大肠癌组织CD137L的表达及意义

【目的】 检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L mRNA及蛋白的表达情况,探讨其在大肠癌发生进展中的意义&#65377; 【方法】 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及冰冻切片免疫组化的方法检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L的表达情况,并分析其表达情况与各临床因素的相关性&#65377; 【结果】 54例大肠癌组织中CD137L mRNA的相对表达水平为 0.035 ± 0.013,显著高于癌旁组织的0.008 ± 0.005(P < 0.05)&#65377;但在不同性别&#65380;年龄&#65380;肿瘤发生部位&#65380;Dukes分期&#65380;病理分化及血清CEA水平情况下,CD137L mRNA的表达水平无显著性差异(P > 0.05)&#65377;随机抽取8例大肠癌肿瘤组织及3例癌旁组织,进行免疫组化检测,结果显示6例CD137L蛋白呈阳性表达,CD137L表达于肿瘤细胞表面;3例癌旁组织该分子的表达均为阴性&#65377;【结论】 CD137L mRNA在大肠癌组织中高表达,CD137L分子表达于大肠癌肿瘤细胞表面,提示该分子可能在大肠癌的发生进展中发挥作用&#65377;     

可溶性CD137检测及在类风湿性关节炎的临床应用

目的　建立测定可溶性 CD137(s CD137)的酶联免疫吸附测定 (EL ISA)方法 ,研究 s CD137释放与 T细胞活化及CD137表达之间的相关性 ,探讨类风湿性关节炎 (RA)患者血清 s CD137测定的意义。　方法　建立生物素 -亲和素双抗体夹心 EL ISA(BA- EL ISA)方法检测血清 s CD137含量。用不同浓度的 PHA刺激培养人外周血单个核细胞 (PBMC) 3天 ,测定培养上清液中 s CD137水平、T淋巴细胞转化率、PBMC细胞膜上 CD137表达百分率 ,分析 s CD137水平与 T淋巴细胞转化率、CD137表达率之间的相关性 ;分别测定类风湿性关节炎 (RA)活动…     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点。方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达。结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%。结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加。为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础。     

原发性肾病综合征患者治疗前后血及尿IL-8、IL-13水平测定及其临床意义

目的探讨肾病综合征患者治疗前后血清及尿中IL-8、IL-13水平变化及其临床意义.方法采用ELISA法测定25例肾病综合征患者血清及尿中IL-8、IL-13水平并与正常对照进行比较.口服强地松(1mg/kg)8～12w后再次测定血清及尿中IL-8、IL-13水平并与治疗前相比较.结果治疗前血清、尿IL-8水平[(31.08±3.07)pg/ml、(46.22±1.83)pg/ml]较正常对照[(22.99±2.29)pg/ml、(24.61±1.04)pg/ml]显著升高(P＜0.05),血清、尿IL-13水平[(31.05±2.71)pg/ml、(65.80±12.50)pg/ml]较正常对照[(25.61=2.52)pg/ml、(53.5±6.41)pg/ml]显著升高(P＜0.05).治疗后血清、尿IL-8水平[(23.06±2.60)pg/ml、(25.85±4.01)pg/ml]较治疗前显著降低(P＜0.05),血清、尿IL-13水平[(27.40±7.09)pg/ml、(50.31±11.13)pg/ml]较治疗前显著降低(P＜0.05),与正常对照无显著差异.结论肾病综合征患者,血清及尿中IL-8、IL-13水平升高,两者均参与炎症过程,并在疾病的发展中起一定的作用,激素治疗在控制病情的同时,可降低IL-8、IL-13水平,故IL-8、IL-13水平变化一定程度上可提示病情变化,监测治疗效果.     

