全自动精浆锌检测方法的建立及评价

目的建立全自动精浆锌检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法利用终点法检测精浆锌浓度,并在全自动生化分析仪上建立检测参数,并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,同时与目前临床上常用的化学比色法精浆锌检测试剂盒进行比较。结果试剂空白吸光度平均为0.028。3份高、中、低锌浓度的精浆样本重复测定10次,其CV值分别为0.67%、2.04%和4.18%。采用回收率分析来评价准确性,回收率范围为95.68%~103.81%。精浆锌浓度在0.2~7 mmol/L范围时,具有良好的线性关系(r~2=0.9944)。以精浆锌检测试剂盒(化学比色法)作为对照试剂,全自动检测法作为试验试剂,两者对115例精浆样本的检测结果没有显著性差异[(2.51±1.26)mmol/L vs(2.54±1.17)mmol/L,t=-1.589,P=0.115],且呈显著正相关(r~2=0.9686,P0.01)。结论本研究建立的全自动精浆锌检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,且与目前临床上使用的化学比色法有很好的一致性。该法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床上大批量样本的检测筛查,大大节省了人力和试剂成本。     

精浆α葡糖苷酶全自动检测方法的建立及评价

目的:建立精浆α葡糖苷酶活性全自动检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法:利用速率法检测精浆α葡糖苷酶活性,并在全自动生化分析仪上建立检测参数,并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围。结果:试剂空白吸光度平均为0.002 14,空白吸光度变化率(△A/min)平均为0.015 26。3份高、中、低α葡糖苷酶活性的精浆样本重复测定10次的CV值分别为2.52%、0.36%和0.76%。采用比对试验的方法来评价准确性,40份精浆标本每个浓度点的相对偏差范围为-5.52%~7.54%,均低于15%的要求。精浆α葡糖苷酶活性在76~647 U/L范围时,具有良好的线性关系(r0.99)。结论:本研究建立的全自动精浆α葡糖苷酶活性检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,且有较宽的线性范围。该法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床上大批量样本的检测筛查,大大节省了人力和试剂成本。     

两种精浆酸性磷酸酶检测方法的比较与评价

目的:对检测精浆酸性磷酸酶(ACP)活性的常规方法(磷酸苯二钠法)和试剂盒方法进行比较,并探讨试剂盒方法取代常规方法用于常规检测的可能性。方法:79份不育男性的精浆,分别用常规方法和试剂盒方法检测其ACP活性。取1份精浆标本用于两种方法的批内检测,另取2份标本用于两种方法的批间检测。随机留取10份精浆标本,稀释后立即或放置30 m in后检测ACP活性。另随机留取10份精浆标本,同时由2位技术人员分别用常规方法检测ACP活性。结果:试剂盒方法所测ACP活性与常规方法显著相关(r=0.745,P=0.000)。试剂盒方法与常规方法相比,两者批内CV(13.72%;10.66%)比较接近,而批间CV(13.8%和15.49%;24.43%和21.04%)明显较低。精浆稀释后放置30 m in,无论是常规方法还是试剂盒方法,所测结果都显著降低(P<0.05)。而2位技术人员用常规方法所测精浆ACP活性无显著区别(P=0.165)。结论:试剂盒方法检测精浆ACP活性优于常规方法,可以取代常规方法。     

全自动精浆果糖检测方法的建立及主要性能评价

目的建立全自动精浆果糖检测方法并对其准确度、精密度及线性范围等进行评价。方法在全自动特定蛋白分析仪上利用己糖激酶法检测精浆果糖,评估该方法的准确度、精密度及线性范围,并与临床上常用的吲哚显色法进行比较。结果果糖质控品检测结果在其定值范围内。回收试验结果获得回收率分别为96.15%和103.37%。全自动己糖激酶法测定精浆果糖精密度高,批内精密度与批间精密度的CV值分别为0.63%和1.27%。精浆果糖浓度在0.065~4.16mmol/L范围内,具有良好的线性关系(r~2=1.00)。分别采用吲哚显色法与全自动己糖激酶法检测105个精浆标本的果糖浓度,两种方法的检测结果因其方法学不同而存在差异(P0.01),但两种方法的检测结果呈显著正相关(r~2=0.96,P0.01),线性回归方程为:y=1.19x+1.67(R~2=0.93,P0.01)。结论本研究建立的全自动精浆果糖检测法具有良好的准确度与精密度,与临床常用方法有较好的相关性。该法操作简单,安全快速,更适用于临床大批量样本的检测,建议在男性学实验室推广。     

