地黄叶片器官形态建成中几种内源激素的变化

地黄Rehmannia glutinosa Libosch 为玄参科草本植物,是我国著名的“四大怀药”之一[1]。目前,地黄的组织培养多以叶片、块根和花粉等为外植体,经脱分化诱导生成愈伤组织,再分化成再生植株,但都存在植株再生率低、分化周期长、重复性差的问题[2],而且这一途径往往表现出遗传上的不稳定性[3],因此使得地黄组织培养技术在生产和育种上的应用受到限制。叶片取材方便,均一性强,若利用叶片直接再生不定芽,不经过愈伤组织阶段,不     

杜仲愈伤组织中绿原酸的含量

杜仲愈伤组织中绿原酸的含量王俊丽陈丕铃(河北大学生物技术研究中心保定071002)李会肖(河北省辛集市林业局辛集052360)杜仲EucommiaulmoidesOliv.是我国名贵的药用植物,具有补肝肾、强筋骨、降血压等功效。目前已有从杜仲叶片中提取绿原酸纯品的报道[1],本文对离体培养愈伤组织中绿原酸含量进行了分析测定,以便为高纯度绿原酸的分离提取提供参考。1材料和方法1.1材料:所用材料为本研究室培养的杜种愈伤组织。1.2愈伤组织的培....     

当归愈伤组织诱导及植株再生研究

目的：探究当归愈伤组织诱导、增殖、胚状体分化和植株再生的条件,为当归工厂化育苗和转基因育种奠定基础。方法：以胚轴和子叶为外植体,1/2 MS或MS为基本培养基,添加不同浓度的蔗糖、不同种类和浓度的激素,诱导当归愈伤组织。研究不同的继代方法和次数、ABA、IBA及蔗糖浓度对愈伤增殖和胚状体分化的影响。结果：愈伤组织第1~5次的继代及胚状体分化培养基可采用1/2 MS+IBA 2 mg·L-1+3%蔗糖,愈伤组织第6次之后的继代和胚状体分化培养基可采用1/2 MS+IBA 2 mg·L-1+KT 02 mg·L-1+3%蔗糖培养基,愈伤组织生长良好,但胚状体的分化量还有待进一步提高。结论：建立了较为完善的当归胚状体再生植株的技术体系。     

HPLC法测定红景天及愈伤组织中的红景天苷

由于生境狭窄、生殖障碍、开采过度等原因,红景天野生资源已几近枯竭,红景天愈伤组织和细胞的大规模培养成为重要的替代途径[1]。红景天苷是红景天属(Rhod iola L.)植物中一种重要的活性成分,其量的高低是评价该属植物药用价值的重要指标之一[2]。用HPLC法测定红景天苷的研究已有报道[3,4]。为了配合红景天愈伤组织和细胞培养的研究,建立了红景天属植物及其愈伤组织中红景天苷测定的HPLC方法,测定了4种不同来源的红景天和来源于深红红景天R.coccinea(R oy le)A.Bor.的愈伤组织中的红景天苷。1实验部分1.1仪器与试剂:A g ilent 1100高…     

短葶山麦冬愈伤组织诱导与多糖积累动态研究

目的:研究比较短葶山麦冬茎尖、叶片、块根和果实等不同外植体诱导发生愈伤组织的成功率及多糖积累动态状况。方法:比较2,4-D、蔗糖不同浓度及光照条件等对短葶山麦冬茎尖愈伤组织诱导及愈伤组织继代保持的影响,并对愈伤组织多糖含量动态变化及愈伤组织、试管苗和非试管苗块根中多糖进行了比较研究。结果与结论:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率高;2,4-D浓度为1.5～2.0 mg/L时有利于短葶山麦冬茎尖诱导愈伤组织,诱导率达87.5%。添加0.5～1.0 mg/L 2,4-D、20 g/L蔗糖时,茎尖愈伤组织的增殖系数最大,且愈伤组织形态和生长势良好。光照条件不影响愈伤组织的继代保持。茎尖愈伤组织中的多糖含量随培养时间的延长而增加,超过60d后,愈伤组织中多糖含量趋于稳定;培养40～60 d后多糖含量较高,此时愈伤组织生长达到最高速率。短葶山麦冬试管苗产生的块根中多糖含量高于非试管苗块根,愈伤组织多糖含量最低,但其生产多糖的速度较其他2种方式快。     