小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达

目的 克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法 从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶(GST)融合表-达载体pCEX-CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果 以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX-CS,得到重组质粒pGEX-CSCD4、pGEX-CSCD8α和pGEX-CSCD8β。将所获表达载体转化E．coli BL21,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量町占菌体蛋白总量的30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论 成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。     

IL-12刺激肥大细胞IL-13分泌与ERK信号转导通路的关系

目的: 检测IL-12对肥大细胞介质分泌的影响并探讨其可能的信号转导通路。方法：小鼠肥大细胞P815培养后,用不同浓度IL-12激发后收集细胞和上清,上清用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测组胺、IL-6和IL-13的分泌量,P815细胞用细胞激发信号ELISA（CASE）方法检测信号转导通路蛋白ERK和P38磷酸化情况。 结果： 不同浓度IL-12(0、1.0、10.0 和100.0 μg•L^-1)激发后,P815细胞IL-13分泌量较基础分泌量均增加,并且随IL-12浓度增加而增加;而P815细胞IL-6和组胺释放量与基础分泌量比较差异均无显著性。ERK信号转导通路抑制剂PD98059、U0126预处理的经不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内ERK磷酸化百分比较未加抑制剂组均显著降低（P<0.05）;且P815细胞IL-13分泌量较未加抑制剂组亦显著降低（P<0.05）。P38信号转导通路抑制剂SB203580预处理的不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内P38磷酸化百分比与未加抑制剂组比较差异均无显著性;且P815细胞IL-13分泌量与未加抑制剂组比较差异均无显著性。结论：IL-12刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能是通过激活ERK信号转导通路实现的。     

HLA-A2限制性NY-ESO-1b肽段诱导的CD8+ T细胞对稳定表达NY-ESO-1的HepG2肝癌细胞系的杀伤效应

目的:分析体外诱导的NY-ESO-1特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系的杀伤效应,为进一步分析NY-ESO-1蛋白作为疫苗用于治疗HCC的可能性提供实验支持.方法:从HLA-A2阳性的肝癌患者体内分离出外周血单个核细胞,用NY-ESO-1肽段体外诱导特异性杀伤性T淋巴细胞,并通过酶联免疫斑点法分析特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的HCC细胞系HepG2细胞的杀伤效应.结果:转染了NY-ESO-1的HepG2细胞(HLA-A2 )可有效地被NY-ESO-1157-165抗原肽诱导的特异性CD8 T淋巴细胞所识别.效应细胞中大量GrB的释放表明其对稳定转染了NY-ESO-1基因的HepG2细胞有很强的杀伤作用.结论:HepG2细胞中表达的NY-ESO-1蛋白可被此肝癌细胞有效地加工处理,而且HLA-A2限制性的抗原肽NY-ESO-1157-165也可被有效地提呈到细胞表面,从而被效应T细胞所识别.     

IL-36γ促进人CD8+T淋巴细胞细胞因子的分泌

目的: 探讨白细胞介素36γ（IL-36γ）是否能够增强体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌γ干扰素。方法: 经密度梯度离心法从健康人外周血分离获得外周血单个核细胞（PBMC）,经磁珠阳性选择富集纯化CD8⁺T淋巴细胞,分别用CD3单克隆抗体（mAb）+CD28 mAb,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-36γ以及CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12+IL-36γ 4种因子组合刺激培养24 h和72 h。收集细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析分选富集的CD8⁺T淋巴细胞纯度以及γ干扰素的表达;采用实时PCR检测各组细胞IL-36受体（IL-36R）、γ干扰素和颗粒酶B mRNA的表达。结果： 人CD8⁺T淋巴细胞表达IL-36R;各组因子刺激的人CD8⁺T淋巴细胞形态没有明显差异;人CD8+T淋巴细胞经IL-36γ刺激后,γ干扰素、颗粒酶B mRNA表达上调;同时, IL-36γ和IL-12 具有协同刺激CD8⁺T淋巴细胞的作用。结论： IL-36γ能促进体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌细胞因子,并且与IL-12具有协同作用。     

4-1BB(CD137)配体在几种肿瘤细胞株上的表达

目的：研究4—1BBL在几种人肿瘤细胞株上的表达。方法：用RT—PCR及法检测肿瘤细胞内4—lBBL mRNA水平的表达；用流式细胞仪检测肿瘤细胞膜表面4—1BBL的表达。结果：4—1BBL在Jurkat细胞株上高表达(98．97％)，在HL-60和K562上表达较低(分别为24．77％和19．23％)，而在HL-29细胞株上基本不表达(2．13％)。结论：4—1BBL在不同肿瘤细胞株表达水平不同。     