半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的研究

目的:建立半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的方法。方法:同时用半自动生化分析仪法(速率法)和手工葡萄糖氧化酶法检测51例精液常规分析参数均正常的男性精浆α葡糖苷酶活性,计算批内和批间变异系数以及正常参考值范围,并分析两种方法检测结果的相关性。结果:2例α葡糖苷酶活性不同的精浆样本用半自动生化分析仪法检测的批内变异系数分别为12.63%和9.13%,批间变异系数分别为10.67%和13.49%,正常参考值范围为102.28～555.08U/L。半自动生化分析仪法和手工法检测的精浆α葡糖苷酶活性呈显著正相关(r=0.792,P<0.01)。结论:半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性法简便、省时,节省试剂,结果稳定可靠。建议在男科实验室推广使用半自动生化分析仪法检测精浆α葡糖苷酶活性。     

精液生化指标的全自动检测及临床应用

人精浆富含潜在的男性不育和男性生殖系统疾病的生物标志物,对男性不育的诊断和治疗有应用价值。精液生化指标检测在经历了手工法、半自动法后,目前已进入全自动检测的时代。精液生化指标的全自动检测有如下优势:试剂组成简单,每个测试所用试剂量少;参数设置简单;全程自动化程序操作,误差小;检测时间短,适于批量检测,可大大节省人力成本;定标和质控操作简便,可确保检测结果准确可靠;结果按样本顺序输出,适应临床诊疗需要;开放型试剂,适用于各种全自动生化分析仪。目前已可用于全自动检测法的精液生化指标包括精浆总α-葡糖苷酶和中性α-葡糖苷酶,精浆果糖、酸性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶、锌、柠檬酸、尿酸、超氧化物歧化酶、肉碱,精子顶体酶和乳酸脱氢酶C4,以及精液游离弹性蛋白酶。这些指标可用于评估附睾、精囊和前列腺的分泌功能,精子顶体和能量代谢功能,精浆的抗氧化功能以及男性生殖道有无感染或隐性感染等。     

精浆α-糖苷酶和酸性磷酸酶活性与顶体酶活性的关系

目的研究精子顶体酶活性与精浆α-糖苷酶和酸性磷酸酶活性的关系。方法分光光度比色法测定精子顶体酶、酸性磷酸酶和α-1，4糖苷酶活性一结果精浆α-糖苷酶和酸性磷酸酶活性异常组顶体酶活性均明显低于其相应正常组(P＜0．001，P＜0．001)。顶体酶活性与精浆α-糖苷酶活性、酸性磷酸酶活性之间存在明显正相关(P＜0．001，P＜0．001)。结论精浆α-糖苷酶和酸性磷酸酶活性影响精子顶体酶活性。     

精浆前列腺特异性抗原检测的临床意义

目的检测清浆PSA与F-PSA,并探讨其在临床上的应作价值。方法 用化学发光标记免疫技术稀释检测法,检测30例健康男性组,30例BPH患者组和15例PCa患者组精浆PSA与F-PSA浓度水平,用回收试验和重复性试验和重复性试验来验证检测的正确性。并采用计算机SAS软件包(version 8.2)进行统计分析。结果(1)健康男性组精浆中PSA浓度范围为302800～1340000ng/ml,(587240±234394)ng/ml。F-PSA浓度范围为212800～778000ng/ml,(419720±148637)ng/ml。比血清PSA及F-PSA高出几十万倍。(2)BPH组精浆PSA与F-PSA浓度略高于正常对照组,但差异无统计学意义。(3)Pac组精浆PSA及F-PSA浓度低于正常对照组及BPH组,差异有高度显著性,有统计学意义。(4)前列腺癌患者精浆PSA与肿瘤分期Spearman和Kendall等级相关分析结果显示前列腺癌患者精浆PSA含量与肿瘤分期间相关不显著。结论 检测精浆PSA与F-PSA对前列腺癌与良性前列腺增生的鉴别有一定的临床应用价值。     

