miR-146b-5p辅助CT检查以预测胃癌淋巴结转移及其在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用

目的探讨miR-146b-5p辅助CT检查对胃癌中淋巴结转移(lymph node metastasis, LNM)的鉴别诊断价值,并评估miR-146b-5p在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用。方法选择2018年1月至2019年12月确诊为胃癌的100例患者和100名健康志愿者为研究对象。应用qRT-PCR分析胃癌细胞、血清标本中miR-146b-5p的表达。通过ROC曲线分析评估血清miR-146b-5p和CT联合检查对胃癌中LNM的鉴别诊断价值。以胃癌细胞MGC803为研究对象,通过抑制或增强细胞中miR-146b-5p的表达来分析miR-146b-5p在胃癌侵袭、迁移中的作用。结果与健康对照组相比,胃癌患者术前血清miR-146b-5p水平明显升高(P0.001)。此外,LNM组胃癌患者术前血清miR-146b-5p水平明显高于非LNM组(P0.001)。通过ROC曲线分析计算miR-146b-5p鉴别LNM的最高诊断值为ΔCt=4.045,AUC=0.801(95%CI:0.727～0.874)。miR-146b-5p高表达与浸润深度、TNM分期、LNM显著相关(P0.01)。多因素Logistic回归分析显示,miR-146b-5p高表达是胃癌患者LNM的强独立诊断因素(P0.01)。miR-146b-5p联合CT对胃癌中LNM的综合诊断价值得到提高(AUC=0.903,95%CI:0.847～0.959),灵敏度为87.75%,特异度为94.23%。在Transwell和集落形成实验中,miR-146b-5p模拟物组迁移和侵袭的细胞数量和集落形成明显高于对照组(P0.01),而miR-146b-5p抑制剂逆转了这些变化(P0.01)。结论血清miR-146b-5p检测与CT评估相结合可以提高术前预测胃癌中LNM的准确性。     

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P0.05),促进Caspase 2表达(P0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P0.05),促进Survivin的蛋白表达(P0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。     

三种微小RNA水平与急性脑梗死严重程度和预后的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血浆微小RNA(miR)-19b-3p、miR-146a和miR-210水平与预后的关系。方法选取ACI患者210例为ACI组,另选取同期健康体检者60例为对照组。对比各组血浆miR-19b-3p、miR-146a、miR-210水平。结果 ACI组血浆miR-19b-3p、miR-210水平明显高于对照组,miR-146a水平明显低于对照组(P0.05)。ACI患者美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分与血浆miR-19b-3p、miR-210水平呈正相关,与miR-146a水平呈负相关(P0.01)。NIHSS评分(OR=1.543,95%CI:1.332～1.787)、miR-19b-3p(OR=1.242,95%CI:1.047～1.474)、miR-210(OR=1.077,95%CI:0.823～1.259)为ACI患者预后不良独立危险因素,miR-146a(OR=0.069,95%CI:0.026～0.185)为独立保护因素(P0.05,P0.01)。结论 ACI患者血浆miR-19b-3p、miR-210水平明显提升,miR-146a水平明显降低,随着病情加重而变化,为预后不良独立影响因素,可能作为ACI患者预后评估指标。     

Caveolin-1和miR-199a-5p在缺血性脑卒中患者外周血及模型大鼠脑组织、脾脏中的表达及其意义

目的探讨缺血性脑卒中(IS)患者外周血及模型大鼠脑组织、脾脏中miR-199a-5p和膜微囊蛋白(Cav)-1的表达水平及临床意义。方法初发IS患者(发病24 h内)外周血标本24例,同时收集在体检中心体检的健康人外周血标本22例。Ficoll淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC)。荧光定量PCR检测PBMC中miR-199a-5p和Cav-1的表达水平。采用改良Zea Longa线栓法构建SD大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型。再灌注24 h后进行神经功能评分,收集脑皮质和脾脏组织。荧光定量PCR检测脑皮质和脾脏miR-199a-5p和Cav-1表达水平。结果 IS患者外周血PBMC中miR-199a-5p表达明显升高(P0.001),Cav-1 mRNA表达显著下降(P0.05)。与假手术组比较,MCAO模型组脑皮质和脾脏miR-199a-5p明显升高(P0.001,P0.01),Cav-1 mRNA表达显著下降(P0.001,P0.01)。结论 miR-199a-5p和Cav-1可能为IS患者重要的炎症指标。     