冠心病患者血清TNF-α、IL-1、IL-8、IL-12的表达及临床意义

目的检测冠心病患者血清TNF-α、IL-1、IL-8及IL-12的表达情况,探讨其表达与冠心病不同类型及不同病变程度的关系。方法选取确诊的95例冠心病患者作为观察组,另择同期体检健康成人50例作为对照组,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-1、IL-8及IL-12的含量,观察其在不同疾病类型、不同数量血管病变及不同狭窄程度患者中的表达情况。结果观察组患者血清TNF-α、IL-1、IL-8及IL-12的表达均显著高于对照组（P〈0．01）。不同类型（稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、心肌梗死）、不同数量（单支、双支、三支）血管病变以及不同血管狭窄程度（〈80％、80％～90％、〉90％）患者血清TNF-α、IL-1、IL-8及IL-12的表达不同,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论TNF-α、IL-1、IL-8及IL-12在冠心病息者血清中高表达,且与冠心病患者病变程度相关。     

白细胞介素21受体mRNA的表达与检测对类风湿关节炎患者的临床应用探讨

目的：探讨白细胞介素21受体信使RNA的表达与检测对类风湿关节炎患者的临床应用价值。方法选取2012年3月至2014年4月在三峡大学仁和医院进行检验和治疗的类风湿关节炎患者80例,设为观察组,另外根据一般资料相近原则选择30例健康志愿者相关体检资料作为对照组,根据患者关节功能分为三个等级,分别采样后比较白细胞介素21受体信使 RNA 的表达情况。结果观察组患者IL-21水平为（510．4±66．2） ng／L,明显高于健康对照组的（332．8±30．1） ng／L （t＝13．80,P＜0．05）;三级类风湿性关节炎患者体内 IL-21水平分别为,Ⅰ级（410．5±57．1） ng／L,Ⅱ级（435．8±60．5） ng／L,Ⅲ级及以上（600．8±78．9） ng／L,三个等级比较差异有统计学意义（ F＝14．01,P＜0．05）,其中Ⅱ级与Ⅰ级的差异无统计学意义（t＝1．33,P＞0．05）,Ⅱ级与Ⅲ级及以上患者的差异有统计学意义（t＝8．53,P＜0．05）。结论 IL-21物质参与了类风湿关节炎的发病过程,故该物质的水平可用于疾病的检测,具有广阔的应用前景。     

内皮细胞表达CD137分子介导对T细胞的抑制效应

目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应.方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表达变化;CCK-8试剂盒检测T细胞存活率,并观察用融合蛋白抗-CD137阻断CD137-CD137L共刺激通路后T细胞分泌细胞因子的变化.结果采用细胞共培养后,T细胞分泌IL-2、IL-10和IFN-γ的水平下降,而且CD25、CD69的表达水平降低,T细胞存活率下降,应用抗-CD137单克隆抗体阻断CD137-CD137L相互作用后,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平升高,CD25、CD69的表达上调,T细胞存活率上升.结论活化的内皮细胞诱导表达CD137蛋白分子与活化的T细胞上诱导表达的CD137L相互作用,通过CD137L向T细胞内传递抑制信号,抑制了T细胞合成和分泌细胞因子的功能.表明CD137-CD137L信号通路在内皮细胞与T细胞的信号作用中有着重要的地位.     

hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的研究hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达,探讨CD137L靶向基因治疗的可行性。方法采用RT-PCR法从K562细胞中克隆CD137L全长基因, 将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建的质粒为pcDNA3-hCD137L,用Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后将CD137L再定向插入pBTdel-279中,构建成hTERT启动子调控下CD137L表达载体pBTdel-279-hCD137L,采用酶切法和测序法鉴定。用Fugene6转染试剂盒将两种重组质粒分别瞬时转染人卵巢癌细胞株OVCR3和人胚肺成纤维细胞株HELF,RT-PCR和流式细胞仪检测CD137L的表达。结果测序证实所克隆的CD137L基因序列与GENEBANK中的序列相符。经限制性内切酶酶切,电泳后显示片段插入正确,证实构建成功。pcDNA3-hCD137L转染后OVCR3细胞和HELF细胞均可检测到CD137L的表达,但pBTdel-279-hCD137L转染后仅在OVCR3细胞中检测到其表达,在HELF细胞中无表达。流式细胞显示pBTdel-279-hCD137L转染效率低于pcDNA3-hCD137L。结论hTERT启动子调控下CD137L表达载体构建正确,并可在卵巢癌细胞中较高表达,为探讨靶向基因治疗提供了实验依据,但hTERT启动子活性仍低于CMV启动子     

