慢性吗啡处理及戒断对大鼠不同脑区突触素ⅠmRNA表达水平的影响

目的 :探讨慢性吗啡处理及戒断对大鼠中脑腹侧被盖区 (VTA)、伏隔核 (NAc)、中脑导水管灰质 (PAG)、杏仁核 (AMG)、海马CA1区 (HIPCA1)突触素ⅠmRNA表达水平的影响。方法 :吗啡组大鼠ip吗啡 10d ,每日两次 ,剂量递增 ,对照组大鼠注射等量生理盐水。于末次注射后 3h及 72h处死 ,取脑并做冰冻切片。利用原位杂交技术检测各脑区突触素ⅠmRNA的水平并作同期比较。结果 :3h处死时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在NAc、HIPCA1显著低于同期对照 (P <0 .0 5 )。自然戒断 72h时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA仍显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在AMG、HIPCA1显著低于同期对照(P <0 .0 5 )。结论 :吗啡慢性处理及戒断大鼠突触素ⅠmRNA表达在不同脑区有选择性的改变 ,可能是阿片依赖及戒断的分子机制之一     

慢性吗啡处理及戒断对大鼠不同脑区突触素ImRNA表达水平的影响

目的 :探讨慢性吗啡处理及戒断对大鼠中脑腹侧被盖区 (VTA)、伏隔核 (NAc)、中脑导水管灰质 (PAG)、杏仁核 (AMG)、海马CA1区 (HIPCA1)突触素ⅠmRNA表达水平的影响。方法 :吗啡组大鼠ip吗啡 10d ,每日两次 ,剂量递增 ,对照组大鼠注射等量生理盐水。于末次注射后 3h及 72h处死 ,取脑并做冰冻切片。利用原位杂交技术检测各脑区突触素ⅠmRNA的水平并作同期比较。结果 :3h处死时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在NAc、HIPCA1显著低于同期对照 (P <0 .0 5 )。自然戒断 72h时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA仍显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在AMG、HIPCA1显著低于同期对照(P <0 .0 5 )。结论 :吗啡慢性处理及戒断大鼠突触素ⅠmRNA表达在不同脑区有选择性的改变 ,可能是阿片依赖及戒断的分子机制之一     

甲亢大鼠脑甲状腺激素受体mRNA的表达

目的：探讨正常大鼠与甲状腺功能亢进（甲亢）大鼠脑甲状腺激素受体（TR）mRNA表达差异。方法：将10只实验大鼠随机分2组，每组5只，荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测甲亢大鼠各脑区甲状腺激素受体mRNA表达变化。结果：与正常大鼠相比，甲亢大鼠大脑、小脑、海马、脑干中TRα1 mRNA分别下调43％、35％、52％、49％（P〈0．05）。小脑中TRα2mRNA无显著性变化（P〉0．05），大脑TRα2mRNA下调34％（P〈0．05），海马、脑干中TRα2mRNA分别上调67％（P〈0．01）、56％（P〈0．05）。小脑中TRβ1mRNA无显著性变化（P〉0．05），大脑、海马、脑干中TRβ1 mRNA分别下调41％（P〈0．01）、50％（P〈0．05）、46％（P〈0．05）。各脑区TRα1与TRα2mRNA比值均下降（P〈0．05）。结论：甲亢时各脑区对高甲状腺激素水平敏感性不一致，甲状腺激素受体mRNA异常表达变化可能参与了甲亢时脑功能障碍的发病机制。     

GSTθ高表达抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增加放射敏感性

目的了解增加GSTθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长,细胞周期和放疗敏感性的影响。方法通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR和Western蛋白免疫印迹法检测分别检测GSTθ mRNA和蛋白的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果GSTθ高水平表达显著地延缓和降低HeLa细胞的生长,并导致G2/M期的阻滞。GSTθ水平提高也增加了细胞对培养基中血清和生长因子的依赖性。另外,GSTθ高水平的表达增加了HeLa细胞对电离辐射的敏感性。结论我们首次证实在HeLa细胞,GSTθ高水平表达可以引起细胞周期阻滞,延缓和降低细胞生长和增加细胞的放射敏感性。这些实验结果将为GSTθ作为一新的靶基因在宫颈癌治疗中的作用提供了实验基础和依据。     