血清循环miR-551b-3p诊断胃癌的价值研究

[目的]研究胃癌(gastric cancer,GC)患者血清miR-551b-3p的表达,探讨其作为GC潜在诊断生物标志物的可能性。[方法]收集40例GC患者术前、40例正常健康者血清标本,通过实时定量q-PCR检测miR-551b-3p的表达情况,绘制受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),确定诊断cut-off值。[结果]GC患者、正常健康者血清miR-551b-3p表达水平分别为0.045±0.004、0.19±0.38,与正常健康者比较,GC患者的miR-551b-3p水平显著下调(P=0.001)。血清miR-551b-3p的表达与GC的临床病理特征之间的相关性分析结果表明,血清miR-551b-3p表达与年龄、性别无相关性,但与肿瘤大小、侵袭深度和TNM阶段有明显相关性。使用miR-551b-3p诊断GC时,ROC下面积(area under the ROC,AUC)为0.857(95%CI:0.77～0.939,P=0.000),预测阈值cut-off值为0.0152,对应的灵敏度、特异度分别为87.5%、70.0%。[结论]血清循环miR-551b-3p可能是诊断GC的新型生物学标志物,但仍需进一步扩大样本量进临床研究验证其诊断价值。     

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-3p的表达研究

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)患者外周血单核细胞中miR-125a-3p的表达水平.方法 收集昆明医科大学附属延安医院心血管内科2014年8月1日至2014年10月30日收治并被确诊为冠心病的患者共63例,其中稳定型心绞痛组23例(B组);急性冠状动脉综合征组40例(C组),选择健康对照组20例(A组).抽取静脉血,分离单核细胞,提取单核细胞总核糖核酸(ribonucleic acids,RNA),使用实时荧光定量PCR(real-time fluoresecnt quantitative PCR,RT-PCR)检测miR-125a-3p的表达水平.结果 A组、B组、C组miR-125a-3p表达水平分别为1、3.12(2.86~3.38)、24.79(8.85~40.73).与A组比较,B组、C组miR-125a-3p表达水平显著上调(P<0.01);与B组比较,C组miR-125a-3p表达水平显著上调(P<0.01).结论 miR-125a-3p可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点.     

LncRNA CASC7与miR-27b-3p在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA CASC7(LncRNA CASC7)与微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义。方法结核菌H37Rv、H37Ra分别感染单核细胞,采用qRT-PCR法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测CASC7与miR-27b-3p的靶向关系;选取2018年3月至2019年10月本院收治的肺结核患者120例为研究组,根据活动性肺结核诊断标准将肺结核患者分为非活动性肺结核组60例、活动性肺结核组60例,同时选取同期健康体检者60例为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;ROC分析CASC7与miR-27b-3p对肺结核的诊断价值。结果与感染前比较,H37Rv、H37Ra感染后单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P0.05);双荧光素酶报告基因实验证实CASC7可靶向结合miR-27b-3p;与对照组比较,研究组患者外周血单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P0.05),且活动性肺结核组显著低于非活动性肺结核组(P0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P0.05),且活动性肺结核组显著高于非活动性肺结核组(P0.05);ROC分析显示CASC7的敏感度为57.50%,特异度为91.67%,AUC面积为0.781;miR-27b-3p的敏感度为57.50%,特异度为81.67%,AUC面积为0.665;联合检测的敏感度为96.67%,特异度为60.00%,AUC面积为0.802。结论肺结核外周血单核细胞与结核菌感染单核细胞中CASC7表达下调,miR-27b-3p表达上调,对肺结核辅助诊断及靶向治疗均具有一定参考价值。     

