一种简单有效的退变分级系统。     

不同Miyazaki分级颈椎间盘内髓核细胞的生物学特性

目的 :比较不同Miyazaki分级颈椎间盘内髓核细胞生物学特性的差异,评估该分级系统反映颈椎间盘退变程度的可靠性与一致性。方法:收集我院2017年12月～2018年7月36例行颈前路手术患者术中切除的颈椎间盘髓核组织。患者男21例,女15例,年龄为41.2±4.5岁,手术节段为单节段27例,两节段9例。将收集到的45个髓核组织按照术前颈椎MRI T2像上的Miyazaki分级分为4组,依次为Ⅱ级(n=6),Ⅲ级(n=10),Ⅳ级(n=14),Ⅴ级(n=15)。组织切片后行甲苯胺蓝染色,观察髓核组织内细胞的密度以及分布情况。免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹实验检测不同分级组织内聚集蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,ColⅡ)的表达量。采用酶消化法分离不同分级髓核组织内的细胞并进行体外培养,光镜下观察髓核细胞的形态,台盼蓝染色测定各组髓核细胞的活性比率,CCK-8法绘制各组1代髓核细胞的生长曲线。结果:Ⅱ级组髓核组织内细胞密度显著高于Ⅲ级组,Ⅲ级组高于Ⅳ级组,Ⅴ级组的细胞密度最低。Aggrecan和ColⅡ在Ⅱ级组织中表达量最高,Ⅲ级组高于Ⅳ级组,Ⅴ级组中表达量最低,组间比较均有统计学差异(P0.05)。Ⅱ级组椎间盘内髓核细胞多呈三角形、短梭形,折光性较好;Ⅲ级组髓核细胞出现突起,轮廓不清晰;Ⅳ级组细胞形态多呈长梭形,细胞扁平且突起明显;Ⅴ级组髓核细胞形态各异,轮廓模糊,折光度差。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级组的细胞活性比率分别为(94.8±2.8)%、(84.3±2.6)%、(75.1±4.8)%和(66.1±3.3)%,其中Ⅱ级组高于Ⅲ级组,Ⅳ级组低于Ⅲ级组,而Ⅴ级组最低,组间比较均有统计学差异(P0.05)。Ⅱ级组髓核细胞生长速率比Ⅲ级组快,Ⅲ级组比Ⅳ级组快,Ⅴ级组生长速率最低,组间比较均有统计学差异(P0.05)。结论:颈椎间盘Miyazaki分级系统可以较好地反映髓核细胞的生物学特性和颈椎间盘的退变程度,可作为临床治疗和诊断的重要参考。     

人工髓核柔性稳定系统对犬邻近颈椎间盘影响的实验研究

目的：比较人工髓核柔性稳定一体化系统与钢板内固定系统置入对犬施术节段邻近颈椎间盘退变的影响。方法：选择健康杂种犬23只,雌雄不限,犬龄1.5～2.5岁,体重20.0～30.0kg。预实验组5只,测量犬颈椎间盘压力正常参考值。18只实验用犬随机分为人工髓核柔性稳定组（A组,9只）及钢板内固定组（B组,9只）,均经前路行C3/4椎间盘摘除、内置物置入手术。术中测量邻近颈椎间盘（C4/5）压力,并计算施术前后C4/5椎间盘压力差作为撑开压力,t检验比较A、B组间压力差有无显著性差异。术后6个月处死动物,行影像学（Pearce标准）及组织学观察,评价邻近上位颈椎间盘（C2/3）退变程度。结果：A、B组间施术前后邻近颈椎间盘（C4/5）压力差无显著性差异（P〉0.05）。术后6个月,B组动力位X线片发现C2/3有失稳表现者4例（44.4%）。MRIT2加权像C2/3椎间盘Pearce分级A组（平均1.78级）低于B组（平均3.22级）;A组C2/3椎间盘退变组织学分级（平均1.56级）亦低于B组（平均2.78级）,且差异均有显著性（P〈0.05）。各组内撑开压力与椎间盘退变分级呈正相关（P〈0.05）。结论：过高的撑开压力易导致犬施术节段邻近颈椎间盘退变,应用人工髓核柔性稳定系统较钢板固定可以有效防止邻近节段的退变。     

