2018-2019年克拉玛依市新甲型H1N1流感病毒NA基因分析

目的 分析新疆克拉玛依市新甲型H1N1流感病毒NA基因特征及变异情况.方法 采集2018年1月-2019年12月哨点医院流感样病例咽拭子,经MDCK细胞完成流感病毒分离后,随机抽取26株分离株测定其NA基因序列,并与疫苗株进行序列比对和分析.结果 与疫苗株A/Michigan/45/2015 NA基因核苷酸相比,2018年分离株与其同源性为98.56％～99.28％,2019年分离株与其同源性为98.35％～98.71％;26株分离株与同期国内其他地区代表株和疫苗株A/Michigan/45/2015在同一进化分支;分离株T180699较疫苗株A/Michigan/45/2015少1个糖基化位点(42～44位),分离株T190041发生了I223V位点变异.结论 相对于疫苗株A/Michigan/45/2015,2018-2019年克拉玛依市新甲型H1N1流感病毒NA基因抗原决定簇、糖基化位点和耐药相关位点已有改变;应继续加强流感监测,密切关注其基因变异情况.     

甲型流感病毒株H1N1(09pdm)的分离及HA和NA基因分析北大核心CSCD

目的对成都某部人感染甲型流感病毒进行分离鉴定和基因突变分析。方法采集甲型流感患者咽拭子标本,通过MDCK细胞分离病毒毒株;采用免疫荧光法鉴定其感染细胞能力,采用基因分型特异性引物鉴定病毒亚型,PCR扩增血凝素基因(HA)和神经氨酸酶基因(NA)后测序,与NCBI数据库在线比对并利用MEGA软件构建系统发育进化树,分析突变位点。结果从甲型流感患者咽拭子标本中分离出1株流感病毒,经型特异性引物PCR鉴定为H1N1(09pdm)亚型,该毒株在37℃时对细胞致病力较强。免疫荧光检测到分离毒株感染细胞内甲型流感病毒核蛋白(NP)高表达,甲型流感病毒NP蛋白在细胞核和细胞质中均有大量分布。利用反转录PCR和测序获得该毒株HA和NA全长基因序列。在线比对及系统发育树分析显示,该毒株HA和NA序列与2017-2018流感季其他国家流行株同源性均>99%。对HA氨基酸突变位点进行分析,其序列的155位点存在组氨酸-酪氨酸(H-Y)点突变,该点突变也发生Influenza A/Hawaii/24/2018(H1N1)(MH245873)、Influenza A/North Carolina/19/2018(H1N1)(MH245873)和In-fluenza A/Missouri/51/2017(H1N1)(MH083792)毒株上。NA氨基酸序列与近期流行的毒株均相同。结论本起流感病毒株H1N1(09pdm)的HA、NA基因序列与同期其他国家流行株高度相似,但在HA氨基酸序列的155位点存在一个组氨酸-酪氨酸的点突变,其意义尚不清楚。     

2017-2019年呼和浩特市甲型A(H1N1)pdm09流感病毒基因特征分析

目的 了解呼和浩特市甲型A(H1N1)pdm09流感病毒遗传进化特征及抗原位点、糖基化位点和耐药位点的变异情况,为流感防控提供科学依据。方法 采集2017-2019年呼和浩特市3家哨点医院的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行核酸检测,阳性样本通过MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离。随机抽取15株甲型A(H1N1)pdm09流感毒株进行基因测序分析。采用MEGA7.0.14软件、DNASTAR7.0.1软件和NetNGlyc1.0软件进行基因进化树分析、核苷酸同源性分析和糖基化位点分析。结果 呼和浩特市2017-2019年15株甲型A(H1N1)pdm09分离株与疫苗株A/Brisbane/02/2018和A/Michigan/45/2015共同属于6B.1分支。各年度分离株与疫苗株A/Brisbane/02/2018的组间遗传距离分别为0.004、0.011和0.013。相较于疫苗株A/California/07/2009和A/Michigan/45/2015,2017年起甲型A(H1N1)pdm09病毒抗原位点变异较大,但与疫苗株A/Brisbane/02/2018相比并未发生抗原漂移现...     