急性心肌梗死患者循环miR-208b-3p诊断价值的研究

目的：探讨急性心肌梗死患者循环miR-208b-3p与正常健康人的表达是否具有差异,及其在不同亚组中的诊断价值探索。方法：收集140例急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)患者入院即刻血浆样本和19例健康人(healthy controls, HC)血浆样本,特异茎环反转录实时定量PCR(qRT-PCR)检测样本miR-208b-3p的表达水平,并与超敏肌钙蛋白I(hs-TnI)和肌酸激酶-同工酶(CK-MB)进行对比分析;qRT-PCR检测ST段抬高性型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction, STEMI)和非ST段抬高性心肌梗死(non-ST segment elevation myocardial infarction, NSTEMI)患者血浆miR-208b-3p表达水平,ROC曲线评估诊断价值。结果：AMI组和HC组血浆miR-208b-3p的表达量分别为43.86±7.50和2.05±0.62,差异具有统计学意义(P < 0.05);miR-208b-3p与CK-MB呈明显正相关(r = 0.546,P < 0.001),miR-208b-3p、CK-MB和hs-TnI ROC曲线下面积(AUC)分别是0.874(P < 0.001)、0.976(P < 0.001)和0.971(P < 0.001);STEMI亚组和NSTEMI亚组血浆miR-208b-3p表达量分别为55.04±10.44和21.01±7.13,差异具有统计学意义(P < 0.05),AUC分别为0.935(P < 0.001)和0.749(P < 0.01)。结论：循环miR-208b-3p可作为AMI患者的早期诊断标准,但不优于hs-TnI和CK-MB;循环miR-208b-3p对于STEMI亚组的诊断敏感性和特异性高于NSTEMI亚组。     

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

miR-205-5p/PRKCA/p38信号通路在淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化中的介导作用

目的探讨miR-205-5p/蛋白激酶Cα(PRKCA)/p38信号通路在淫羊藿苷(ICA)抑制动脉粥样硬化(AS)中的介导作用。方法首先通过整体动物实验研究ICA对载脂蛋白(Apo)E~(-/-)小鼠的抗AS作用;然后取小鼠胸主动脉组织进行基因芯片检测,再通过生物信息分析找到有意义的miRNA及其作用的靶基因,级联通路;最后应用定量聚合酶链反应(qPCR)及Western印迹方法对所构建的通路在体内外实验标本中进行验证。结果在整体动物实验中,血脂水平和HE染色结果表明,ICA具有抗AS作用;通过对基因芯片检测结果分析找到目标miR-205-5p,通过生物信息分析预测其靶基因为PRKCA,并级联p38信号通路分子,构建miR-205-5p/PRKCA/p38信号通路;qPCR及Western印迹结果显示,在ApoE~(-/-)小鼠胸主动脉及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)中,模型组miR-205-5p表达显著下降(P0.001),PRKCA mRNA及蛋白表达显著升高,p38蛋白磷酸化显著增加(P0.001);ICA干预后,miR-205-5p表达显著升高(P0.001),PRKCA mRNA及蛋白表达显著下降(P0.001),p38蛋白磷酸化显著减少(P0.001),且具有量效关系;ICA对ox-LDL刺激VSMCs的增殖和迁移具有显著抑制作用(P0.001或P0.05)。结论 ICA具有抗AS作用,其机制可能是通过提高miR-205-5p表达,下调PRKCA mRNA及蛋白表达,进而减少p38蛋白磷酸化,并抑制VSMCs增殖与迁移,从而发挥其抗AS作用。     

miR-551b-3p在胰腺癌细胞和组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-551b-3p在胰腺癌细胞和组织中的表达,探讨其在胰腺癌发生发展中的临床意义。方法利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测4种胰腺癌细胞和正常胰腺导管上皮细胞,以及76对胰腺癌组织和癌旁组织中miR-551b-3p的表达水平,并对miR-551b-3p的表达与胰腺癌患者临床病理学特征进行分析。结果 miR-551b-3p在PANC-1、Aspc-1、SW1990和Miapaca-2四种胰腺癌细胞中的相对表达量分别为(0.125±0.012)、(0.179±0.005)、(0.672±0.025)、(0.577±0.019),低于其在正常胰腺导管上皮细胞HPDE6C-7中的相对表达量,差异有统计学意义(P0.05)。在胰腺癌组织和癌旁组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(7.254±0.112)和(3.993±0.098),差异有统计学意义(P0.001)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(4.343±0.032)、(5.325±0.112)、(6.987±0.098)和(9.132±0.212),差异有统计学意义(P0.001)。有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(8.492±0.021)和(6.676±0.103),差异有统计学意义(P=0.012)。高、中、低分化胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(5.349±0.092)、(6.129±0.112)、(8.454±0.065),差异有统计学意义(P=0.002)。结论 miR-551b-3p的表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移以及TNM分期相关。miR-551b-3p可能是提示胰腺癌临床进展的潜在标志物。     

