三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成（P〈0.05）,且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义（P〈0.01）;三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调（P〈0.05）。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

5,7,4′-三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期的影响

目的 观察5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞周期的影响,探讨5,7,4′-三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的机制.方法 分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入25、50、100 μmol/L浓度的5,7,4′-三羟基异黄酮共培养48 h,免疫细胞化学法观察成纤维细胞PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 各组5,7,4′-三羟基异黄酮作用后细胞PCNA的表达均降低(P＜0.05),50 μmol/L及100 μmol/L浓度组的抑制作用最为显著(P＜0.01);随药物浓度的增加,G0～G1期细胞比例逐渐下降,G2～M期细胞比例增加,表明细胞分裂受到抑制;100 μmol/L组的S期细胞数量比例也有增加,并于G1期前出现亚二倍体凋亡峰.结论 5,7,4′-三羟基异黄酮可通过影响细胞分裂与DNA合成抑制瘢痕增生.     

蛇床子素诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的 研究蛇床子素在体外实验中诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制.方法 体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于FB,应用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响.Hoechst 33342荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核的变化.以DNA ladder和流式细胞仪进行凋亡检测.采用RT-PCR法检测蛇床子素对FB相关凋亡基因Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响.结果 在蛇床子素作用下,人增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制,MTT法检测的IC50为(15.5±2.2)μmol/L.荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNA ladder法检测到细胞凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪观察到细胞周期的变化.蛇床子素作用于成纤维细胞后可上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调抑凋亡基因Bcl-2的表达.结论 蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以诱导其凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关.     

青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。     

抗血管生成对瘢痕疙瘩成纤维细胞增生和凋亡的影响

目的 探讨人工抗血管生成对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增生和凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的抗血管治疗提供实验依据.方法 手术切除人瘢痕疙瘩1条,将其分成30块,分别种植于裸鼠皮下,其中24块成活,分成3组,应用促血管内皮生长因子(VEGF组)、血管内皮抑制素(Endostar组)和0.9%的氯化钠溶液(对照组)干预瘢痕疙瘩微血管数量...     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导增生性瘢痕细胞凋亡的研究

目的：探讨反义寡核苷酸(ASODN)对bcl-2基因的表达调控及诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：采用RT-PCR法和流式细胞术检测ASODN对bcl-2蛋白和mRNA表达量的调控；通过MTT法比较两条人工合成ASODN直接作用及脂质体D0’FAt，转染对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制效果；用相差显微镜、电子显微镜观察bcl-2ASODN诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡效果。结果：ASODN降低bcl-2蛋白和mRNA表达；两条ASODN抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性，且靶位点于mRNA蛋白编码区(ASODN2)和以DOTAP为载体的ASODN对成纤维细胞的增殖抑制效果最佳。Bcl-2ASODN作用于成纤维细胞后，成纤维细胞缩小、凋亡小体和染色质浓缩等特征性改变出现。结论：bcl-2ASODN能抑制bcl-2mRNA和蛋白表达，诱导成纤维细胞凋亡。     

压应力对增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的影响

目的:探讨不同持续时间压应力对人增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的影响。方法:组织块培养法获取人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb),并随机将HSFb随机分为对照组(未施压)、持续施压组(25mmHg,6～8天)和施压(25mmHg,3～4天)后去除压应力组。分别以MTT法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪测定细胞生长周期、免疫组化观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及Annexin-V-PI标记法测定细胞凋亡情况。结果:25mmHg持续压应力对HSFb的生长抑制率随加压时间的延长逐渐增大;与对照组相应时相点比较,PCNA表达降低,处于增殖期(S G2 M)细胞比例减小;细胞凋亡率随施压时间延长逐渐增加;而施压后去除压应力继续培养观察显示,HSFb的抑制率逐渐回降,PCNA表达增加和增殖期细胞比"例反弹"增大,细胞的凋亡率也逐渐下降。结论:适当的持续压应力对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制增殖与促进凋亡的共同效应,短期加压后去除压力致使上述效应"反弹性"降低,可能是临床上对增生性瘢痕压迫治疗需要早期、持续、长期维持的原因之一。     

厚朴酚影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学功能的实验研究

目的 探讨厚朴酚对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的调节作用。方法 自2020年9月至2021年9月,北部战区总医院烧伤整形科将增生性瘢痕成纤维细胞分为4组,分别使用0、10、20和40μmol/L的厚朴酚处理。于作用后0、1、2、3和4 d使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖。作用后1 d使用细胞周期试剂盒检测细胞周期情况,细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平,台盼蓝染色法检测细胞迁移水平,Western blot实验检测细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结果 细胞增殖实验检测结果显示,与0μmol/L的厚朴酚作用相比,10、20和40μmol/L的厚朴酚作用增生性瘢痕成纤维细胞1～4 d后,能够显著抑制细胞的增殖能力。10、20和40μmol/L的厚朴酚均能够促进G0-G1期细胞的表达,下调S期细胞百分比,抑制细胞周期的进程;促进早期和晚期凋亡细胞的百分比;明显下调增生性瘢痕成纤维细胞的迁移水平。Western blot实验结果显示,厚朴酚可以显著下调细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结论 厚朴酚能够通过抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增...     