2018-2020年山东省甲型H1N1流感病毒NA基因变异和耐药分析北大核心CSCD

目的监测山东省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因变化及其对神经氨酸酶抑制剂(NAIs)的耐药情况。方法从山东省2018-2020流感监测年度中选取20株甲型H1N1流感病毒,提取病毒核酸后对NA基因进行测序,利用生物信息学软件分析NA基因上与耐药有关的氨基酸位点及其基因变异情况。利用荧光法对选取的流感病毒进行生物学耐药试验,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的敏感性。结果选取的20株甲型H1N1流感病毒中有1株奥司他韦耐药(IC50值为233.8nmol/L),其余19株流感病毒对奥司他韦均敏感,IC50平均数为0.34nmol/L(0.14~0.81 nmol/L)。20株甲型H1N1流感病毒均对扎那米韦敏感,对扎那米韦IC50平均数为0.31nmol/L(0.13~0.69nmol/L)。NA基因测序显示奥司他韦耐药株存在H275Y基因变异。山东省近两个监测年度甲型H1N1流感病毒同源性较高,在进化树上交叉分布,与疫苗株亲缘关系较近,且未出现处于NA蛋白抗原决定簇区域内的变异。结论山东地区甲型H1N1流感病毒对NAIs耐药比例较低,临床上可继续使用此类药物,并需加强耐药性监测。     

甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析

目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。     

甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒血凝素基因比较分析

目的分析泰安市2008～2009年度季节性流感与2009年度甲型H1N1流感病原学检测结果 ,比较季节性H1N1与甲型H1N1血凝素基因变异情况。方法选择国家级流感监测哨点医院以及暴发疫情的疫点,采集流感样病例的鼻咽拭子标本,通过RealtimePCR进行病毒检测,用MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增血凝素HA1片段的基因并测序,利用生物信息学进行序列分析。结果 2008～2009年共检测鼻咽拭子标本283份,分离出流感病毒33株,分离阳性率为11.67%,其中季节性H1N1亚型31株。2009年5月1日～12月31日,检测鼻咽拭子标本996份,流感核酸检测阳性417份,阳性率为41.86%,其中甲型H1N1337份,季节性H1N1亚型1份。6株季节性H1N1病毒均在多个氨基酸位点上发生变异,与疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)比较,有11个位点发生了突变,其中5个位点位于抗原决定簇上;测序成功的6株甲型H1N1病毒在多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)比较,有6个位点发生突变,其中1个位点位于抗原决定簇的B区。结论 2008～2009年度季节性H1N1为优势株,甲流暴发后,甲型H1N1成为绝对优势毒株。季节性H1N1分离株有多处氨基酸替换,抗原决定簇B区变异频繁;甲型H1N1病毒分离株的基因有变异,但关键位点第222位仍为D(天冬氨酸),与疫苗株相比抗原决定簇的关键位点变化不大。     

新甲型H1N1流感病毒与流感大流行防治研究进展

由于甲型流感病毒基因高度变异的特点,导致其对不同种属宿主亲和力、毒力、免疫原性、抗药性不断发生变化,全球新型流感大流行的风险时刻存在.因此,应加强流感特别是重症流感发病机制和有效干预措施研究,从疫苗研制、开发新型抗病毒药、加强综合治疗,特别是调节宿主免疫反应等多个方面着手,为应对可能爆发的流感大流行提供对策.     

2019-2020年海南省A(H1N1)pdm09 流感病毒基因特性分析

目的 分析海南省A(H1N1) pdm09亚型流感病毒的抗原性和基因特性,了解病毒的变异情况,为海南省A(H1N1)pdm09亚型流感病毒的防控提供依据.方法 选取14株2019-2020年海南省流感监测网络实验室分离到的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒进行基因序列测定,测序结果用MEGA 10.1.8和DNAST...     

甲型H1N1流感病毒基因特征及耐药性研究

目的研究甲型H1N1流感病毒的基因特征和变化规律,为流感疫苗评价提供依据。方法选取2009年6月-2013年4月本院分离出的15株甲型H1N1病毒分离株,提取病毒RNA进行反转录。采用PCR方法扩增15株甲型H1N1流感病毒HA和NA全基因并进行测序分析。利用软件Bioedit和MEGA软件对序列进行拼接,绘制种系发生树,采用邻位相临法构建进化树。结果 15株甲型H1N1流感病毒均为低致病性病毒,对神经氨酸酶抑制剂敏感,对金刚烷胺类呈耐药性。实验毒株HA基因序列与国内和国外毒株同源性为99.1%~99.7%。该地区流感毒株抗原变异程度较大,其中毒株HA发生14个氨基酸点位改变,分别为:A215E,D127E,E235K,E374K,G170E,H138R,L161I,I321V,L191I,P83S,R45K,S185T,S203T和V234I。其中第83位和第321位与国内代表株相同,但是与国外代表株不同。NA发生15个氨基酸点位改变,分别为A20V,N44S,V83M,V106I,E128G,H144Y,I188T,V241I,S247N,N248D,S334N,N369K,N449K,D451G和G454S。其中所有毒株均发生V106I和S247N的变化。结论通过对HA和NA基因序列对比分析,该地区流感疫苗对当地居民有保护作用,但是毒株与疫苗株间发生相对抗原漂移,需要进一步观察毒株变异情况。     