烫伤小鼠巨噬细胞内细胞因子变化与ERK信号的关系

目的:观察烫伤后腹腔巨噬细胞内肿瘤坏死因子(TNF α mRNA)、活化蛋白 1(AP 1)变化及给予MEK1/2特异性阻断药PD98059后TNF α mRNA、AP 1的改变,阐明丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径中的细胞外信息调节蛋白激酶(ERK)信号通路是否调控烫伤后TNF α mRNA的生成.方法:以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型,收集腹腔巨噬细胞,采用逆转录 多聚酶链式反应(RT PCR)测TNF α mRNA的表达,电泳迁移率改变分析法(EMSA)测AP 1的活性.结果:烫伤后巨噬细胞内TNF α mRNA于烫伤后2,12 h表达较强,以后呈降低趋势.AP 1于烫伤后被激活.与单纯烫伤相比,PD98059组的AP 1活性明显被抑制,而TNF α mRNA表达量无明显变化.结论:严重烫伤后巨噬细胞内TNF α mRNA的过量表达反映了烫伤后巨噬细胞的功能紊乱,而MAPK信号途径于烫伤后被激活,其中TNF α mRNA的表达可能不受ERK信号途径调控.     

类叶升麻苷调控CREG表达对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

摘要：目的:探讨类叶升麻苷对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的影响及机制。方法:不同浓度(1,10,100μmol·L-1)的类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的HUVEC细胞,酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹（Western blot）法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和E1A激活基因阻遏子（CREG）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CREG mRNA表达水平。转染CREG过表达载体或CREG小干扰RNA至HUVEC细胞,构建CREG过表达或CREG表达抑制的HUVEC细胞。oxLDL诱导CREG过表达的HUVEC细胞,或类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的CREG表达抑制的HUVEC细胞,上述相同方法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:oxLDL诱导HUVEC细胞后,MDA含量、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白及CREG mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）。类叶升麻苷或过表达CREG可降低oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、凋亡率和Bax蛋白表达,提高SOD和GSH-Px活力及Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。类叶升麻苷可促进oxLDL诱导的HUVEC细胞CREG mRNA和蛋白表达（P<0.05）,抑制CREG表达降低了类叶升麻苷对oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响（P<0.05）。结论:类叶升麻苷通过上调CREG表达降低oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。     

低氧及运动对大鼠不同脑区血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨低氧和(或)运动对大鼠脑干、小脑、前脑皮质、海马和纹状体等不同脑区血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平及脑功能的影响。方法 60只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧安静组、常氧运动组和低氧运动组。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测建模后大鼠不同脑区VEGF表达水平的变化,Morris水迷宫实验检测大鼠神经系统功能。结果各组大鼠神经系统功能无显著差异,低氧及低氧运动引起大鼠前脑皮质、海马和纹状体VEGF表达增高,常氧运动仅引起大鼠海马VEGF表达增高。结论低氧和(或)运动可引起大鼠不同脑区VEGF表达增加,为低氧训练的开展提供进一步的实验支持。     

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的　研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法　大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果　大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论　儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。     

野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管5-HT转载体表达增强

目的　研究野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压与5 HT转载体基因表达的关系。方法　应用MCT诱导的慢性肺动脉高压大鼠模型,建立离体动脉环5 HT浓度反应曲线;HE染色观察肺动脉构型重建,应用RT PCR检测大鼠肺动脉5 HT转载体mRNA表达。结果　MCT大鼠肺血管对5 HT收缩反应增强,肺肌型小动脉中膜增厚,MCT诱导的肺动脉高压大鼠肺血管5 HT转载体mRNA表达明显增多。5 HT转载体基因表达与肺肌型小动脉中膜增厚有明显相关性。结论　MCT诱导的肺动脉高压大鼠肺血管构型重建及5 HT引起收缩反应增强,伴有5 HT转载体mRNA表达增多;同时5 HT转载体mRNA表达与肺肌型小动脉中膜增厚有明显相关性,提示5 HT转载体可能在肺动脉高压中起重要作用。     

甘糖酯对大鼠尿激酶的诱导作用

目的　观察甘糖酯对大鼠尿激酶的诱导作用 ,从基因水平上探讨甘糖酯的抗栓机制。方法　采用发色底物法检测甘糖酯对大鼠血浆中尿激酶活性的影响 ,以半定量RT PCR法检测大鼠尿激酶基因表达。结果　大鼠经灌喂甘糖酯后血液中尿激酶活性和mRNA表达水平均高于对照组 ,且尿激酶活性和mRNA表达水平的升高同喂药剂量正相关 ,在 2 5～ 10 0mg·kg-1的剂量范围内随剂量增大而升高。结论　甘糖酯可以在mRNA水平上诱导大鼠尿激酶的表达 ,或加快大鼠尿激酶mRNA的转录速度或增加mRNA的稳定性 ,激活纤溶系统 ,从而表现出一定的抗栓活性     