β射线诱导成纤维细胞凋亡与防治瘢痕增生的关系

目的 探讨β射线防治瘢痕增生的作用机理。方法 用ＭＴＴ法分析β射线对增生性瘢痕成纤维细胞生长的影响。用电镜,ＤＮＡ凝胶电冰和流式细胞仪观察细胞形态和ＤＮＡ的变化。结果 β射线明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长;１０Ｇｙβ射线诱导出典型的细胞凋亡特征,如凋亡小体,ＤＮＡ梯状条带,特征性亚Ｇ１峰等,２０Ｇｙβ射线导致细胞坏死。结论 β射线诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡是放射防治瘢痕增生的重要机理之一,β     

Bcl-2过度表达对大鼠成骨细胞Bax、Caspase-3表达的影响

目的：探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对大鼠成骨细胞Bax蛋白以及活性Caspase-3表达的影响。方法：将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染大鼠成骨细胞使之过表达，用免疫组化ABC法检测Bax、Caspase-3活性蛋白表达变化。结果：转染筛选后的阳性克隆细胞表现为Bcl-2表达显著增强。同时Bax蛋白表达下降接近显著性差异，活性Caspase-3表达无明显变化。结论：Bcl-2过度表达对活性Caspase-3表达无影响，但对Bax蛋白表达起下调作用，提示Bcl-2家族成员之间可以相互影响。     

地氟醚预处理与缺氧/复氧损伤内皮细胞凋亡相关基因表达

目的 观察地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤内皮细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响.探讨地氟醚预处理抑制细胞凋亡的机制.方法 选用人脐静脉内皮细胞株(ECV304).将细胞分为五组,即A/R组(A组)、A/R 肿瘤坏死因子α(TNF-α)10 ng/ml组(B组)、地氟醚1.0MAC预处理 A/R组(C组)、地氟醚1.0 MAC预处理 A/R TNF-α 10 ng/ml组(D组)和空白对照组(E组).应用Real-time PCR、Western Blot方法检测各组细胞中Bcl-2及Bax mRNA和蛋白水平.结果 Real-time PCR和Western Blot结果提示,与E组相比,A、B组Bcl-2表达降低,Bax表达升高(P<0.05或P<0.01).经地氟醚预处理后,C、D组细胞较相应未经预处理的A、B组Bcl-2表达增加.Bax表达降低(P<0.05或P<0.01).结论 地氟醚预处理可通过调节Bcl-2及Bax的表达来抑制缺氧/复氧所引起的内皮细胞凋亡.     

康莱特诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2、Caspase-8表达影响的研究

目的 观察康莱特(Zang-Lai-Te)对HepG2细胞调亡及其对Bcl-2和Caspase-8表达的影响.方法 将不同浓度的康莱特作用于人肝癌细胞HepG2,并于12、24、48 h后收集HepG2细胞.同时设立空白对照组(未加康莱特组).流式细胞术检测各实验组及对照组HepG2细胞的凋亡率,并检测Bel-2及Caspase-8的表达量.结果 康莱特能明显诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,随时间延长凋亡率增加,并可明显增加Caslmae-8的表达量,而对Bel-2的表达影响不大.结论 康莱特可能通过调节Caapaae-8的表达来诱导HepG2细胞的凋亡.     

丁螺环酮对大鼠局灶性脑挫裂伤损伤周围区域神经细胞凋亡的研究

目的探讨5-HT1A受体激动剂丁螺环酮对大鼠局灶性脑挫裂伤(Controlled cortical impact injury,CCII)损伤周围区域神经凋亡的影响。方法 119只大鼠随机分为5组,A:空白对照组;B:空白对照+丁螺环酮组;C:假手术组;D:局灶性脑挫裂伤组+NS对照组;E:局灶性挫裂伤+丁螺环酮治疗组。参照改良Feeney's自由落体硬膜外撞击法制作局灶性脑挫裂伤模型,伤后1小时予以腹腔注射丁螺环酮(0.3mg/Kg)或等体积生理盐水(Normal saline,NS),在规定时间点,灌注取脑、石蜡包埋、切片,HE染色观察损伤周围区域皮质病理表现;免疫组化检测损伤灶周围皮层脑组织Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达;TUNEL法检测损伤皮层凋亡细胞。结果 A、B、C组各指标阳性表现很弱,各指标没有明显的差异(P0.05);D、E组各时间点各指标与A、B、C组比较有明显差异(P0.01);D、E组之间各时间点各指标比较也有明显的统计学意义(P0.05或P0.01)。结论丁螺环酮对大鼠局灶性脑损伤后损伤灶周围皮层的神经细胞凋亡具有抑制作用。     