T细胞表达CD137L分子介导对血管内皮细胞的活化刺激效应

目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响.方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-CD137L共刺激通路后内皮细胞分泌细胞因子的变化.结果活化的T细胞刺激了内皮细胞活化,诱导了内皮细胞合成和分泌细胞因子IL-1、IL-8以及粘附分子ICAM-1的表达;可溶性融合蛋白CD137-Fc成功地阻断了CD137-CD137L的相互作用,内皮细胞合成和分泌细胞因子的能力降低.结论证明CD137-CD137L的相互作用在内皮细胞与T细胞的相互作用中发挥了重要的作用,提示CD137与其配体交联具有刺激内皮细胞活化的生物学功能.     

CD137信号对CIK细胞增殖和功能的调节作用

目的:探讨CD137信号对CIK细胞的增殖和功能调节作用.方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),实验组在常规CIK培养体系中加入CD137单抗(CD137-CIK组),对照组在常规CIK培养体系中加入鼠IgG1同型对照(IgG1-CIK组).苔盼蓝拒染法细胞计数分析细胞增殖;流式细胞术检测细胞表型及细胞内因子的表达;LDH酶释放法检测CIK细胞杀伤活性.结果:CD137-CIK组细胞体外扩增效率显著高于IgG1-CIK组,CD137-CIK组细胞浓度最高达(9.87±0.57)×106/ml;IgG1-CIK组最高为(7.02±0.68)×106/ml;CD137-CIK组和IgG1-CIK组细胞中CD3 CD56 细胞比例至28天分别达到(39.86±4.69)%和(29.14±5.12)%(P＜0.05);经CD137mAb作用后,其体外杀伤肺癌细胞株A549活性明显高于对照组(P＜0.05);第0、7、14、21天流式检测IFN-γ表达,实验组CD3 CD56 细胞IFN-γ的表达显著高于对照组.结论:CD137mAb介导的共刺激信号可以促进CIK细胞的体外增殖活性,并增强CIK细胞体外抗瘤作用.其中CD137-CIK组CD3 CD56 细胞的比例及其IFN-γ表达显著提高,这可能是CD137信号增强CIK抗瘤作用的重要原因.     

鼻咽癌患者放疗前后血清可溶性CD105变化及其临床意义

目的探讨鼻咽癌患者放疗前、后血清CD105水平的变化及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,对33例初治鼻咽癌患者放疗前、后2～3月,随访中出现复发转移及20例健康献血员血清中CD105的水平进行检测.结果初治鼻咽癌患者放疗前血清CD105水平明显高于健康对照组（P〈0.01）;与放疗前比较放疗后血清CD105水平明显降低（P〈0.01）;临床III＋IVa期鼻咽癌患者放疗前血清CD105水平明显高于健康对照组（P〈0.05）;鼻咽癌患者放疗前血清CD105水平在T、N及临床各分期间无显著性差异（P〉0.05）;经单因素分析显示：随访中出现复发转移患者其治疗前、后血清CD105水平均较未出现复发转移患者低（P〈0.01、P〈0.05）,放疗前CD105水平是影响预后的危险因素;经Logistic回归分析,N分期是影响鼻咽癌患者预后的危险因素（P〈0.05）,且N分期为N2＋N3的患者其发生复发转移的危险性是N分期为N0＋N1患者的8.975倍.结论血清CD105水平可以作为鼻咽癌患者治疗前、后病情监测及预后判断的一个新的检测指标.