秦艽愈伤组织缓慢生长保存及其生理指标研究△

目的:筛选秦艽愈伤组织缓慢生长保存的适宜方法,进一步研究保存后愈伤组织形态指标与生理指标之间的相关性。方法:向培养基中添加不同浓度生长抑制剂、高渗化合物及不同基本培养基保存秦艽愈伤组织,在室温下保存6个月后统计愈伤组织的形态学指标。测定不同浓度甘露醇、矮壮素和蔗糖处理中秦艽愈伤组织的生理指标。结果:1.0mg·L-1ABA和9%蔗糖处理中愈伤表面产生大量胚状体,生长良好。5%甘露醇和PEG处理中愈伤黄绿色,生长良好。PP333中愈伤生长一般,CCC中愈伤老化。9%蔗糖处理中可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质含量明显高于其它浓度和甘露醇、矮壮素处理。结论:1.0mg·L-1ABA,9%蔗糖保存秦艽愈伤组织效果最好;5%甘露醇和PEG保存效果良好。可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质3个生理指标可以在一定程度上反映秦艽愈伤组织在延缓保存时的存活情况。     

秦艽愈伤组织缓慢生长保存及其生理指标研究

目的：筛选秦艽愈伤组织缓慢生长保存的适宜方法,进一步研究保存后愈伤组织形态指标与生理指标之间的相关性。方法：向培养基中添加不同浓度生长抑制剂、高渗化合物及不同基本培养基保存秦艽愈伤组织,在室温下保存6个月后统计愈伤组织的形态学指标。测定不同浓度甘露醇、矮壮素和蔗糖处理中秦艽愈伤组织的生理指标。结果：1.0 mg·L-1 ABA和9%蔗糖处理中愈伤表面产生大量胚状体,生长良好。5%甘露醇和PEG处理中愈伤黄绿色,生长良好。PP333中愈伤生长一般,CCC中愈伤老化。9%蔗糖处理中可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质含量明显高于其它浓度和甘露醇、矮壮素处理。结论：1.0 mg·L-1ABA,9%蔗糖保存秦艽愈伤组织效果最好;5%甘露醇和PEG保存效果良好。可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质3个生理指标可以在一定程度上反映秦艽愈伤组织在延缓保存时的存活情况。     

三叶青愈伤组织诱导增殖体系建立及天然有机物促进总黄酮合成的研究

目的建立三叶青愈伤组织诱导增殖体系,探讨不同天然有机物对三叶青愈伤组织中总黄酮生物合成的影响,优化三叶青的培养体系,为植物细胞规模化生产三叶青总黄酮奠定基础。方法以诱导率、增殖率为指标,选择MS、6-BA、NAA浓度作为考察对象,采用正交试验方法确定三叶青愈伤组织最佳诱导增殖培养基;以总黄酮含量为指标,选择椰乳、土豆泥、香蕉泥浓度作为考察对象,研究天然有机物配比的浓度。结果最佳三叶青愈伤组织诱导培养基为2/3MS+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA,其诱导率为70%,增殖率为85%,愈伤组织膨大,呈青绿色颗粒状,无褐化现象;发现天然有机物椰乳、土豆泥和香蕉泥均能提高三叶青愈伤组织中总黄酮的生物合成,确定最佳天然有机物配比组合为10%椰乳+150 g/L土豆泥+80g/L香蕉泥,其诱导三叶青愈伤组织总黄酮平均含量为59.256mg/g,较不添加天然有机物愈伤组织的总黄酮含量提高了49.88%。结论明确三叶青愈伤组织的诱导培养体系,发现不同天然有机物的配比能有效提高三叶青愈伤组织中总黄酮含量,大幅缩短三叶青总黄酮的生产周期,为规模化生产三叶青总黄酮提供参考依据。     

