肌腱愈合早期的细胞凋亡和增殖及其分子机制变化

目的 探讨肌腱损伤后愈合早期细胞凋亡和增殖及相关控制和调控因子的变化.方法 采用15只来亨鸡,横断舣侧长趾浅、深屈肌腱,后行改良Kessler法修复.分别于术后3、7、14和28 d取趾深屈肌腱,以6根正常深屈肌腱作为0d对照组.通过TUNEL法榆测腱细胞凋亡,免疫荧光化学法检测增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡抑制蛋白bcl-2的表达,显微镜下计数荧光阳性细胞并统计分析,同时切片行苏木素染色观察组织反应和计数细胞总数.结果 (1)肌腱术后3、7、14、28 d细胞凋亡均显著高于0 d对照组(P＜0.05),其中腱内膜区3 d凋亡细胞数最多,14 d出现明显下降;而外膜区术后各时间点之间差异无统计学意义.(2)术后7 d细胞的PCNA蛋白表达较0 d对照组显著上升(P＜0.05),14 d达到高峰,28 d和正常水平差异无统计学意义.(3)bcl-2的变化趋势与PCNA相同.(4)组织炎症反应术后1周内最明显,14 d和28 d基本消失.结论 肌腱损伤3 d时细胞大量凋亡,增殖细胞很少;细胞增殖在损伤14 d时达到高峰,凋亡下降.bcl-2表达在14 d时达高峰,28 d时降至正常水平.     

大鼠烟雾吸入伤后肺表面活性物质磷脂组分含量的变化…

为探讨烟雾吸入后肺表面活性物质（ＰＳ）磷脂组分含量的变化和可能机理及其与ＰＳ活性抑制和肺功能损害的关系，采用大鼠烟雾吸入伤模型，分别检测了正常对照及致伤２，６，１２和２４小时大鼠静态肺顺应性（Ｃｓｔ）支气管肺泡灌洗液（ＰＡＬＦ）表面张力活性，ＢＡＬＦ和肺匀浆总磷脂（ＴＰＬ），磷脂酰胆碱（ＰＣ），磷脂酰肌醇（ＰＩ），磷脂酰丝氨酸（Ｐｈｓ）磷脂酰乙醇（ＰＥ）含量，ＢＡＬＦ和肺匀浆中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２     

胰腺癌组织中细胞凋亡与增殖相关性的研究

目的　通过对胰腺癌组织中细胞凋亡与增殖相关性的研究 ,探讨其在胰腺癌发生发展中的作用。方法　采用原位末端标记、增殖细胞核抗原免疫组织化学染色和HE染色的方法对 32例胰腺癌和 14例慢性胰腺炎组织中细胞凋亡指数 (AI)、增殖指数 (PI)和分裂细胞指数 (MI)进行检测。结果　胰腺癌组织中的AI(3.37± 2 .38)、PI(46 .6 8± 2 .2 9)、MI(0 .31± 0 .12 )均明显高于慢性胰腺炎(0 .5 1± 0 .2 3、5 .0 8± 2 .82、0 .0 6± 0 .0 3,P <0 .0 0 1) ,癌组织的PI/AI(2 1.16± 17.44 )高于慢性胰腺炎(9 .6 0± 2 .15 ,P <0 .0 5 ) ,癌组织中AI与PI呈负相关 ,随肿瘤进展 ,PI/AI值增大。结论　细胞增殖增多、细胞凋亡相对减少 ,共同促进胰腺癌的发生发展。     

烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶通路的变化

目的 了解烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及炎性细胞因子含量的变化,探讨其损伤机制. 方法建立密闭舱内烟雾吸入性损伤模型,将30只SD大鼠分为烟雾吸入性损伤后1、6、24、72 h及7 d组,另设正常对照组(6只).取各组大鼠肺组织行病理学观察,检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,用蛋白质印迹法检测肺组织p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及各酶磷酸化水平.收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),检测TNF-α、MIP-2、IL-1β含量并行粒细胞分类、计数. 结果烟雾吸入使大鼠产生急性肺损伤样病理改变.伤后1 h组大鼠肺组织及BALF中TNF-α和IL-1β含量均高于正常对照组(P<0.01).各组肺组织MIP-2水平与正常对照组接近(P>0.05),伤后1 h组BALF中MIP-2水平高于正常对照组(P<0.01).各致伤组p38MAPK、ERK1/2、JNK水平接近正常对照组,但此3种酶的磷酸化水平在伤后不同时相组有高表达.伤后1 h组大鼠BALF粒细胞总数为(0.36±0.08)×106个/L,较正常对照组(0.61±0.09)×106个/L明显减少(P<0.05),伤后7 d组粒细胞总数[(1.71±0.67)×106个/L]却高于正常对照组(P<0.05).伤后6 h～7 d组中性粒细胞数多于正常对照组(P<0.05).伤后1 h组巨噬细胞数少于正常对照组(P<0.05),但6 h～7 d组逐渐增多.各组大鼠淋巴细胞数量接近(P>0.05).结论 密闭舱室内非金属材料燃烧释放的毒性气体能诱导肺组织产生明显的炎性反应,激活细胞MAPK通路中重要激酶的表达,这可能是毒性混合气体导致肺损伤的重要机制之一.     

阴囊升温对大鼠睾丸生精细胞凋亡及增殖细胞核抗原表达的影响

目的　研究阴囊升温对大鼠睾丸生精细胞凋亡及增殖细胞核抗原 ( PCNA)表达的影响 ,探讨其在升温引起生精细胞变化中的意义。　方法　应用原位末端标记( TUNEL )法和免疫组化法 ,检测大鼠睾丸局部升温至 43℃、3 0 min后 ,经 0 .5、1、3、6、1 0和 50 d观察生精细胞凋亡和 PCNA表达情况。　结果　大鼠睾丸局部升温至 43℃、3 0min后生精上皮受到损伤 ,生精细胞凋亡增加 ( P<0 .0 1 ) ,生精细胞 PCNA表达下降( 0 .5～ 1 0 d组 P<0 .0 1 ,50 d组 P<0 .0 5)。　结论　 43℃、3 0 min作用后生精细胞 PCNA表达与细胞凋亡呈负相关 ,联合检测两者对评估热作用后生精功能的变化有重要意义     

颌下腺缺血再灌注后细胞凋亡与增殖的研究

我们应用几种形态学方法观察大鼠颌下腺缺血及再灌注不同时相上皮细胞的凋亡与增殖特征,以揭示缺血再灌注颌下腺组织损伤与修复过程中细胞凋亡和增殖与颌下腺上皮细胞丧失的关系.     

胃癌组织的细胞凋亡和增殖与其临床分期的关系研究

目的探讨胃癌组织中细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达与胃癌临床分期的关系。方法利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色法,检测40例手术切除的胃癌标本中组织细胞的凋亡指数(AI)及增殖指数(PI),分析两者及其比例与胃癌TNM分期的关系。结果胃癌组织中细胞凋亡指数和增殖指数分别为(4.3±1.2)％和(49.8±15.9)％,凋亡/增殖比率为0.11±0.07,与癌周正常黏膜组织比较,差异有显著性意义(P<0.01);随着TNM分期的进展,胃癌细胞的凋亡指数降低,增殖指数升高,凋亡/增殖比率则逐渐下降,其差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论细胞凋亡的减少和细胞增殖的增多与胃癌的发生发展有明显的关系,两者及其比率可作为进展期胃癌的预后监测指标之一。     

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目的 探讨大肠癌从大肠腺瘤伴轻度不典型增生到重度不典型增生到腺癌发展过程中肿瘤血管生成、细胞增殖、细胞凋亡的变化及其内在联系。方法 应用免疫组化方法测定增殖细胞核抗原(PCNA)和微血管密度(MVD)，用TUNEL法测定细胞凋亡。结果 (1)从腺瘤到腺癌的发展过程中，细胞增殖水平逐渐增高，细胞凋亡逐渐减少，MVD逐渐增多。而且腺瘤伴轻度不典型增生的肿瘤微血管与腺瘤伴重度不典型增生相比不仅形态上有差异，在数量差异也有显著性。(2)轻度不典型增生腺瘤PCNA与AI呈正相关性。(3)将所有大肠肿瘤作为一组分析，发现MVD与AI具有负相关性。结论 (1)血管生成抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞增殖。(2)血管生成开关可能是在腺瘤伴轻度不典型增生向重度不典型增生和腺癌的转化过程中启动的。     