甲型H1N1流感病毒血凝素的B细胞抗原表位预测

目的预测甲型H1N1流感病毒血凝素可能的B细胞抗原表位。方法以甲型流感病毒血凝素的氨基酸序列一级结构为基础,用生物信息学手段预测血凝素氨基酸序列的二级结构并分析其序列的亲水性指数、柔韧性指数、可及性参数、极性参数以及抗原指数,推测B细胞抗原表位的可能位置。结果经综合各种单参数预测,甲型H1N1流感病毒血凝素氨基酸序列的98127、172189、498511肽段或附近可能存在B细胞抗原表位。结论预测B细胞抗原表位对甲型H1N1流感病毒的疫苗研制及其他相关研究奠定了一定的基础。     

福建省2009年甲型H1N1流感病毒NA基因特征及对达菲的耐药性

目的监测福建省甲型H1N1流感病毒NA基因的变化以及对达菲的耐药情况,为临床诊疗和疾病控制提供参考依据。方法从福建省流感监测网络中随机选取23株甲型H1N1流感病毒,经病毒核酸提取和一步法RT-PCR扩增,获得NA基因片段,双向测定核苷酸序列,分析NA基因序列和重要氨基酸位点特征。结果 23株甲型H1N1流感病毒NA片段基因与A/California/07/2009(H1N1)代表株的核苷酸序列进行比较,同源性高达98.1%以上;23株毒株NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸。结论随机选取的23株甲型H1N1流感病毒NA基因片段保持高度同源并且对达菲仍然敏感。随着国内外达菲耐药株的不断出现,应加强耐药性监测,为制定应对甲型H1N1流感流行措施提供参考。     

2010年南充市区居民甲型H1N1流感病毒抗体水平检测

目的 了解南充居民甲型H1N1流感病毒抗体水平.方法 2010年分别于南充市2家三甲医院和中心血站及第三人民医院采集800份血清标本,血清标本经受体破坏酶(RDE)过夜处理,血凝(HA)法检测红细胞凝集抗原,血凝抑制实验方法检测新型甲型H1N1流感病毒抗体水平.结果 2010年800份南充市居民A/H1N1病毒抗体总阳性数124例,阳性率为15.5%;以6-17岁组和18-55岁组阳性率最高,分别为17.50%和15.63%;男女性别比为1.4:1.2家三甲医院阳性率分别为16.25%和18.33%,市中心血站及第三人民医院阳性率分别为13.13%和12.15%.结论 南充市区居民6-55岁是新型甲型H1N1流感病毒感染的高发人群,市内2家三甲医院总阳性率偏高.     

2019年广州市甲型H1N1流感病毒全基因组序列的遗传特征分析

目的 对甲型H1N1流感病毒进行基因组全序列遗传特征分析,为流感的科学防控提供新数据.方法 选取7株2019年广州市甲型H1N1流感病毒进行全基因组序列测定,分析其遗传特征.结果 7株病毒的核苷酸同源性最高为PB2基因(98.8％～99.9％),最低为NA基因(97.3％～99.2％).总体上,不同月份的H1N1流感分...     

2009年广东省新型甲型H1N1流行性感冒病毒神经氨酸酶基因进化分析

目的 探讨2009年广东省新型甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化及NA基因编码蛋白抗原性、酶活性位点、糖基化位点变异情况.方法 从2009年广东省新型甲型H1N1流感患者中分离到病毒毒株共69株,提取病毒总RNA,RT-PCR扩增NA基因,并测序分析;同时从美国国立生物技术信息中心基因库检索获得 52株不同年代、不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用MEGA 4.0软件进行基因进化分析和氨基酸序列分析.结果 2009年广东省新型甲型H1N1流感病毒NA基因与禽H5N1流感病毒同源性较高,为87.1%,潜在抗原位点氨基酸分布相同;所有毒株的酶活性中心位点高度保守;具有8个糖基化位点,其中5个位点有不同程度的氨基酸替换,但与2001年禽H5N1毒株的糖基化位点的氨基酸相同.结论 2009年广东省新型甲型H1N1流感病毒NA基因与禽H5N1流感病毒高度同源,与NA抑制剂的特异性结合位点未发生变化.     

