氧化槐定碱通过下调IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制结直肠癌SW480细胞增殖

目的:探讨氧化槐定碱(Oxysophoridine,OSR)抑制SW480细胞增殖的IKK/IκB/NF-κB信号通路机制。方法:采用MTT法分析2、4、8、16、32、64、128及256 mg/l浓度氧化槐定碱作用72 h对SW480细胞增殖的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC_(50));将25、50及100 mg/l氧化槐定碱作用于SW480细胞,绘制7 d生长曲线;观察细胞集落形成情况;采用RT-PCR和Western blot法检测细胞IKKβ、NF-κB、IκBαmRNA和蛋白表达水平。结果:MTT结果提示氧化槐定碱浓度为2～256 mg/l时,对SW480细胞72 h增殖抑制率为4.76%～81.90%,IC_(50)=(79.04±5.30)mg/l;生长曲线提示氧化槐定碱25、50和100 mg/l对SW480细胞生长具有明显的抑制作用;显著抑制SW480细胞的集落形成;氧化槐定碱25、100 mg/l可下调SW480细胞NF-κB、IKKβmRNA和蛋白表达水平,上调IκBαmRNA和蛋白表达水平。结论:氧化槐定碱对SW480细胞生长、增殖具有抑制作用,其作用机制可能与抑制IKK/IκB/NF-κB信号通路有关。     

鼠尾草酸对人结肠癌细胞增殖抑制作用及增强其对5-氟脲嘧啶敏感性的研究

目的 研究鼠尾草酸（carnosic acid,CA）抑制人结肠癌细胞SW480增殖和增强化疗药物5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracil,5-FU）敏感性的作用及机制。方法 结晶紫染色法检测CA对SW480增殖的抑制作用,流式细胞技术分析和MTT法检测CA和5-FU联合使用对人结肠癌细胞SW480凋亡和细胞活力的影响。采用β-catenin荧光素酶报告基因（TOP-Flash）检测CA作用后SW480细胞内β-catenin活性改变。不同浓度CA处理SW480后,Western blot检测β-catenin蛋白质表达水平变化,RT-PCR法检测其下游基因Cyclin D1和P-gp（P-glycoprotein）的mRNA表达水平变化。结果 CA对人结肠癌SW480细胞增殖有抑制作用,且CA能够增强5-FU对结肠癌细胞凋亡和细胞活力的影响。CA处理后细胞内β-catenin转录活性明显降低,Western blot法和RT-PCR法结果显示CA下调了β-catenin的蛋白水平及下游基因Cyclin D1和P-gp mRNA表达。结论 CA能够抑制人结肠癌SW480细胞增殖和增强5-FU的抗肿瘤效果,其机制可能与抑制β-catenin活性并下调其下游基因Cyclin D1和P-gp表达有关。     

银杏叶提取物对核因子-κB转录通路干预作用的研究

目的:通过探讨HL-60细胞被TNF-α激活后NF-κB及IκBα活化的改变,了解银杏叶提取物(GbE)在治疗哮喘中部分可能的分子机理.方法:以HL-60细胞作为工具细胞,分別经TNF-α、GbE刺激,转染带有报告基因的质粒pNF-κB-Luc,通过荧光素酶的表达情况检测NF-κB活性变化;用免疫印迹方法检测IκBα的活化状况.结果:检测结果显示,以GbE预处理HL-60细胞可以明显抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活的活性;但用GbE预处理细胞并不能拮抗TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和降解,将GbE处理细胞时间延长和加大GbE的浓度同样不能阻止IκBα的磷酸化和降解.结论:GbE能抑制NF-κB激活的基因转录但并不是通过干扰经典的NIK/ IKK/IκBα活化途径,而是通过干扰其它途径或采用其它方式来实现的.     

雷公藤内酯醇对结肠癌细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

 目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物,同时提取各组细胞蛋白质,TransAM测定核转录因子NF-κB活性。结果TP对结肠癌细胞株COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,而且也抑制SW114细胞的NF-κB活性,这些作用与剂量呈依赖关系。结论TP对SW114细胞COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,这种作用可能通过增强TP对核转录因子NF-κB活性的抑制作用而实现,揭示了TP抗肿瘤的部分依据。     

白芍总苷对巨噬细胞核转录因子-κB活化的影响及其机制研究

目的:研究白芍总苷(TGP)对核转录因子-κB(NF-κB)活化的调节作用及其机制。方法:不同剂量(10,30,100,300μg.mL^-1)的TGP作用于大鼠腹腔巨噬细胞2 h后,加入脂多糖(LPS)刺激20 min或1 h,Westernblot方法分别观察NF-κB抑制蛋白IκBα在胞浆中的含量及NF-κB亚基p65在胞核中的含量,同时检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:TGP显著增加了LPS刺激后的巨噬细胞胞浆中IκBα蛋白的含量,同时显著减少了胞核中NF-κB p65蛋白含量,并对LPS诱导的NF-κB与DNA的结合活性也有明显抑制作用。结论:TGP可抑制LPS诱导的巨噬细胞NF-κB的活化,其机制与TGP抑制IκBα蛋白的降解,阻遏NF-κB p65蛋白的核转移和抑制NF-κB与DNA的结合密切相关。     