血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平与早发冠心病的相关性及其初筛价值

目的]探讨血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平与早发冠心病(PCAD)的相关性及其对PCAD的初筛价值。[方法]根据纳入标准及排除标准,纳入6例明确诊断的PCAD患者作为PCAD组,纳入6例健康受试者作为对照组,收集PCAD组和对照组血液,提取血清样本并保存,使用DNBseq平台检测两组血清中miRNA水平,筛选差异水平显著的miRNA。根据纳入标准及排除标准,收集78例PCAD患者、75例晚发冠心病患者和69例健康对照者的血液并对筛选的miRNA进行实时荧光定量PCR验证。分析PCAD患者冠状动脉造影报告,采用Gensini评分评估冠状动脉病变的严重程度。Spearman相关性检验分析有关miRNA水平与冠状动脉狭窄程度的相关性。ROC曲线分析血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p及miR-30a-3p水平对PCAD的诊断价值,多因素Logistic回归分析PCAD发生的影响因素。[结果]DNBseq平台分析显示,差异表达miRNA 33个,其中上调miRNA 17个,下调miRNA 16个,差异水平最为显著的5个miRNA分别为miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p、miR-424-3p和miR-30a-3p;实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,PCAD患者血浆miR-1228-5p升高1.7倍,miR-34a-5p升高1.4倍,miR-192-5p升高0.7倍,miR-30a-3p升高2.5倍(P＜0.05),两组间血浆miR-424-3p水平差异无统计学意义(P＞0.05);血浆miR-1228-5p和miR-34a-5p水平与PCAD患者冠状动脉狭窄程度均呈正相关(r＝0.307,P＝0.004;r＝0.238,P＝0.036);ROC曲线分析显示,miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p诊断PCAD的ROC曲线下面积分别为0.903、0.832、0.731及0.798,其联合诊断PCAD的ROC曲线下面积为0.990,95%CI为0.976～1.000。[结论]PCAD患者血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平显著升高,其联合检测诊断PCAD具有较高的准确性,有望成为初筛PCAD的新型生物标志物。     

维持性腹膜透析患者血清微小核糖核酸-29b表达水平与腹主动脉钙化的相关性研究

目的:探讨维持性腹膜透析患者血清微小核糖核酸(miR)-29b水平与腹主动脉钙化相关性。方法:选取2017年7月至2020年7月,在我院行维持性腹膜透析治疗的患者176例,收集临床资料,行腹部侧位X线片检查并采用半定量积分法评估腹主动脉钙化积分(AACS),根据AACS积分将患者分为非钙化组和钙化组,利用实时荧光定量PCR术检测血清中miR-29b表达量。结果:176例腹膜透析患者中,131例存在腹主动脉钙化,患病率74.4%,其中,轻度钙化38例,中度钙化52例,重度钙化41例。钙化组患者年龄、透析时间、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺激素(PTH)、血钙(Ca)和血磷(P)均高于非钙化组,而ALB、残余肾功能、总尿素清除指数和miR-29b表达量均低于非钙化组,差异有统计学意义(P0.05);轻度钙化、中度钙化和重度钙化患者血清中miR-29b表达量差异有统计学意义,轻度钙化中度钙化重度钙化;Pearson相关分析结果显示,AACS积分与年龄、透析时间、ALP、PTH、Ca和P呈正相关(r=0.386、0.496、0.265、0.398、0.381、0.297,P0.05),而与ALB、残余肾功能、总尿素清除指数和miR-29b表达量呈负相关(r=-0.344、-0.307、-0.222和-0.358,P0.05);Logistic回归分析结果显示,透析时间、ALP、残余肾功能和miR-29b表达量是腹主动脉钙化的影响因素(P0.05);ROC曲线分析结果显示,血清中miR-29b表达量在预测发生腹主动脉钙化时,曲线下面积为0.856(95%CI:0.784～0.929),当miR-29b取0.95时,灵敏度为83.21%,特异度为77.78%。结论:维持性腹膜透析患者发生腹主动脉钙化时血清miR-29b表达量降低,且与病程进展程度有关,是腹主动脉钙化的独立危险因素,对腹主动脉钙化具有良好的预测价值。     