N-乙酰半胱氨酸对烟雾吸入性肺损伤氧化应激的影响

目的　研究N -乙酰半胱氨酸 (NAC)对烟雾吸入性肺损伤氧化应激及抗氧化能力的影响。　方法　采用烟雾吸入性肺损伤大鼠模型 ,检测吸入伤后肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞数(WBC)、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)活性、过氧化氢 (H2 O2 )含量、谷胱甘肽 (GSH)含量及总抗氧化能力(TAO)。　结果　NAC治疗可显著降低吸入伤后BALF中WBC数 ,降低肺组织MPO活性及H2 O2 含量 ,并显著提高肺组织GSH含量及TAO水平。　结论　NAC治疗可减轻吸入伤后肺脏氧化应激程度 ,提高肺脏抗氧化应激能力     

烟雾吸入性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响

目的 探讨烟雾吸人性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响。方法 选用54只Wistar大鼠，取其中6只作为正常对照组，其余48只制成烟雾吸人伤模型，作为吸人伤组。吸人伤组分别于致伤后2、6、12、24h及2、3、4、5d行支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞。观察(1)肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能的动态变化；(2)利用髓过氧化物酶(MPO)染色法观察肺泡巨噬细胞的染色阳性率；(3)利用流式细胞仪观察支气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡的动态变化。结果 (1)烟雾吸人伤早期(2～6h)肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能受损，吞噬率下降，12h后逐渐恢复正常。(2)肺泡巨噬细胞MPO染色阳性率在吸人伤后逐渐升高，24h达峰值，2～5d逐渐下降。(3)支气管肺泡灌洗液中细胞凋亡率在3．02％～12．95％之间，以伤后24h凋亡率最高。结论 气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡增加，中性粒细胞凋亡及肺泡巨噬细胞吞噬凋亡细胞参与了烟雾吸人伤大鼠恢复期肺内炎症消散的过程。     

家兔烟雾吸入性损伤早期肺表面活性物质存在形式的改变及意义

目的　观察肺表面活性物质 (PS)存在形式 (大聚体和小聚体 )的改变对吸入性损伤早期PS活性下降的影响。　方法　将家兔随机分为烟雾吸入性损伤前及伤后 0 .5、2 .0、6 .0、1 2 .0h共 5组 ,每组 8只。收集各组支气管肺泡灌洗液 ,离心后分别留取上清液 (小聚体 )和沉淀物 (大聚体 ) ,测定PS组织成分中总磷脂、磷脂酰胆碱、总蛋白、白蛋白在上述两种形式中的含量。　结果　伤前组家兔小聚体中总磷脂、磷脂酰胆碱、总蛋白、白蛋白含量及磷脂酰胆碱占总磷脂的百分含量分别为 (2 .2 3± 0 .4 0 )、(1 .5 4± 0 .1 1 )、(1 6 .6 7± 1 .34)、(3.6 5± 0 .1 5 )g/L和 (77.2± 3.7) %,伤后 6h组的小聚体中以上指标各为 (3 1 5± 0 .30 )、(1 .77± 0 .0 8)、(1 0 6 .5 9± 5 .5 0 )、(1 1 .2 1± 0 .92 )g/L和 (5 7.2± 3.5 ) %。与伤前组比较 ,伤后各组PS组分在大聚体中差异无显著性意义 (P >0.0 5 )。在小聚体中 ,白蛋白、总蛋白含量在较伤前显著增多 (P <0.0 1),并随时间的延长呈上升趋势 ;磷脂酰胆碱占总磷脂的百分含量随时间延长呈下降趋势。　结论　小聚体与大聚体之间的比值显著增高 ,可能是引起吸入性损伤早期PS活性下降并导致急性肺损伤的一个重要因素。     

Expression profile of microRNAs in bronchoalveolar lavage fluid of rats as predictors for smoke inhalation injury