高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察高浓度游离脂肪酸体外对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用TUNEL法检测高浓度游离脂肪酸培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率，应用定量RT～PCR(QRT—PCR)检测培养后bc1-2、bax、c—myc、p53和fas mRNA的表达。结果：高浓度游离脂肪酸使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加。胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡基因bax、c—myc、fas的tuRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降，p53 mRNA表达水平无明显改变。结论：游离脂肪酸可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bc1-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

Genistein对他莫昔芬预处理后多巴胺能神经元的保护作用

目的：观察他莫昔芬阻断雌激素受体后,genistein（GST）对多巴胺能神经元是否具有保护作用。方法：取孕14～16天SD大鼠胚胎中脑腹侧部,常规体外培养后分为4组：正常对照组、GST＋MPP^＋组、TAM＋GST-4-MPP^＋组和MPP^＋组。用TH免疫细胞化学染色观察各组TH阳性神经元的生长状况。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力和代谢状态。用Western Blot观察各组bax蛋白的表达情况。结果：TAM＋GST＋MPP^＋组与GST＋MPP^＋组相比,TH阳性神经元数量有所减少,突起长度变短,细胞活力差,bax蛋白的表达量增加,差异有统计学意义。同时MPP^＋组与TAM＋GST＋MPP^＋组相比,TH阳性神经元数量减少,突起长度短,细胞活力最差,bax蛋白的表达量最多,差异均有统计学意义。结论：TAM能部分下调GST对多巴胺能神经元的保护作用;GST除了通过ER途径发挥保护作用外,还可能经其他途径发挥保护作用。     

麝香合剂对急性心肌梗死大鼠和犬的保护作用及其机制

目的：观察麝香合剂（SXM）对急性心肌梗死大鼠和急性心肌梗死犬心肌梗死范围（MIS）的影响，对急性心肌梗死大鼠血清肌酸磷酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）活力及缺血区心肌组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达的影响。方法：雄性SD大鼠和雄性Beagle犬，结扎冠状动脉左前降支（LAD）制备心肌梗死模型。结扎冠脉后24小时，测量大鼠和犬的MIS（N—BT染色法），大鼠血清CK和LDH活力；并采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测TNF-αmRNA的表达（与内参的相对表达强度来表示）。     

丙戊酸钠抗抑郁作用涉及改善氧化应激平衡和提升脑源性神经营养因子表达

目的:探讨丙戊酸钠减轻慢性不可预见刺激(CUS)致大鼠抑郁行为是否与改善机体氧化应激功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达有关.方法:雄性SD大鼠60只,随机分为对照组(CG),模型组(MG),丙戊酸钠灌胃正常组(VAPC)和丙戊酸钠灌胃模型组(VAPM).以开场试验和强迫游泳试验评价大鼠焦虑抑郁行为;采用常规生物化学方法测定大脑皮质丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光定量PCR和Western blot检测海马脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA和蛋白表达.结果:与CG组相比,MG组大鼠开场试验水平得分和垂直得分明显降低,强迫游泳试验不动时间显著延长,MDA含量升高,SOD及CAT活力明显下降,海马BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低.给予丙戊酸钠可明显阻遏上述变化,但对正常大鼠无明显影响.结论:CUS致大鼠焦虑抑郁行为与体内氧化及抗氧化失衡,海马BDNF表达减少有关;丙戊酸钠能阻遏这种变化,从而显示减轻CUS所致大鼠焦虑抑郁行为作用.     

洛伐他汀对肾小球系膜细胞iNOS表达及氧自由基水平的影响

目的 观察洛伐他汀对脂多糖(LPS)刺激后大鼠肾小球系膜细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及细胞培养上清液中羟自由基(·OH),丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(tSOD)含量的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LPS作用大鼠系膜细胞后,洛伐他汀在不同时间段对系膜细胞iNOS mRNA表达的影响及分别检测细胞培养上清液中的·OH、MDA、tSOD的含量.结果 系膜细胞在正常情况下iNOS mRNA无明显表达,LPS作用24h后能引起iNOS mRNA的显著表达,洛伐他汀可抑制LPS引起的系膜细胞iNOS mRNA的表达.LPS作用于大鼠系膜细胞后,可引起细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加及tSOD含量的减少;加入洛伐他汀后细胞培养上清液中·OH、MDA含量减少,tSOD含量没有明显的变化.结论 洛伐他汀能抑制LPS引起的系膜细胞iNOS mRNA表达的增加及下调LPS引起的细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加.     