经皮椎间孔镜髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症的中期疗效分析

目的探讨经皮椎间孔镜髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法回顾性分析自2015-02—2016-02采用经皮椎间孔镜髓核摘除术治疗的43例腰椎间盘突出症,比较术前与末次随访时疼痛VAS评分及JOA评分。结果43例均获得随访,随访时间42~54个月,平均50.2个月。1例术后髓核部分残留,并压迫神经根,1例术后第5天出现一过性神经根性痛觉过敏,2例术后再发椎间盘突出,对症治疗后均治愈。末次随访时疼痛VAS评分较术前低,JOA评分较术前高,差异有统计学意义(P<0.05)。末次随访时疗效按改良MacNab标准进行评价:优16例,良20例,可4例,差3例,优良率83.7%。末次随访时43例复查MRI显示36例突出的椎间盘髓核完全摘除,术前Pfirrmann等级均为Ⅲ级,末次随访时32例恢复至Pfirrmann Ⅱ级,4例仍为Pfirrmann Ⅲ级;7例存在不同程度的椎间盘残存,其中1例术后症状缓解不明显,其余6例均无神经根压迫症状,7例术前Pfirrmann等级均为Ⅱ级,末次随访时1例恢复至Pfirrmann Ⅱ级,6例仍为Pfirrmann Ⅱ级。结论经皮椎间孔镜髓核摘除术是治疗腰椎间盘突出症的一种有效手术方式,其中期临床疗效满意。     

直立体位下无创轴向加载建立兔椎间盘退变动物模型

目的:通过直立体位下无创性轴向加载的方式,建立一种新型兔腰椎间盘早期退变的动物模型。方法:24只4月龄雄性新西兰大白兔随机分为实验组及对照组。将实验组动物置于特制筒内使之保持直立体位,并自颈部施以600g轴向载荷,每日6h;对照组动物不接受任何处理而常规饲养。在实验开始前及实验开始后4周、8周、12周时对全部动物行X线及MRI检查,观察实验组动物在筒内时腰椎的骨性结构,通过椎间盘高度指数(disc height index,DHI)测量,比较两组动物侧卧位时L2/3、L4/5和L6/7节段椎间隙高度改变;通过髓核相对灰度值测量比较两组动物髓核含水量变化。14周后全部动物处死,取L5/6节段胶冻状髓核组织,应用rtPCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原及蛋白多糖表达水平;取L6/7节段椎间盘连同上、下各1mm软骨下骨,应用HE及天狼星红染色观察各组动物椎间盘组织结构改变。结果:2只实验组动物在实验过程中死亡,其对应的实验数据从结果中剔除。腰椎X线片显示,在直立体位负重条件下,实验组兔腰椎形成明显后凸,较侧卧位下腰椎间隙明显变窄,在L2/3节段,直立体位下椎间隙高度为侧卧位时的75.1%(P0.05);在L4/5节段为54.8%(P0.05);在L6/7节段为47.9%(P0.05)。DHI测量显示两组动物腰椎各节段DHI在任何时间点均无显著差异(P0.05)。MRI结果显示,在L2/3节段,实验组与对照组髓核灰度值在任何时间点均无统计学差异(P0.05),在L4/5节段,实验组与对照组髓核相对灰度值在12周时开始具有显著差异(P0.05);在L6/7节段,两组间在8周时即开始有显著性差异(P0.05)。rt-PCR结果显示,实验组Ⅰ型胶原m RNA表达明显高于对照组(3.57倍,P0.05);而Ⅱ型胶原及蛋白多糖表达明显低于对照组(分别为0.35倍和0.43倍,P0.05)。病理学检查显示对照组与实验组椎间盘组织结构存在显著差异,对照组髓核组织与纤维环间边界清晰,髓核内富含均匀分布的髓核细胞;实验组内层纤维环明显增生,而髓核区域相应减小。结论:直立体位下无创性轴向加载方式可显著加速兔腰椎间盘的退变进程,其在发病机理上与人类椎间盘退变更加相似,该腰椎间盘退变动物模型操作简单、可重复性强。     