精浆蛋白质电泳两种分析方法的探讨

目的:探讨琼脂糖电泳和SDS-琼脂糖电泳分析精浆蛋白质的临床可行性。方法:69例不育患者精液标本按常规和特殊检查结果分为弱畸精子症(n=19)、弱精子症(n=22)和相对正常(n=28)3组,然后离心分离获取精浆。分别采用琼脂糖和SDS-琼脂糖作介质,不同的点样时间、迁移功率,酸性结晶紫和氨基黑两种染色,对精浆蛋白质进行检测,将电泳图谱进行吸光度仪扫描并将结果对比分析。结果:以SDS-琼脂糖作介质,酸性结晶紫染色可将精浆分为4条带,但区带弥散,相互间拖尾严重;以琼脂糖作介质,pH 9.2碱性缓冲条件,点样6 m in,可将精浆分为A、B、C、D、E、F 6条带,氨基黑染色后,区带清晰,间隔适当,易于吸光度仪分析相对含量,重复性好。电泳结果经方差分析,弱精子症组与相对正常组、弱畸精子症组在C与E带上均有差别,而相对正常组与弱畸精子组无差别;同时,相对正常组标本之间的电泳图谱也有显著的不同。结论:以琼脂糖作介质,在碱性缓冲条件下电泳,氨基黑染色来分离检测精浆蛋白质具有较高的可行性,该方法操作简单、快速,可适合临床常规开展。     

精浆抗精子抗体阳性不育患者顶体酶、一氧化氮合酶及超氧化物歧化酶活力变化的研究

目的:研究精浆抗精子抗体(AsAb)阳性对精子顶体酶、精浆一氧化氮合酶(NOS)及超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。方法:精浆AsAb阳性不育者40例,对照组为40例正常生育男性。通过吸光度变化分别计算顶体酶活力(BAEE/ADH联合法)、NOS活力(氧化还原反应)、SOD活力(黄嘌呤氧化酶法)。结果:精浆As-Ab阳性组与正常生育组比较,精子顶体酶活力明显降低(P<0.01),NOS活力明显升高(P<0.01),精浆中SOD活力明显降低(P<0.01)。结论:精浆AsAb阳性引起不育可能与精子顶体酶、精浆中SOD及NOS活力改变有关。     

人精浆抗精子抗体与顶体酶活性关系的探讨

目的 :研究精浆抗精子抗体 (AsAb)对精子顶体酶活力的影响。　方法 :用间接血凝法测定 34 32例不育男性和 6 5例生育男性精浆的AsAb ,并对其中的 2 882例不育男性精子用比色法进行了顶体酶活性的测定。　结果 :34 32例不育者精浆AsAb阳性率为 10 .2 0 %,2 882例进行了顶体酶活性测定的不育者精浆AsAb阳性率为 9.37%,对照组精子顶体酶活性明显高于各不育组 (P <0 .0 0 1)。不育组AsAb阳性组与AsAb阴性组比较顶体酶活性没有明显差异 (P >0 .0 5 ) ,顶体酶活性正常与异常组AsAb阳性率比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :精浆AsAb对精子顶体酶活性没有影响。     

Ⅲ型前列腺炎患者精液参数、锌浓度及抗菌活性的变化

目的:探讨Ⅲ型前列腺炎(CP/CPPS)患者精液常规参数、锌浓度及抗菌活性的关系。方法:对60例CP/CPPS患者和20例健康男性进行精液常规参数、锌浓度及抗菌活性的检测。结果:CP/CPPS患者精液液化时间、精子活力、精浆抗菌活性及精浆锌离子浓度与对照组相比,差异有显著性(P均<0.01)。CP/CPPS患者精子活力与精浆锌离子浓度间有显著相关性(r=0.272,P=0.015)。精浆抗菌活性与精浆锌离子浓度间有显著相关性(r=0.449,P<0.01)。结论:CP/CPPS患者精液液化时间延长,精子活力下降,精浆锌浓度和抗菌活性降低。精浆抗菌活性与精浆锌浓度、精子活力间有显著相关性。     