Smoke inhalation injury (SII) is an independent risk factor for morbidity and mortality in patients with severe burns, however, the underlying mechanisms of SII are still not fully understood. In our study, we established an advanced rat model of SII based on the previous work, and explored the dynamic changes of pathophysiology and inflammatory factors during 28 days post SII. We also measured the different expressions of miRNAs in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) between SII and normal control rats by miRNA microarray. At 1 day after smoke inhalation, the histopathological results exhibited inflammatory exudates in the lung tissue with significant edema. As time went on, the lung injuries gradually appeared at alveolar septum thickening and alveolar collapse, which suggested that it further induced damage to lung parenchyma by smoke inhalation. Particularly, the collagen deposition indicating pulmonary fibrosis happened at 28 days post-injury. Plasma IL-6 and TNF-a were significantly increased after 1 day of smoke inhalation. Plasma IL-10, BALF TNF-α and IL-10 were significantly increased after 2 days of smoke inhalation. By extending the observation time, the levels of plasma IL-6, BALF TNF-a and IL-10 appeared a second peak again after 14 days of injury. Compared with the normal control group, there were 23 upregulated miRNAs and 2 downregulated miRNAs in BALF of SII group at 1 day post-injury. RT-qPCR validation assay confirmed that the changes of miR-34c-5p, miR-92b-3p, miR-205, miR-34b-3p, miR-92a-3p, let-7b-5p, let-7c-5p in BALF were consistent with the conclusion of the miRNA microarray. In summary, we showed the dynamic changes of pathologic changes and inflammatory factors in rats with SII, and a subset of seven miRNAs changed in BALF after SII which may be used for diagnosis and potential therapeutic targets.     

N-乙酰半胱氨酸对吸入性损伤肺表面活性物质结合蛋白A的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对烟雾吸入性损伤肺表面活性物质结合蛋白A(SPA)表达及功能活性的影响。方法采用烟雾吸人性损伤的大鼠模型，观察NAC治疗后SPA mRNA表达情况，并检测静态肺顺应性、肺泡灌洗液表面张力及Ⅱ型细胞板层体形态。结果 经NAC治疗后SPA mRNA表达增强，静态肺顺应性增加，肺泡灌洗液表面张力特征恢复正常，Ⅱ型细胞板层体恢复至正常形态。结论 NAC治疗可促进烟雾吸入伤后SPA mRNA表达，并对SPA相关功能活性具有改善作用。     

诱导型一氧化氮合酶抑制剂对胃癌MFC细胞增殖与凋亡的影响

目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)选择性抑制剂氨基胍(AG)对鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响。方法将40只MFC胃癌皮下接种模型小鼠随机分成4组对照组(等体积生理盐水)、丝裂霉素组(MMC,每周注射2次,每次0.7mg/kg)、AG组(150mg·kg-1·d-1)和MMC加AG组。均采用腹腔内注射给药法,持续14d;停药后24h处死动物。应用Greiss反应法测定荷瘤动物血浆中一氧化氮(NO)量;剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率;应用免疫组织化学法检测肿瘤细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果AG显著降低荷瘤小鼠血浆中NO的合成,明显抑制肿瘤的生长,抑瘤率为47.1%,与对照组比较,P<0.01。AG组的肿瘤细胞PCNA表达值为25.2±3.6,MMC加AG组为22.0±3.6,明显低于对照组的82.0±3.6(P<0.01);但凋亡指数未见下降,电镜下亦未见典型的细胞凋亡形态学变化。结论AG通过抑制肿瘤组织中NO的产生而抑制肿瘤生长,但并未促进肿瘤细胞凋亡。     

脱氧氟尿苷诱导胃腺癌细胞凋亡的临床研究

目的　了解术前化疗对胃腺癌细胞凋亡的影响。方法　采用抽签法术前随机分为口服脱氧氟尿苷(5′- DFUR)组(18例)、静脉输注5- FU CF组(16例)及对照组(2 0例)。化疗结束后第1～2天手术。采用免疫组织化学及TUNEL法检测癌细胞增殖指数(PI)及凋亡细胞指数(AI)。结果　PI在5′-DFUR组(40±13)、5 - FU CF组(41±15 )明显低于对照组(5 8±16 ) ,差异有统计学意义(P =0 . 0 0 0 ) ;AI在5′- DFUR组(14±9)、5 - FU CF组(14±10 )明显高于对照组(7±7) ,差异有统计学意义(P =0 . 0 17)。4 4例获得随访。总的0 . 5、1、2年生存率分别为93%、86 %、70 % ,0. 5、1、2年无瘤生存率分别为89%、77%、6 7%。3组术后生存时间差异无统计学意义。结论　术前3～5d短程口服5′- DFUR化疗可诱导胃腺癌细胞凋亡,降低癌细胞增殖指数,但不能改善术后生存情况。