BBM基因对西洋参愈伤组织生长及人参皂苷含量的影响

Baby Boom(BBM)基因是植物细胞全能性的关键调节因子,在胚胎发育再生、细胞增殖、愈伤组织快速生长、促进分化等方面起着重要的作用。由于西洋参遗传转化体系存在转化不稳定、转化效率低、转化周期长等问题,该研究拟利用基因枪法将玉米BBM基因转入到西洋参愈伤组织中,以研究其对愈伤组织的生长以及人参皂苷含量的影响,为建立高效的西洋参遗传转化体系奠定基础。经草铵膦抗性筛选及PCR分子鉴定共获得4个不同转化事件的西洋参转基因愈伤组织,对野生型和转基因愈伤组织在相同时间内的生长状态、生长速率进行比较;利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对转基因愈伤组织中人参皂苷成分含量进行测定。结果表明,转BBM基因西洋参愈伤组织的生长速率显著高于野生型,人参皂苷Rb₁、Rg₁、Ro及Re的含量均显著高于野生型。该研究初步明确了BBM基因具有提高西洋参愈伤组织的生长速率及人参皂苷含量的作用,为进一步建立稳定、快速、高效的人参属物药用植物遗传转化体系提供依据。     

雷公藤愈伤组织的诱导与初步培养

从雷公藤的茎、叶诱导出愈伤组织,测定了愈伤组织的诱导率及愈伤组织发生时间。比较了不同培养基及生长素对愈伤组织的诱导率及愈伤组织发生时间的影响。选择出5个优良无性系。初步测定结果表明,雷公藤愈伤组织中含有雷公藤甲素、雷公藤乙索等二萜内酯化合物。     

正交试验优化当归多糖铁的合成条件研究

伞形科(Umblliferae)当归属植物当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels],是一味常用的传统中药,功能补血活血、调经止痛。研究表明,当归补血活血的作用主要是当归中的多糖成分刺激红细胞生成、促进造血祖细胞和多能造血干细胞的增殖和分化、从而提高造血水平的结果;换言之,当归多糖是当归补血活血的主要活性成分[1~7]。铁是构成机体内血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素和多种氧化酶的重要成分,对于维持机体的正常生理作用不可或缺[8]。研究表明[9~11],多糖与高价铁配合生成的多糖铁复合物,用于缺铁性贫血的治疗,不仅具有较理想的稳定性、水溶性…     

柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究

目的探讨柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的适宜培养条件。方法以无菌苗为外植体诱导获得愈伤组织后,对不同种类和不同质量浓度的生长素进行实验,并对光和温度对柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的影响进行了研究。结果柴胡的愈伤组织适宜于在MS NAA4mg/L KT0.2mg/L培养基或MS NAA2mg/L KT0.2mg/L培养基上继代培养。诱导其不定根时宜采用的培养基为MS IBA2mg/L KT0.2mg/L。25℃条件下,黑暗培养既有利于柴胡愈伤组织的生长又有利于其不定根的诱导。结论比较适宜于柴胡愈伤组织生长的生长素为NAA,而有利于不定根诱导的生长素为IBA。温度对愈伤组织的生长影响非常明显,光照是其发根的限制因素。     