维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系

目的 探讨维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系.方法 选择慢性肾脏疾病5期维持性血液透析患者17例(透析时间在1年以上),均为自体桡动脉-头静脉内瘘作为透析通路的患者,因自体动静脉内瘘失功拟重建血管通路.在动静脉内瘘重建过程中,取失功动静脉内瘘动脉段作为实验组标本,同龄人群(取材于尸体肾供者)腹主动脉作为对照组.以von Kossa染色法对血管钙化进行定性检测,甲酚酞络合酮化学法对血管钙化进行定量检测,磷酸苯二钠法测定血管组织碱性磷酸酶活性.Western blotting检测血管组织p53蛋白水平,并对血管钙含量和碱性磷酸酶活性与p53的表达进行相关性分析.结果 维持性血液透析患者桡动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为0.81)显著低于同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为1.72),而血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性分别较同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞增加69%和105%(P均＜0.01).相关性分析发现,p53的表达与血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性均成显著负相关(r=-0.77和r=-0.86,P均＜0.01).结论 在5期慢性肾脏疾病维持性血液透析患者中血管钙化广泛存在,血管钙化伴随着血管平滑肌细胞p53蛋白表达的显著下降,这一现象提示慢性肾脏疾病患者血管平滑肌细胞p53表达的抑制可能参与了血管钙化的发生机制.     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

CMTM3在胃癌中的表达及其生物学功能研究

背景胃癌(gastric cancer,GC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一,预后较差.晚期患者5年生存率低,同时大部分患者发现时已发展为远处转移的晚期或局部晚期,丧失了手术机会.然而,GC发生发展及侵袭转移的确切分子机制仍不完全明晰.目的在本研究中,我们采用生物信息分析结合细胞实验方法探讨CMTM3基因在GC中的表达、生物学功能及其潜在的分子调控机制.方法首先在GEO和TCGA数据库中分析CMTM3基因的差异表达情况,并比较CMTM3基因高低表达与GC患者预后的关系.在正常胃上皮细胞(GES-1)和多个GC细胞系(HGC-27,BGC-823和MKN45)中比较CMTM3基因的表达情况.在MKN45细胞中转染外源性小干扰RNA(sh-CMTMM)下调细胞中CMTM3基因表达后,采用MTT实验和划痕实验,评价下调前后细胞增殖和迁移能力有无改变.GEO数据库中筛选GC组织vs胃正常组织中差异表达的microRNA谱,并根据m icro RN A在线预测软件Targ ets c an预测CMCT3上游靶基因miR-125b-5P.选取我院收治的15例GC患者,采用q-P C R方法检测癌组织和癌旁组织中CMTM3和miR-125b-5P表达水平.双荧光素酶报告实验验证miR-125b-5P与CMTM3靶向调控关系.转染外源性miR-125b-5P-mimic,评价MKN45细胞增殖和迁移能力的变化.结果在GC患者,癌组织中的CMTM3基因mRNA表达水平明显高于癌旁正常胃组织(P0.05).CMTM3基因高表达GC患者总生存(overall survival,OS)和无疾病进展生存(disease free survival,DFS)均低于低表达患者.外源性小干扰RNA(sh-CMTM3-1)可显著下调MKN45 GC细胞中CMTM3基因表达(P0.05).shCMTM3-1下调MKN45 GC细胞中CMTM3基因表达后,细胞的迁移能力明显减低(P0.05).MTT实验显示,sh-CMTM3-1下调CMTM3表达后,MKN45 GC细胞增殖能力明显下降(P0.05).筛选出CMTM3上游靶基因miR-125b-5P.miR-125b-5P在正常胃黏膜细胞系中表达水平明显高于GC细胞系(P0.05),GC患者癌组织中miR-125b-5P表达水平明显低于癌旁正常组织(P0.05).CMTM3基因在GC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.05).GC组织中CMTM3与miR-125b-5P表达呈负相关(r_(Pearson)=-0.58,P0.05).MKN45细胞中。miR-125b-5可显著下调CMTM3基因表达(P0.05).双荧光素酶报告实验显示miR-125b-5P基因与CMTM3基因3'UTR靶向结合.转染miR-125b-5Pmimic下调CMTM3表达后GC MKN45细胞增殖能力和迁移能力明显减低(P0.05).结论 miR-125b-5P靶向调控CMTM3基因表达影响GC增殖和迁移能力,并有望成为GC预后的分子标志物和潜在治疗靶点.     