精浆酸性磷酸酶和γ-L-谷氨酰转肽酶检测的比较及其与精液参数的相关性研究

目的:对精浆酸性磷酸酶(ACP)和γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测进行比较,并分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。方法:133例精浆标本,分别检测ACP活性和γ-GT活性。随机留取2例精浆标本,1例用于ACP批内检测,另1例用于γ-GT批内检测。随机留取4例标本,2例用于ACP批间检测,另2例用于γ-GT批间检测。用计算机辅助的精液分析(CASA)系统分析精液标本的精液量、pH、精子密度、活动率、a+b级活动精子百分率等参数。同时分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。结果:精浆ACP活性和γ-GT活性呈显著性正相关(r=0.570,P=0.000)。ACP的批内变异系数(CV)为13.72%,批间CV分别为13.80%和15.49%。γ-GT批内CV为7.68%,批间CV分别为7.76%和9.73%。精浆ACP活性和γ-GT活性均与pH值呈显著负相关(r=-0.330,P=0.000;r=-0.388,P=0.000)。γ-GT活性与精子密度呈显著正相关(r=0.165,P=0.045),而ACP活性与精子密度无显著相关(r=0.048,P=0.546)。ACP活性和γ-GT活性均与精子活动率、(a+b)级活动精子百分率、精液量、禁欲时间以及年龄无显著相关性。结论:精浆γ-GT活性检测的精确性高于ACP活性检测,两者与精液参数的相关性基本类似。提示精浆γ-GT活性检测比ACP活性检测更适合用来评价前列腺功能。     

五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响

目的:探讨五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响。方法:在人睾丸支持细胞系TM4细胞培养液内分别加入H2O2(100 mmol/L)和五子衍宗复方提取液,分为空白组、模型组、低(0.2 mg/ml)、中(1 mg/ml)、高(5 mg/ml)剂量五子衍宗复方加药组。在作用24 h后,用MTT法检测各组的吸光度值,用硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化酶法分别测定各组MDA含量及SOD活性,用流式细胞仪测定各组的细胞凋亡率和存活率,用实时PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果:五子衍宗复方低、中、高剂量组的吸光度值由模型组的0.23±0.01分别增加至0.27±0.02、0.30±0.01和0.35±0.01;SOD活性由(8.32±0.62)U/ml分别增加至(9.69±0.59)U/ml、(10.47±0.74)U/ml和(12.28±0.38)U/ml;MDA含量由(6.99±0.74)mol/L分别降低至(5.78±0.28)mol/L、(4.19±0.43)mol/L和(3.42±0.51)mol/L;细胞凋亡率由(21.63±1.38)%分别降低至(17.87±0.75)%、(14.10±0.50)%和(9.53±1.34)%;存活率由(65.67±7.48)%分别增加至(70.37±1.12)%、(72.57±1.95)%和(81.60±2.46)%;caspase-3 mRNA的相对表达量由2.69±0.16分别降低为2.47±0.12、2.38±0.16和1.96±0.11。结论:五子衍宗复方能改善睾丸支持细胞的氧化应激损伤,抑制细胞凋亡。     

24种精浆生化指标与精液常规参数的相关性研究

目的:调查24种精浆生化指标与精液常规参数之间的相关性。方法:66例生育力低下男性的精液常规参数包括精液量、精子浓度、精子总数、精子活动率及前向运动精子百分率(PR)按WHO5标准进行分析,相应精浆中的24种生化指标在进行质控的基础上,使用全自动生化分析仪和电解质分析仪进行测定,同时24种精浆生化指标所测结果与各精液常规参数的相关性被分析。结果:精浆中蛋白水平包括总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和球蛋白(Glb)均与精子浓度呈显著正相关,且精浆白蛋白水平与精子总数亦呈显著正相关;精浆谷草转氨酶(AST)活性和乳酸脱氢酶(LDH)活性与精子浓度和精子总数均呈极显著正相关;精浆碱性磷酸酶(AKP)活性与精液量呈显著负相关,而与精子活动率呈显著正相关;精浆α羟丁酸脱氢酶(αHBDH)活性与精子浓度和精子总数呈极显著正相关,相关系数(r)达0.7以上;尿素氮(UN)与精液量呈显著负相关,而肌酐(Cr)与精液量、精子浓度和精子总数均呈显著负相关;精浆葡萄糖(Glu)水平与精子浓度和精子总数均呈显著负相关;精浆甘油三酯(TG)与精液量呈显著正相关,而与精子活动率呈显著负相关;精浆谷丙转氨酶(ALT)、γ谷氨酰转移酶(GGT)、腺苷脱氨酶(ADA)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、肌酸激酶(CK)及超敏C反应蛋白(hs CRP)未见与上述精液参数相关。精浆钾、钠、氯、钙、镁、磷中只有精浆氯与精液量呈显著负相关,余均无显著相关性。结论:精浆中许多生化指标与精液常规参数均密切相关,提示这些生化组分可能在精子发生、成熟和生理代谢过程中起作用。     