当归愈伤组织培养和植株分化研究初报

当归(Angelica sinensis(oliv.)Diels)为伞形科多年生草本植物。用根入药。为我国常用中药,畅销国内外。有补血活血、调经止痛等作用。用于贫血,月经不调,经闭痛经,崩漏,产后腹痛,血虚便秘,跌扑损伤,痈疽疮疡。主要成分挥发油根部含量约0.47%。主产甘肃,此外云南、四川等地亦产。当归喜凉爽气候,生长在高寒多湿地,怕高温酷热。江苏因夏季温度高,幼苗不能越夏,引种尚未成功。为此,需从多种途径探索。我们在组织培养方面,诱导出愈伤组织及分化幼     

秦艽愈伤组织的培养及其龙胆苦苷含量的研究

目的:为扩大和提高甘肃道地药材秦艽资源的利用效率。方法:以秦艽种子的萌发所获得的幼芽作为外植体,诱导形成愈伤组织;筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件,并继代培养;应用HPLC法测定龙胆苦苷的含量。结果:秦艽愈伤组织生长的最佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L),最佳继代培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.5 mg/L),最佳继代时间为30 d。龙胆苦苷积累量在指数生长后期(28～30 d)达最高,为0.78 mg/g DW。结论:筛选出了适宜的秦艽愈伤组织培养方法。秦艽愈伤组织在固体培养基上的生长曲线呈"S"型,且愈伤组织中龙胆苦苷的积累量随愈伤组织增殖而不断增加。     

老瓜头愈伤组织诱导培养技术的研究

目的为老瓜头Cynanchum komarovii资源利用提供前期的生物技术实验参考。方法以老瓜头的根段、茎段和叶片为外植体,采用正交试验方法,筛选诱导愈伤组织产生的最适培养基;进行愈伤组织增殖培养过程中,测定了不同时间愈伤组织的鲜、干质量,绘制愈伤生长曲线;同时进行了愈伤组织分化培养基的实验筛选。结果不同外植体诱导愈伤产生,其根诱导效果最好,各处理诱导率达90%~100%,茎段和叶片愈伤组织诱导最佳配方分别为MS 2,4-D1.0mg/L 6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L和MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L,茎段比叶片较容易诱导,各处理诱导出的愈伤组织质地松散,颜色鲜黄,几乎无褐化现象。愈伤组织继代生长在第10天进入对数生长期,愈伤鲜生长量最大达4.961g,干质量0.496g。愈伤组织的分化率很低,很难生芽,易分化出钉状根。结论对于诱导愈伤形成,根段是最佳的外植体,筛选出了茎段和叶片诱导愈伤的最适配方,愈伤组织生长量较大,但分化困难。     

EMS诱变的长春花细胞系突变研究

目的 通过化学诱变的手段筛选生长快且吲哚碱含量高的长春花突变细胞系。方法 用不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)处理长春花愈伤组织，挑选成活愈伤组织块继代扩大培养，比较其与对照愈伤组织生长速率、吲哚总碱积累等方面的差异。结果 用EMS处理的长春花愈伤组织与对照相比，不仅生长快，并且吲哚总碱含量高。结论 EMS处理的愈伤组织发生了变异，变异种是所期望的比较理想的细胞系。     

转基因天山雪莲类黄酮成分及抗肿瘤活性分析

该文研究转基因天山雪莲和非转基因天山雪莲愈伤组织的类黄酮成分和对人食管癌细胞Ca Es-17的抗肿瘤活性,采用高效液相色谱法检测单体酚种类和含量,用CCK-8法、细胞凋亡形态学观察和流式细胞仪检测其对Ca Es-17细胞生长的影响,用荧光定量PCR检测相关凋亡基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果表明,转基因愈伤组织的总黄酮含量是非转基因愈伤组织的2. 72倍,且在转基因愈伤组织中大量积累了非转基因愈伤组织中没有检测到的矢车菊素半乳糖苷。转基因愈伤组织醇提物对Ca Es-17细胞的抑制作用明显,IC50较非转基因愈伤组织低26. 4%。流式细胞仪分析结果显示,转基因愈伤组织醇提物对Ca Es-17细胞的凋亡诱导作用明显较非转基因愈伤组织强。荧光定量PCR分析结果显示,转基因愈伤组织中促凋亡基因Bax表达量的上调和抑凋亡基因Bcl-2表达量的下调均比非转基因愈伤组织强。因此,与非转基因愈伤组织相比,转基因天山雪莲愈伤组织醇提物对人食管癌细胞Ca Es-17的抗肿瘤活性显著提高,这与愈伤组织中矢车菊半乳糖苷及其代谢相关类黄酮化合物的积累有很大关系。     