克罗恩病患者外周血miR-125a水平与疾病活动度的相关性分析

目的探究克罗恩病(CD)患者外周血miR-125a水平与疾病活动度的相关性。方法选择2017年3月至2020年3月北京市顺义区医院收治的183例CD患者,根据简化克罗恩病活动指数(CDAI)分为缓解组(64例,CDAI≤4分)和活动组(119例,CDAI>4分),另选择同期在本院体检的60名健康者作为对照组,比较3组的外周血miR-125a相对表达量,对CD患者外周血miR-125a相对表达量与疾病活动度进行Spearman相关分析,对CD的影响因素进行Logistic回归分析,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血miR-125a相对表达量对活动期CD的预测价值。结果与对照组相比,缓解组和活动组的外周血miR-125a相对表达量均升高(P均<0.05);与缓解组相比,活动组外周血miR-125a相对表达量升高(P<0.05)。CD患者外周血miR-125a相对表达量与疾病活动度呈正相关(P<0.05)。外周血miR-125a相对表达量升高是活动期CD的危险因素(P<0.05)。外周血miR-125a相对表达量预测活动期CD的ROC曲线下面积(AUC)为0.844(95%CI:0.793~0.899),敏感度为69.92%,特异度为80.06%,准确度为79.14%,截断值为1.20。结论CD患者外周血miR-125a水平与CD疾病活动度呈正相关,miR-125a有潜力作为评估CD病情的指标。     

长链非编码RNA GAS5通过调控miR-196b-5p抑制非小细胞肺癌细胞增殖侵袭迁移的机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)GAS5对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR检测非小细胞肺癌细胞A549和肺支气管正常细胞16HBE中LncRNA GAS5、miR-196b-5p的表达;将miR-196b-5p组(转染miR-196b-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-196b-5p组(转染anti-miR-196b-5p)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-GAS5+miR-196b-5p组(pcDNA3.1-GAS5和miR-196b-5p mimics共转染)均用脂质体法转染至A549细胞。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与肺支气管正常细胞16HBE相比,非小细胞肺癌细胞A549中LncRNA GAS5的表达显著降低,miR-196b-5p的表达显著升高(P<0.05);过表达GAS5、抑制miR-196b-5p均可显著抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭;LncRNA GAS5靶向miR-196b-5p,且过表达miR-196b-5p可逆转LncRNA GAS5对A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LncRNA GAS5可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向负调控LncRNA GAS5有关,将可为非小细胞肺癌的靶向治疗提供新靶点。     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移及侵袭的影响

背景我国结肠癌发病率与死亡率逐年上升,目前结肠癌的发病机制尚未阐明, LncRNA 在结肠癌等肿瘤发生过程中可发挥重要调控作用,其主要通过竞争性结合miRNA而发挥作用,已知LncRNA LINC01224在肿瘤中可能发挥癌基因作用,但LINC01224在结肠癌形成及发展过程中的作用机制尚未阐明.目的探讨LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移、侵袭的影响及其可能作用机制.方法采用qRT-PCR法检测癌旁组织与结肠癌组织中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;si-NC、siLINC01224、si-LINC01224与anti-miR-NC、siLINC01224与anti-miR-513b-5p分别转染入人结肠癌细胞SW1116;采用qRT-PCR法检测SW1116细胞中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;采用MTT实验检测细胞存活率;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC01224与miR-513b-5p的靶向关系;Westernblot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量.结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中LINC01224的表达水平升高(P0.05),miR-513b-5p的表达水平降低(P0.05);与si-NC组比较,si-LINC01224组细胞存活率降低(P0.05),G0-G1期细胞比例升高(P0.05),S期细胞比例降低(P0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P0.05),N-cadherin蛋白水平降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC01224可靶向结合miR-513b-5p;与siLINC01224+anti-miR-NC组比较,si-LINC01224+antimiR-513b-5p组细胞存活率升高(P0.05),G0-G1期细胞比例降低(P0.05),S期细胞比例升高(P0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P0.05),N-cadherin蛋白水平升高(P0.05).结论干扰LINC01224表达可通过上调miR-513b-5p而减弱结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并可诱导细胞周期阻滞于G0-G1期.