不育男性精浆锌、铜和超氧化物歧化酶与衣原体感染的关系

目的观察沙眼衣原体(CT)感染与精浆锌(Zn)、铜(Cu)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的关系。方法应用精子活体染色技术和Zn、Cu,SOD含量检测试剂盒,分别检测52例正常生育男性(正常对照组)和58例CT感染不育男性(CT感染组)的精子存活率与精浆Zn、Cu、SOD活性。结果CT感染组中精子存活率、精浆Zn、Cu、SOD含量较正常对照组显著降低(P<0.01)。结论CT感染可引起精浆Zn、Cu、SOD含量降低,精子膜发生氧化损伤,影响精子的存活率和活动力。     

抗前列腺素D合成酶自身抗体酶联免疫吸附试验检测方法的建立及其在不育症诊断中的初步应用

目的 :证实抗 lipocalin型前列腺素 D合成酶 ( L -PGDS)自身抗体的存在 ,建立检测该抗体的酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)方法 ,并探讨其在不育症诊断中的初步应用。方法 :用纯化的重组 L-PGDS作为抗原 ,建立检测抗 L-PGDS自身抗体的 EL ISA法 ,并用特异性 L -PGDS吸附试验检测 EL ISA法的特异性 ,同时检测 EL ISA法的重复性 ,并对2 0 4例不育症病人的精浆和血清中抗 L-PGDS自身抗体进行检测。结果 :特异性吸附试验和重复性试验证实 ,EL ISA法稳定可靠 ,1 1 4例不育男性中精浆抗 L-PGDS自身抗体阳性者 49例 ( 3 4.0 % ) ;无精子症、少精子症病人的阳性率 ( 48.5%和 43 .2 % )明显高于正常精子数的不育男性 ( 2 3 .0 % ) ( P<0 .0 1和 P<0 .0 5)。 60例不育病人血清抗 L-PGDS自身抗体阳性 1 8例 ( 3 0 .0 % )。结论 :不育症病人精浆和血清中存在抗 L-PGDS自身抗体 ,建立的 EL ISA法稳定可靠 ,适用于临床大批量标本检测     

一种测定精液中果糖缺乏的简易点状试验

精浆果糖浓度是测定生育力的一个重要参数,常用的方法是用间苯二酚稀释精浆后煮沸。本文介绍一种硫酸甲氨基酚试验。试剂制备为将0.4g硫酸甲氨基酚溶于20m140％硫酸中制成;果糖贮存对照液(2700ug/ml)相当于15mmol果糖/L;工作液为将贮存液用蒸馏水以1∶1000稀释。方法为用蒸馏水将精浆稀释1∶1000,将20μl、50μl稀释标本及1滴蒸馏水(空白)分别放入白平底培养板的凹孔内,在电热器上预热至55℃。相等量的工作液(标准)加入另一凹孔,蒸发至     

捐精志愿者精浆生化指标与精液常规参数的相关性分析

目的:探讨捐精志愿者精浆生化指标与精液常规参数的关系,以及精浆生化指标之间的关系.方法:84例河北省人类精子库的捐精志愿者为研究对象,采用全自动生化分析仪方法检测精浆中性α-葡糖苷酶(NAG)、果糖(Fru)、柠檬酸(CA)、酸性磷酸酶(ACP)、锌(Zn)、尿酸(UA)、乳酸脱氢酶(LDH)和α-羟丁酸脱氢酶(α-H...     

正常成年男性精浆同型半胱氨酸浓度及其与精液参数关联性研究

目的探讨正常成年男性精浆同型半胱氨酸(Hcy)的正常值参考范围;探讨精浆、血清Hcy浓度与精液参数的关联性以及精浆与血清Hcy浓度的关联性。方法从精子库捐精者中招募了31例健康志愿者,收集其精液及血清,检测其精液常规,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清与精浆中的Hcy的浓度并计算精浆Hcy总含量;采用统计学软件SPSS 12.0分析精浆Hcy正常参考值范围,分析精浆、血清Hcy浓度,精浆Hcy总含量与精液参数的关联性以及精浆与血清Hcy的关联性。结果精浆Hcy浓度与精子活力呈负相关(r=-0.439,P=0.014),与其他精液参数无相关性;精浆与血清Hcy浓度之间也无相关性。结论健康青年男性精浆Hcy浓度的参考值范围:6.02~21.96μmol/L(95%CI);精浆Hcy浓度与精子活力呈负相关。