甲型H1N1流感病毒长春株的分离鉴定及其分子进化分析

目的分离目前流行的甲型H1N1流感病毒,对其进行基因序列测定和遗传变异分析,为研究病毒进化、致病性、流行规律及防治提供科学依据。方法采用MDCK细胞、SPF鸡胚和RT-PCR方法对甲型H1N1流感病毒进行分离、鉴定,并进行核苷酸序列测定和分子进化分析。结果从疑似甲型H1N1流感临床标本中分离得到1株甲型H1N1流感病毒,命名为长春株(A/Changchun/01/2009(H1N1)),基因序列及分子进化分析显示该毒株与2009年大流行的甲型H1N1毒株高度同源,属于流行分支2。相对流行分支1(北美流行株A/California/07/2009(H1N1)),PB2、HA、NA分别出现2个、7个和4个氨基酸的差异。结论甲型H1N1流感病毒长春株与2009年大流行的甲型H1N1毒株高度同源,属于流行分支2,与流行分支1相比存在变异。     

58例甲型H1N1流感病毒性肺炎临床分析

目的探讨H1N1流感病毒性肺炎的临床特点、治疗以及预后。方法回顾性分析我院2009年10月31日-2010年1月15日58例H1N1流感病毒性肺炎的临床资料,并对重症病例、发病年龄、基础病、呼吸道症状、影像学资料、治疗及预后进行分析。结果 58例患者临床特点为：高热,咳白色粘液痰,可引起呼吸衰竭,全胸片或胸部CT示肺部斑片状致密影或磨玻璃影。治疗以奥司他韦,糖皮质激素为主,必要时予机械通气,辅以营养支持等,其中20例符合重症肺炎的诊断结果,4例并发ARDS,4例并发多脏器功能障碍,3例死亡。结论及早诊断和治疗,是提高治愈率的关键。     

甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点分析

目的通过对甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点的分析。方法分析2009年月10月-2010年3月在我院入住的29例甲型H1N1流感合并肺炎患者的临床表现、实验室检查及胸部CT等资料。结果本组病例男性16例,女性13例。3例妊娠,13例合并有基础疾病。所有病例均有流感样前驱症状,呼吸道主要症状为发热、干咳少痰,严重者气短、呼吸困难、咯血。合并细菌感染时咯脓痰。肺部听诊无啰音或少啰音,合并哮喘时有哮鸣音,合并细菌感染时可有湿啰音。实验室检查65%白细胞不高或降低,41%心肌酶升高,58.6%存在低氧血症,35%呼吸衰竭。影像学表现多种多样：65.5%主要为单侧或双侧棉团样、团片样边界模糊高密度渗出影伴肺实变,其内见充气支气管征,病变沿支气管血管束分布。轻症及早期较局限,重症者及晚期病变融合呈双肺多发弥漫性改变。少数呈大叶及小叶性肺炎表现。预后大多良好,病死率6.9%。主要死亡原因为呼吸衰竭及大咯血。结论甲型H1N1流感合并肺炎是以甲型H1N1流感病毒肺炎为主要疾病的多种肺炎构成。甲型H1N1流感病毒肺炎临床表现具有流感病毒肺炎共性特点,其影像学表现有一定特征性。     

重症甲型H1N1流感39例临床分析

新型甲型H1N1流感（简称甲型流感）为急性呼吸道传染病,其病原体是一种新型的甲型H1N1流感病毒,人类对该病毒缺乏免疫力,普遍易感,全球的发病人数及其危重症患者的病死率不断增加。现对我院治愈出院的39例感重症和危重症甲型流患者的临床特点进行回顾性分析。     

2009年北京市老年人甲型H1N1流感流行病学分析

目的 分析2009年北京市老年人感染甲型H1N1流感(甲流)分布特征.方法 采用描述性流行病学研究方法对2009年北京市老年人甲流进行流行特征分析.结果北京市老年人确诊甲流病例321例,确诊发病率为13.2/10万;11、12月份发病最多,占84.7%;地区分布中以近郊区分布最多,占53.0%;通过年龄分布分析发现,85岁以上年龄组发病率最高,为19.2/10万,并随着年龄增长病情有加重趋势(x2=7.24,P＜0.01);病例分型中轻症比例最高,占63.6%,重症和危重症病例占36.4%;轻、重、危重病例之间的体质指数(BMI)差异无统计学意义(x2=8.14,P=0.52);甲流病情有随着基础性疾病加重的趋势,病情程度与基础性疾病的数量有关(x2=123.0,P＜0.01).结论 北京市老年人甲流发病率较高,危重症比例较大,应是重点防控的人群之一.     

甲型H1N1流感病毒的发病机制

甲型H1N1流感病毒概述：研究表明这种病毒基因组由禽流感、猪流感和人流感病毒基因混合而成，可看作是一种杂交体，是一种新型的甲型H1N1流感病毒，它所引起的流感具有高度传染、传播迅速、易流行的特点。甲型H1N1流感患者为主要传染源，甲型H1N1流感主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播，也可通过口腔、鼻腔、眼睛等处黏膜直接或间接接触传播，接触患者的呼吸道分泌物、体液和被病毒污染的物品亦可能造成传播。