颈椎间盘退变程度与颈椎矢状力线参数的相关性分析

目的探讨颈椎间盘退变程度与颈椎矢状力线参数变化的相关性,为颈椎退行性疾病的防治提供参考。方法自2017年9月-2018年9月纳入52例颈椎退行性疾病患者,通过X线测量其颈椎矢状力线参数,采用MRI检查评价颈椎间盘退变的Pfirrmann分级情况。颈椎矢状力线参数包括:T_1倾斜角(T_1slope,T_1S)、颈椎前凸角(Cervical lordosis angle,CLA)、颈倾斜角(neck tilt,NT)、胸廓入口角(thoracic inlet angle,TIA)和颈椎矢状面轴向垂直距离(C_2-C_7sagittal vertical axis,C2-7SVA); Pfirrmann分级共Ⅰ～Ⅴ级,分别设定为1-5分,对C_2-C_7中5个节段分别进行Pfirrmann分级评分,总分为5～25分。对不同Pfirrmann分级与颈椎矢状力线参数的相关性进行Spearman分析。结果 (1)以52例患者的各项矢状力线参数中位值为界限,将5项参数各分为≥中位值和中位值的亚组共5组,比较各亚组内C_2-C_7所有节段的Pfirrmann分级评分:T_1S亚组中的C_(5-6)、C_(6-7)节段Pfirrmann评分、CLA亚组的所有节段Pfirrmann评分,以及C_(2-7)SVA亚组的所有节段Pfirrmann评分均有显著的组内差异(P0. 05);(2)以Pfirrmann评分15分作为轻度退变,≥15分为中重度退变进行分组,Pfirrmann≥15分组的T_1S、CLA值显著低于Pfirrmann15分组,NT和C_(2-7)SVA显著高于Pfirrmann15分组,组间差异均有统计学意义(P0. 05)。(3) Spearman相关性分析显示,CLA与颈椎间盘退变Pfiffmann评分之间呈显著的负相关关系(r=-0. 618,P=0. 004); C_(2-7)SVA则与之呈显著的正相关关系(r=0. 725,P=0. 001)。结论颈椎间盘退变人群的颈椎矢状力线参数可发生明显变化,其中CLA与颈椎间盘退变Pfiffmann评分之间呈显著的负相关关系,C_(2-7)SVA则与之呈显著的正相关关系。     

1-磷酸鞘氨醇受体在不同退变程度髓核组织中的表达变化

目的 :比较不同退变程度人椎间盘髓核组织中3种1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1/2/3)表达水平的差异,探讨椎间盘中S1PR表达水平与椎间盘退变的关系。方法:收集腰椎间盘退行性病变患者手术切除的椎间盘组织,其中轻度退变(Pfirrmann分级Ⅳ级)22例,严重退变(Pfirrmann分级Ⅴ级)14例;同时取6例无椎间盘退变患者(单纯腰椎椎体骨折,Pfirrmann分级Ⅱ级)手术切除的椎间盘组织作为对照组;通过HE染色以及Saf-O染色观察不同退变程度椎间盘的组织学变化,免疫组化检测不同退变程度组织中的S1PR表达水平;Ⅱ型胶原酶消化分离提取原代髓核细胞,通过Real-time PCR、Western-bolt检测不同退变程度椎间盘髓核细胞中S1PR的表达水平,并通过细胞免疫化学方法对S1PR进行定位。结果:HE染色及Saf-O染色结果显示退变椎间盘的纤维环出现破损,髓核细胞形成明显的集落,细胞外基质减少。免疫组化结果显示正常和轻度退变的髓核组织中3种受体(S1PR1/2/3)都有表达,严重退变的组织中表达极弱;Real-time PCR结果显示对照组髓核细胞中S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的5.34±0.52倍、7.25±0.04倍、1.92±0.06倍,轻度退变组S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的4.35±2.45倍、4.96±3.44倍、2.19±0.82倍;Western-blot发现对照组和轻度退变组髓核细胞中S1PR1/2/3均有表达,严重退变组表达水平较低;免疫细胞化学显示S1PR主要集中在髓核细胞的细胞质和细胞膜上。结论:髓核组织中主要表达S1PR1/2/3,在严重退变的髓核组织和细胞中其表达水平明显下降,S1P及其受体可能参与椎间盘髓核组织的退变过程。     

