生物素标记探针原位杂交法检测细胞滴片和组织切片中人乳头状瘤病毒

生物素标记探针原位杂交法检测细胞滴片和组织切片中人乳头状瘤病毒邢鲁奇，马钧，刘鸿瑞，司静懿使用国产生物素缺口平移法标记ＤＮＡ试剂盒对扩增、提取和纯化的人乳头状瘤病毒（ＮＰＶ）ＤＮＡ进行标记，制备ＨＰＶＤＮＡ探针，建立了原位杂交检测细胞滴片、冰冻切片和...     

一种生物素标记探针DNA—RNA原位杂交方法

一种生物素标记探针ＤＮＡ—ＲＮＡ原位杂交方法王建明，李凌，沈贵华，崔惠云，李申德我们采用国产生物素光标记试剂盒标记探针，用于细胞涂片，冰冻切片及石蜡切片的原位杂交，检测细胞中目的基因的转录产生水平。一、材料和方法１．标本：人大肠肿瘤手术标本，冰冻切片...     

用地高辛配基标记探针原位杂交检测单拷贝基因

用地高辛配基标记探针原位杂交检测单拷贝基因乔旭刚，朱平，李崇高我们探讨地高辛配基随机引物法标记探针的原位杂交在人类染色体上检测单拷贝基因的可行性。１材料与方法１．１材料与试剂正常人染色体标本来自本室工作人员外周血。ＤＮＡ探针：Ｔ细胞表面受体β链基因探...     

对比基因组杂交技术在肿瘤遗传学研究中的应用

对比基因组杂交技术是近几年发展起来的一种能快速全面分析染色体一个基因组甚至一条染色体获得和缺失的分子细胞遗传学方法。其具体方法是分别标记肿瘤ＤＮＡ和正常人体胎盘组织中提取的参照ＤＮＡ，制成探针，再与正常人体中期染色体铺片竞争性地原位杂交，通过对比各条染色体ＤＮＡ序列中两种荧光强度，揭示出肿瘤染色体某一基因的扩增和缺失。     

一种快捷、简便制备基因探针的方法

本文对常规随机引物标记基因探针法进行了改进，排除了已标记载体ＤＮＡ片段在核酸分子杂交反应中的影响，证明了载有特异ｃＤＮＡ片段质粒直接用于标记探针的可行性，建立了一种快捷、简便、经济的基因探针制备方法，并为特异ＤＮＡ片段酶切、回收困难质粒的应用提供了一条可行之路     

牛巴贝斯虫核酸探针研制和应用试验

对比不同方法制备牛巴贝斯虫Ｃ５１Ａ探针ＤＮＡ和光敏生物素标记的效果，建立ＥＣＯＲＩ酶切纯化的Ｃ５１Ａ探针制备技术。该探针除具备重组质量ＤＮＡ探针的特异性和灵敏度外，杂交效果更规律清晰。开始应用到流行地区奶牛血样检测。     

用原位杂交法研究兔附睾蛋白BE－20的基因表达

兔附睾尾液经ＨＰＬＣ纯化后，获得分子量为２０ｋＤ的附睾特异蛋白，命名为ＢＥ－２０。ＢＥ－２０的抗体具有明显抑制人精子穿透去透明带仓鼠卵的能力。已获得编码ＢＥ－２０的０．５ｋｂｃＤＮＡ片段，命名为ＲＥＤ－２０。用地高辛标记此片段，与兔睾丸、附睾、输精管和肝组织进行原位杂交，观察ＢＥ－２０在各种组织中的定位和表达。采用杂交前热变性与不用热变性组织两种方法进行原位杂交。杂交信号均为紫褐色的颗粒，分布在附睾尾的主细胞和近端输精管的上皮细胞的胞质内，表明胞质内ｍＲＮＡ与地高辛标记ＲＥＤ－２０ｃＤＮＡ探针杂交。组织经热变性后，附睾尾和近端输精管上皮细胞核出现强阳性反应，表明核内的同源ＤＮＡ与地高辛标记的ＲＥＤ－２０ｃＤＮＡ探针杂交。但在睾丸和肝脏内未见杂交信号，提示ＢＥ－２０是附睾尾和近端输精管上皮细胞合成的蛋白质。经分析证明，此蛋白是一种细胞外的蛋白酶抑制剂，可能与防止精子过早获能有关，它是否能用于制备抗生育疫苗有待深入的研究。     