香芹酚对毒死蜱诱导的大鼠脑损伤保护作用研究

目的 研究香芹酚(carvacrol, CA)对毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)诱导的大鼠脑损伤保护作用及作用机制的初步探讨。方法 将70只SD大鼠随机分为对照组、CPF染毒组、依达拉奉干预组、解磷定干预组、低中高3种不同剂量CA干预组(12.5、25和50 mg/kg),皮下注射含CPF 18 mg/kg橄榄油溶液建立脑损伤模型,1 h后再分别给予依达拉奉、解磷定、低中高剂量CA处理,连续28 d。通过检测血清中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)活性判断造模情况;通过Morris水迷宫和矿场实验测试大鼠学习记忆和自主探索能力。比较血清和脑组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活力衡量氧化应激水平;通过Nissl染色观察大鼠海马体DG区神经元胞体中Nissl小体数量;采用免疫组织化学测定Nrf2蛋白的表达,检测脑组织Na⁺-K⁺-A...     

抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达

目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。     

二甲基氨基偶氮苯诱导大鼠肝癌中组胺H_1受体的基因表达

目的　探讨大鼠肝癌中组胺H1受体基因的mRNA表达情况。方法　采用二甲基氨基偶氮苯 (DAB)诱发大鼠肝癌模型 ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量法研究肝癌组织、远癌肝组织与正常肝组织中组胺H1受体基因的mRNA表达 ,并将其PCR产物进行测序。结果　组胺H1受体mRNA在肝癌组织中的表达明显低于远癌肝组织 (P <0 0 1)和对照组肝组织 (P <0 0 1) ,且肝癌中组胺H1受体mRNA的碱基发生点突变。结论　组胺H1受体基因的转录减少以及H1受体基因的点突变可能与DAB诱导的大鼠肝癌形成有关。     

双环醇对肝脏部分切除大鼠CYP450酶活性和表达的影响(英文)

本研究考察双环醇对肝脏部分切除(PH)后大鼠肝脏微粒体细胞色素P450(CYP)活性、基因和蛋白表达的影响及相关机制。大鼠PH前灌胃给予双环醇(300 mg.kg-1)3次,PH后处死大鼠,取其血清和肝组织进行检测,依次测定血清谷丙转氨酶(ALT)、肝微粒体丙二醛(MDA)和肝脏总CYP含量、4种CYP同工酶活性、基因和蛋白表达。结果显示,双环醇可显著抑制PH大鼠血清ALT和肝微粒体MDA的升高,抑制肝脏总CYP含量的减少,抑制CYP2C6、2C11活性和mRNA表达的下降,明显抑制CYP3A1/2活性的下降,并上调CYP3A1和2E1的mRNA和蛋白表达。结果表明,双环醇对PH大鼠肝脏CYP450酶及部分同工酶活性和表达的改变有明显改善作用,其作用机制可能与其抗氧化作用和酶诱导作用密切相关。     

经前舒颗粒对海马神经元5-HT1A受体蛋白和mRNA表达水平的影响

目的：观察经前舒颗粒含药血清对体外培养的新生大鼠原代海马神经元细胞活力及其5-HT1A受体基因表达水平的影响。方法：采用束缚法制备经前期综合征（PMS）肝气郁证大鼠模型,以调肝方药经前舒颗粒进行药物干预,制备大鼠含药血清、体外培养新生大鼠原代海马神经元细胞,MTT法测定神经元细胞活力;用蛋白质印迹技术检测神经元中5-HT1A受体蛋白水平表达量．半定量RT—PCR技术检测细胞5一HT1A受体mRNA的表达。结果：与正常组相比,经前舒颗粒含药血清能够显著提高体外培养的新生大鼠海马神经元细胞活力（P〈0．05）,显著提高异常降低的5-HT1A受体蛋白和mRNA的表达水平（P〈0．05）。结论：PMS肝气郁证模型大鼠血清下调海马神经元细胞5-HT1A受体蛋白和mRNA表达水平,经前舒颗粒可能通过提高海马神经元细胞活力并上调其5-HT1A受体蛋白和mRNA表达水平发挥疗效。