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的：以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法：以噻唑蓝（MTT）法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果：siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义（P〈0.01）。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异（P〉0.05）。结论：采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。     

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。     

去甲斑蝥素抗骨髓瘤作用及其机制研究

目的 探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)抗骨髓瘤作用及其相关机制.方法 MTT法检测NCTD对人骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的抑制作用,并观察其对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting 检测核因子-κB (NF-κB) p65、磷酸化NF-κB p65 (p-NF-κB p65)、NF-κB抑制因子IkBα、磷酸化IkBα(p-IkBα)、IkB激酶α(IKKα)以及Survivin、Bcl-2、Bax蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3活性,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达.结果 NCTD抑制RPMI 8226细胞增殖,促进其凋亡;其剂量为20、40 mg/kg时对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为29.8％、53.5％.NCTD抑制胞核NF-κB p65、p-NF-κB p65以及胞浆p-IkBα、IKKα的表达,增加胞浆IkBα的表达,对胞浆NF-κB p65的表达无显著影响.NCTD还抑制Survivin、Bcl-2蛋白的表达,促进Bax的表达和RPMI 8226细胞Caspase-3的活化,Caspase-3抑制剂能部分拮抗NCTD引起的RPMI 8226细胞凋亡(P＜0.05).结论 NCTD对RPMI 8226细胞有抗增殖和促凋亡作用,其机制可能与NF-κB信号通路有关.     

刺芒柄花素对高糖诱导的小鼠系膜细胞炎症因子调控及增殖的影响

目的探讨刺芒柄花素对高糖诱导的小鼠系膜细胞核核因子-κB(NF-κB)信号通路相关炎症因子调控及增殖的影响。方法利用小鼠肾小球系膜细胞系SV40 MES13细胞,设立低糖对照组(low glucose,NG)、高糖组(high glucose,HG)和刺芒柄花素组(HG+formononetin)。利用双荧光素酶报告基因系统检测高糖诱导的NF-κB信号通路的活化水平,Western blot检测各组p65、核因子-κB激酶抑制蛋白β(IKKβ)、核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)磷酸化水平,并采用免疫荧光检测p65细胞核转运情况。荧光实时定量PCR检测各组单核细胞趋化蛋白-1(Mcp1)、集落刺激因子-1(Csf1)、细胞间黏附分子-1(Icam1)、血管细胞黏附分子-1(Vcam1)mRNA表达,并采用MTT和Ki67检测高糖诱导系膜细胞增殖。结果刺芒柄花素能剂量依赖性抑制NF-κB信号通路的活化,通过抑制p65、IKKβ、IκBα的蛋白磷酸化水平和p65细胞核转运,调节炎症因子Mcp1、Csf1、Icam1、Vcam1 mRNA的表达,并抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞的增殖。结论刺芒柄花素对高糖诱导的小鼠系膜细胞NF-κB信号通路及系膜细胞增殖具有抑制作用。     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。     

藏药湿生扁蕾提取物对人结肠癌SW480细胞增殖和周期的影响

目的：探讨藏药湿生扁蕾提取物（GPM）对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的作用机制。方法：采用MTT比色法测定GPM对SW480细胞体外细胞毒活性,采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：GPM对结肠癌SW480细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用具有明显的量效关系;用GPM处理后,SW480细胞表现出明显的G1期周期阻滞。结论：GPM能够抑制人结肠癌细胞SW480细胞的生长,并可改变细胞周期分布。     

中药复方脏毒清体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的:探讨中药复方脏毒清对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW480,用不同质量浓度的脏毒清(0.05,0.10,0.15,0.20,0.25 g·m L-1)进行干预12,24,36,48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。用不同质量浓度脏毒清(0.10,0.15,0.20 g·m L-1)作用SW480细胞24 h后,另设空白组,采用用荧光染色技术和流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬酶-3(Caspase-3),Caspase-9的酶活性,Western blot技术检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示脏毒清对其有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;与空白组比较,脏毒清0.10,0.15,0.20 g·m L-1组能明显诱导SW480细胞凋亡,Caspase-3及Caspase-9酶活性明显升高,促凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bal-2表达明显降低,均具有统计学意义(P0.01)。结论:脏毒清具有促进人结肠癌SW480细胞凋亡的作用,并通过线粒体凋亡途径发挥作用。     

姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究

目的：探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制。方法：通过MTT检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况。结果：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达（P〈0.05）,而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关。     

Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖作用的研究

目的分析Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用。方法将结直肠癌Lovo细胞株进行培养及转染,采用Western blot法、RT-PCR法对Survivin的表达进行检测,应用MTT法对siRNA抑制细胞增殖的作用进行检测。结果 Survivin靶向小干扰RNA抑制结直肠癌SW480细胞株mRNA的构成比为37.1%,抑制结直肠癌SW480细胞株蛋白表达的构成比为45.3%,12 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为23.8%,24 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为30.2%,36 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为35.2%,48 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为38.5%,72 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为39.6%,均显著高于阴性对照组(P均<0.05)。结论 Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用显著。     

PTEN在白藜芦醇对体外直肠癌细胞生长和凋亡的影响

分析第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在直肠癌细胞系中的相对表达水平,以及白藜芦醇对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。利用Western blot检测PTEN在人直肠癌细胞株Caco-2和SW480及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;不同浓度的白藜芦醇作用体外SW480细胞后,CCK-8法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响;Western blot检测Caspase-3,PTEN,p53以及AKT蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建慢病毒介导特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调SW480细胞中PTEN的表达,检测下调PTEN的表达后是否影响白藜芦醇对体外直肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。结果表明,与NCM460细胞相比较,PTEN在Caco-2和SW480中的表达量均显著下调,差异有统计学显著性(P0.001);白藜芦醇对体外直肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇对SW480细胞中Caspase-3,PTEN和p53蛋白的表达均有明显上调作用,而抑制磷酸化AKT的表达;shRNA PTEN可明显下调PTEN在SW480细胞中的表达,同时降低白藜芦醇对SW480细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。提示白藜芦醇可通过上调PTEN的表达从而调控体外直肠癌细胞增殖和凋亡。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

西黄丸含药血清对SW480人结肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的:研究西黄丸对人结肠癌细胞SW480迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以人结肠癌细胞SW480为研究对象,细胞划痕试验检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞迁移的影响,并Transwell侵袭实验检测西黄丸含药血清对细胞侵袭能力的改变;用Western blot的方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白表达水平,RTq PCR法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、波形蛋白(Vimentin)和转录因子Snail的mRNA水平。结果:与空白组比较,西黄丸含药血清可降低SW480细胞迁移及侵袭的能力,增加E-cadhenrin mRNA表达水平,并抑制PARP-1,Vimentin和Snail mRNA表达水平,明显降低ERK蛋白的磷酸化水平,均具有统计学意义(P0.05)。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞的体外侵袭及迁移,并影响上皮-间皮转化(EMT)相关基因E-cadherin,PARP-1,Vimentin和Snail的mRNA表达,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关,本研究为西黄丸抑制结肠癌转移提供了科学证据。     

龙葵碱体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡及其对相关因子的影响

  目的：观察龙葵碱对人结肠癌SW480细胞凋亡及ERK/MEK、PI3K/AKT信号通路中相关因子的影响。  方法：SW480结肠癌细胞培养后共设5组,分别为空白对照组、培养液对照组及龙葵碱不同剂量(4、8、16 mmol/L)组,各组进行相应干预。采用MTT法检测龙葵碱对结肠癌细胞株的增殖作用,流式细胞法检测龙葵碱对结肠癌细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blotting法检测龙葵碱处理的SW480细胞中ERK/MEK和PI3K/AKT的表达水平。  结果：MTT生长曲线显示,龙葵碱能抑制结肠癌SW480细胞株增殖。流式细胞仪检测显示,龙葵碱能够促进SW480的凋亡。RT-PCR结果显示,龙葵碱可以抑制ERK1/2 mRNA的表达。Western blotting结果表明,龙葵碱可以降低MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。  结论：龙葵碱可以抑制结肠癌细胞增殖,其对肿瘤的诱导凋亡作用可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号途径实现的。     

Inhibition of Wnt/β‐Catenin Pathway by Dehydrocostus Lactone and Costunolide in Colon Cancer Cells

Abnormal activation of β‐catenin has been reported in 90% in the sporadic and hereditary colorectal cancer. The suppression of abnormally activated β‐catenin is one of the good strategies for chemoprevention and treatment of colorectal cancer. In this study, we have isolated two main compounds from root of Saussurea lappa, dehydrocostus lactone (DCL) and costunolide (CL), and investigated their anti‐colorectal cancer activities. DCL and CL suppressed cyclin D1 and survivin through inhibiting nuclear translocation of β‐catenin. They also suppressed the nuclear translocation of galectin‐3 that is one of the coactivators of β‐catenin in SW‐480 colon cancer cells. Furthermore, DCL and CL suppressed proliferation and survival of SW‐480 colon cancer cells through the induction of cell cycle arrest and cell death. Taken together, DCL and CL from root of S. lappa have anti‐colorectal cancer activities through inhibiting Wnt/β‐catenin pathway. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.