染色体上引物原位DNA合成技术及其应用

染色体上引物原位ＤＮＡ合成技术因具有简便，快速，不需克隆基因作探针等优点而被认为是现行原位杂交技术的替代者。本文介绍了该技术的操作程序，其中包括非放射性的引物原位ＤＮＡ标记，合成技术和本实验室刚刚建立的引物原位ＤＮＡ氚标记合成技术，并讨论了该技术的特点和不足之处。     

21号染色体特异性柯斯质粒DNA克隆区域定位

为提高检测２１号染色体数目和结构异常的精确性，应用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ通过缺口平移法标记Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ＤＮＡ克隆，将标记后的Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆双探针与正常二倍体细胞系染色体进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），结合Ｑ显带方法将６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位于２１ｑ２２；用柯斯质粒ＤＮＡ克隆探针与两个已知的平衡易位细胞系ＧＭ９５４２和８３２７Ｌ的染色体进行荧光原位杂交，检测并分析杂交信号在两个平衡易位细胞系染色体上的分布，结果表明柯斯质粒ＤＮＡ克隆精确定位于２１ｑ２２．２，６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位结果一致。     

染色体上引物原位DNA合成技术及其应用

染色体上引物原位ＤＮＡ合成技术因具有简便、快速、不需克隆基因作探针等优点而被认为是现行原位杂交技术的潜在替代者。本文介绍了该技术的操作程序，其中包括非放射性的引物原位ＤＮＡ标记合成技术和本实验室刚刚建立的引物原位ＤＮＡ氚标记合成技术，并讨论了该技术的特点和不足之处。     

地高辛标记HPV16DNA探针的研制及其初步应用

为克服ｐＨＰＶ１６重组质粒同位素探针特异性差、操作不便等弊端，我们建立了一套ＨＰＶ１６ＤＮＡ的制备、纯化及制备其地高辛标记探针的方法。点杂交结果表明：此探针的灵敏度达１ｐｇ，特异性强，适合于临床筛选ＨＰＶ感染的宫颈癌高危患者。     

地高辛标记的cDNA探针检测GM—GSFmRNA表达

采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞，骨髓基质细胞，白血病细胞株，脐 细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针使用简便，灵敏度高，特异性强，杂交结果直观，探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

人白介素6基因探针的制备及初步应用

本文应用ＰＣＲ技术，选择扩增出人白介素６ｃＤＮＡ的４００ｂｐ左右片段，将此片段插入ＰＵＣ１８质粒中，经电泳检测、序列分析证实，扩增片段与发表序列一致。酶切、电泳回收纯化片段，将片段标记光敏生物素作为探针，应用于斑点杂交检测探针的灵敏度与特异性，结果表明该人白介素６基因探针具有灵敏度高（１０ｐｇ左右）、特异性强、应用方便等特点。初步应用于几株肿瘤细胞系细胞原位杂交检测人ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达，所得结果与文献报道一致。     

乳头状瘤病毒6B／11cDNA和角蛋白的双标记方法

乳头状瘤病毒６Ｂ／１１ｃＤＮＡ和角蛋白的双标记方法邓永江谈敏黄晓南吴霞田玉旺丁华野在同一切片上，我们应用角蛋白（ｋｅｒａｔｉｎ）单克隆抗体与乳头瘤状病毒（ＨＰＶ）探针，以及ｐ５３单抗与ｐ５３核酸探针进行原位杂交和免疫组化双标记，检测尖锐湿疣及乳腺癌组...     