膀胱移行细胞癌组织中Caspase-3和Bcl—2蛋白的表达及其意义

目的：探讨Caspase3和Bcl2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其与病理分级和临床分期的关系。方法：采用免疫组化SABC法并结合图像分析方法检测32例膀胱移行细胞癌和10例膀胱正常组织中Caspase3和Bcl-2蛋白的表达。结果：Caspase-3和Bcl-2两种蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达与正常膀胱组织之间都有显著性差异（P〈0．05）。Caspase-3与病理分级和临床分期均无显著性差异（P〉0．05）,Bcl-2与病理分级和临床分期均无显著性差异（P〉0．05）,Caspase-3和Bcl-2两者之间呈负相关（FS=-0．358,P〈0．05）。结论：在膀胱癌组织中Caspase3的表达降低和Bcl-2的表达升高可能与膀胱癌的发生发展有关。     

放射治疗对小鼠肾癌细胞凋亡和Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:观察放射治疗对BALB/c小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:建立BALB/c小鼠的肾癌细胞移植瘤放射治疗模型;HE染色测定肿瘤细胞死亡面积,采用免疫印迹法(western blot法)检测肿瘤组织的凋亡相关蛋白表达.结果:放疗组小鼠移植瘤生长速度较肿瘤对照组明显减慢.放疗组小鼠肿瘤组织中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调.结论:经放射治疗后,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,可能与放疗引发肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达变化相关.     

门静脉阻断及复流对小肠黏膜细胞凋亡及肝功能的影响

目的 探讨门静脉阻断不同时间对肝功能影响及复流后对小肠黏膜细胞损伤的变化.方法 健康成年日本大耳白兔24只,随机分为一个对照组A和二个实验组(以门静脉阻断30,45 min分别标为B、C组),每组8只.各实验组在术前1 h及按上述预定阻断的时间、解除阻断后30,60 min各取腔静脉血2 ml;对照组在相应时间段也各取腔静脉系统血1次.测定各血标本丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)的变化并予以比较分析.阻断后开放复流2 h,取　回肠肠段作连续切片,分别作HE染色和TUNEL、Bel-2、Bax免疫组化染色,观察其小肠黏膜损伤情况.细胞凋亡的变化以及Bcl-2、Bax表达.结果 A组在不同时间段ALT、AsT测定结果 均无显著性差异,对照组与之在相同时间段该二项指标的比较,B组阻断30 min时无显著性差异,而在复流后明显升高;C组阻断45 min时已明显升高,复流后再升高.实验组Bcl-2表达下调,Bax表达增加,凋亡指数上升.结论 门静脉阻断时间以30 min较安全.但复流有再灌注损伤;其对小肠黏膜细胞损伤表现以凋亡为主,且凋亡指数随阻断时间增加而上升.     

缺血后处理对鼠肝缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤后早期肝组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,并探讨其肝保护的机制。方法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,54只雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理组（IPC组）。以缺血再灌注前反复多次的短暂预再灌注及停灌注作为后处理。分别于再灌注后1、3、6h测定血清肝酶,SP免疫组化法测定肝脏Bcl-2和Bax表达水平,TUNEL法检测肝组织中凋亡细胞。结果与SO组相比,IR组肝酶活性升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高并可见明显的细胞凋亡;而IPC组同IR组相比,肝酶活性降低,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,凋亡指数（AI）下降,差异均有统计学意义。结论缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用,可通过促进Bcl-2表达及抑制Bax表达而拮抗肝细胞凋亡,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

高渗和低渗造影剂对人肾小管上皮细胞的毒性作用

目的 比较高渗造影剂（HOCM，泛影葡胺）和低渗造影剂（LOCM，欧乃派克）对人肾小管上皮细胞的毒性，探讨Bax／Bcl-2，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3在造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 以HKC细胞株为研究对象，实验分为7组：HOCM1组（111mgI／ml），HOCM2组（74mgI／m1），LOCMl组（111mgI／m1），LOCM2组（74mgI／ml），甘露醇高渗对照组，甘露醇低渗对照组，培养基对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验和乳酸脱氢酶（LDH）检测造影剂对体外培养HKC细胞的毒性作用。采用Hoechst染色、TUNEL染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、电镜和流式细胞仪DNA分析方法观察造影剂对HKC细胞凋亡的作用。采用Westem印迹方法检测Bax和Bcl-2蛋白含量的变化。采用荧光比色法检测caspase-3活性。结果 HOCM和LOCM组培养液中LDH水平较对照组显著增高（P〈0．05），细胞活力较对照组显著降低（P〈0．05），且与渗透浓度，作用时间及碘离子浓度有关。HOCM可诱导肾小管上皮细胞凋亡，且明显高于甘露醇高渗对照（P〈0．05）。LOCM在本实验剂量不能诱导肾小管上皮细胞凋亡。HOCM在诱导HKC细胞凋亡时伴随有Bax、Bcl-2表达的上调，caspase-3活性升高。结论 HOCM和LOCM对肾小管上皮细胞均有毒性作用，LOCM的毒性作用明显小于HOCM。HOCM可诱导人肾小管上皮细胞凋亡且与高渗及碘离子浓度有关。Bax／Bcl-2、caspase-3可能参与了造影剂诱导人肾小管上皮细胞凋亡的调控。