LOX在人体退变椎间盘髓核组织中的表达及临床意义

目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)在人体退变椎间盘髓核组织中的表达及其临床意义。方法选取自2018-01—2018-12诊治的22例腰椎间盘突出症患者作为观察组,将4例同期突发创伤导致腰椎椎体骨折行手术摘除椎间盘的年轻患者作为对照组。按照椎间盘Pfirrmann分级分组,对照组为Ⅰ级(A组);观察组细分为4组,B组为Ⅱ级,C组为Ⅲ级,D组为Ⅳ级,E组为Ⅴ级。取各组椎间盘髓核组织行免疫组化、Western Blot、PT-PCR检测。结果观察组髓核细胞数量及细胞外基质成分明显少于对照组。LOX在髓核细胞中的阳性表达率与Pfirrmann分级、年龄呈负相关。各组LOX蛋白表达量:A组2.69±0.24,B组2.24±0.32,C组1.34±0.19,D组1.30±0.32,E组1.01±0.12。各组LOXmRNA表达量:A组1.06±0.03,B组0.83±0.07,C组0.71±0.09,D组0.53±0.09,E组0.27±0.05。随着椎间盘退变程度加重,髓核组织LOX蛋白表达水平、mRNA表达水平呈逐渐降低趋势。结论 LOX的蛋白及mRNA表达水平随着人体椎间盘退变程度加重而降低,LOX可能参与了人体椎间盘髓核组织退变的发生与发展过程。     

全身弥散加权成像技术进展及其临床应用

全身弥散加权成像（WB-DWI）是一种评价全身多发病变的新型影像技术,能对全身病变提供有益的信息,在应用中需要与其他成熟的序列比如STIR相结合。一个完整的扫描序列及合成WB—DWI的总时间在40分钟以内。本文对全身DWI可行性、局限性及初期临床应用效果作如下综述。     

胰腺内分泌肿瘤磁共振影像学特征

胰腺内分泌肿瘤是一种少见肿瘤,分为功能性和无功能性两大类,临床表现各异,容易漏诊和误诊.随着MRI技术的发展,特别是脂肪抑制技术、弥散加权成像扫描(DWI)及动态增强MRI扫描的应用,对胰腺内分泌肿瘤的影像学诊断及鉴别诊断具有重要价值.本研究回顾性分析2007年6月至2011年12月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院收治的13例胰腺内分泌肿瘤患者的临床资料,旨在总结该病的MRI检查表现特征,评价MRI检查特别是DWI和动态增强扫描对胰腺内分泌肿瘤的诊断价值.     

对比分析间变型脑膜瘤与非典型脑膜瘤的MRI特征

目的比较间变型脑膜瘤与非典型脑膜瘤MRI征象。方法回顾性分析经手术病理证实的20例间变型脑膜瘤与30例非典型脑膜瘤的MRI资料,比较两种脑膜瘤的MRI征象。结果间变型脑膜瘤与非典型脑膜瘤相比,肿瘤分叶征、坏死囊变、瘤周水肿及瘤脑界面模糊4项差异均有统计学意义(P均0.05);肿瘤出血、强化均匀性、脑膜尾征及邻近骨质改变4项差异无统计学意义(P均0.05)。结论间变型脑膜瘤与非典型脑膜瘤MRI征象存在差异,有助于鉴别诊断。     

The usefulness of a magnetic endoscope locating device in colonoscopy in daily practice: a prospective case-controlled study

Background  This study aimed to investigate the effects of magnetic endoscope imaging (MEI) regarding examination time, caecal intubation rate, and sedation and analgesic requirements during routine colonoscopy compared with earlier used X-ray imaging. Methods  Consecutive outpatients undergoing colonoscopy were prospectively studied for two periods. In the first period X-ray was used to establish the correct position of the endoscope. In the second period MEI was used. Outcome measures were examination time, caecal intubation rate, median dose of analgesic and sedative administered, and median X-ray dose used. Results  The two groups studied were comparable with regards to age, sex, and number of therapeutic examinations. The examination time was significantly shorter with use of MEI (median 29 min versus 43 min). No significant differences in the use of analgesic and sedative were found (median 50 μg phentanyle and 2 mg midazolam in both groups). Median X-ray dose was 150 cGy in the group using X-ray imaging. Conclusion  MEI is the imaging methodology of choice and should always be available in colonoscopy, especially for precise locating of colonic lesions.