一个新的微卫星多态标记(D14S1435)的FISH定位

目的将从人染色体１４ｑ２４．３显微切割制备的ＤＮＡ文库中分离得到的一个新的微卫星多态标记（Ｄ１４Ｓ１４３５，ＣＡ重复序列，人群中存在１１种等位形式，ＰＩＣ值为０．８５）进行染色体荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）返回定位。方法以此多态标记筛选人Ｌａｍｂｄａ／ＤＡＳＨ基因组文库，得到的阳性重组噬菌体ＤＮＡ，通过ＢａｍＨⅠ完全酶切，低熔点胶电泳回收插入片段，再经Ｓａｕ３ＡⅠ酶切，接头捕获ＰＣＲ（ｌｉｎｋｅｒ－ｃａｔｃｈＰＣＲ）法标记探针进行ＦＩＳＨ。结果将这一新的ＳＴＲ精确地定位于人染色体１４ｑ２４．３，证实了从染色体显微切割探针池分离染色体区带特异性遗传标记的可靠性。结论经染色体显微切割、ＰＣＲ及微克隆方法所得到的遗传标记，通过染色体荧光原位杂交证实其确实来自所切割区域，增加了这一区域可用于连锁分析的遗传标记，为定位在１４ｑ２４．３区带内若干遗传病的基因诊断和基因克隆，提供一个新的有价值的遗传标记。     

同位素标记探针对检测肺组织氧合血红素酶表达的影响

由于同位素标记探针特异性强 ,灵敏度高 ,一直是基因表达实验研究中常用的标记物 ,我们在检测大鼠肢体缺血再灌后不同时点 ,肺组织氧合血红素酶 (ＨＯ - 1)的表达时 ,用 [α - 3 2 Ｐ]ｄＣＴＰ标记ＨＯ - 1探针 ,并于标记后进行探针纯化。现报道其效果与不纯化探针的比较。材　料　和　方　法1　随机引物标记试剂盒 (北京鼎国生物工程公司产品 )。2　模板ＤＮＡ取肢体缺血再灌后大鼠肺组织 10 0ｍｇ按常规方法提取ＤＮＡ。3　探针标记 ,反应体系用 2 5 μＬ无菌水溶解模板ＤＮＡ 2 5ｎｇ ,加 1 0 μＬ随机引物混匀 95℃ - 10 0℃ 2ｍｉｎ ,…     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用地高辛标记的ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针分别在４８宫颈癌组织上进行原位杂交检测ＨＰＶＤＮＡ，结果ＨＰＶＤＮＡ阳性２３例，其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ例，ＨＰＶ１８ＤＮＡ４例，未见ＨＰＶ６ＤＮＡ和ＨＰＶ１１ＤＮＡ阳性，ＨＰＶＤＮＡ主要见于凹空细胞和癌细胞的细胞核中，少部分见于癌细胞浆中，我们的结果表明原位杂交可用来研究宫颈组织中ＨＰＶ的存在及分型，同时也证实了宫颈癌的发生和某些     

21号染色体特异性柯斯质粒DNA克隆克域定位

为提高检测２１号染色体数目和结构异常的精确性，应用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ通过缺口平移法标记Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆，将标记后的Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１的６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆双探针与正常二倍体细胞系染色体进行荧光原位杂交，结合Ｑ显方法将６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位于２１ｑ２２。     

人谷胱甘肽S－转移酶基因π（cDNA）的筛选和鉴定

采用免疫筛选法和寡核苷酸探针筛选法从人肺ｃＤＮＡ文库中筛选得到人ＧＳＴ一ｐｉ（ＧＳＴ－ｘ）ｃＤＮＡ，对其序列进行了测定和分析。     

吻合术后动脉弹性蛋白原的表达

采用寡核苷酸探针原位杂交的方法了解吻合动脉的弹性蛋白原m RNA表达的变化。Wistar大鼠 6 0只 ,手术显微镜下 ,常规消毒铺单将大鼠右股动脉剪开并重新端端吻合 ,术后分笼标记饲养。实验动物分成 6个时相点组和未吻合侧为对照组。于吻合后 3,7,14,2 1,2 8,90天 ,切取吻合动脉和对侧动脉 ,冰冻切片后 ,以地高辛标记的寡核苷酸探针作原位杂交。根据大鼠tropoelastin c DNA序列设计出长度为 2 6 bp的反义寡核苷酸 5′- GGC TCT CGG TGGTAT TGG TGG CAT CG- 3′,经同源性查询 ,该序列与大鼠血管平滑肌细胞tropoelastin c DNA同源…