毛脉酸模愈伤组织诱导及生物活性成分分析

目的:建立诱导毛脉酸模愈伤组织的培养方法。方法:比较不同激素配比条件下不同外植体愈伤组织的诱导;采用高效液相色谱法,比较愈伤组织与幼苗中7种指标成分的含量差异。结果:子叶诱导产生的愈伤组织出愈早,量多,增殖快,颜色鲜艳,有生命活力,利于继代培养和进一步进行悬浮细胞的培养;子叶在2号培养基(MS+6-BA 3.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L)中诱导状况良好,愈伤组织诱导率高,并且愈伤组织生长速度快,愈伤组织为黄绿色,比较疏松,有利于愈伤组织进一步的悬浮细胞培养;愈伤组织中多数化学成分的峰面积较大,所测的7种生物活性成分中,愈伤组织中的白藜芦醇苷和白藜芦醇的含量低于幼苗根,其余5种成分含量均高于幼苗根,尤其是在愈伤组织中检测到了少量的酸模素成分。结论:子叶为诱导愈伤组织的外植体,2号培养基(MS+6-BA 3.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L)为诱导愈伤组织的最适培养基;愈伤组织含有幼苗根中的全部化学成分,有5种化学成分的含量高于幼苗根,而且还测得有少量酸模素的存在。     

阴香愈伤组织的诱导及继代培养

以阴香枝条为外植体,诱导愈伤组织,探索生产右旋龙脑的途径。实验已获得第一步成果,成功诱导出愈伤组织及愈伤组织继代培养的条件。     

茉莉酸甲酯对高山红景天愈伤组织中红景天苷和多糖积累的影响

目的:探明茉莉酸甲酯(Me JA)对高山红景天愈伤组织生物量及有效物质积累的影响,旨在为其产品生产提供一种新的材料来源。方法:在3 L气球型气升式生物反应器内培养高山红景天愈伤组织20 d后添加Me JA,研究了Me JA处理时间及浓度对愈伤组织生物量、红景天苷和多糖积累及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的影响。结果:用125μmol·L-1的Me JA处理时发现0~6 d愈伤组织生物量无明显变化,但超过6 d后显著减少,Me JA处理4 d时红景天苷和多糖的含量及生产量最高,同时SOD和POD活性达最大。Me JA浓度对愈伤组织生物量和活性物质积累影响很大,浓度超过125μmol·L-1时愈伤组织生物量明显减少;红景天苷和多糖的最大积累量分别出现在225,275μmol·L-1的Me JA浓度处理。对SOD和POD活性测定结果发现,在Me JA 225μmol·L-1处理中出现峰值。对高山红景天愈伤组织中红景天苷及多糖含量与野生植株进行比较的结果,愈伤组织中红景天苷和多糖含量显著高于植株的根和茎叶,愈伤组织中红景天苷的含量分别是根、茎叶的1.1倍、2.4倍;多糖含量分别是根、茎叶的3.6,8.0倍。结论:高山红景天愈伤组织在气球型气升式生物反应内培养20 d后加入225μmol·L-1的茉莉酸甲酯后继续培养4 d有利于红景天苷及多糖的积累,且这两种活性物质的含量明显高于野生植株。因此,通过生物反应器培养愈伤组织是一种获得大量高山红景天活性物质的有效方法,可作为高山红景天产品生产的另一原材料来源。