经口感染弓形虫诱导的小鼠肠道粘膜T细胞亚群变化

目的 研究经口感染弓形虫速殖子小鼠肠道粘膜组织诱导部位与效应部位T细胞亚群的变化,探讨肠道粘膜免疫应答机制。 方法 将6~7周龄BALB／c小鼠100只随机分为对照组和感染组。感染组灌胃接种RH株弓形虫速殖子5×104个／只,对照组给予等体积PBS。于感染后第2、4、6、8、10 d分别处死小鼠,分离Peyer's patches(PP结)、肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(IEL),用免疫细胞化学法检测CD4 、CD8 T细胞亚群。 结果感染组小鼠PP结CD4 T细胞有随感染天数增加呈升高趋势,第6、8、10 d显著高于对照组(P<0.01);CD8 T细胞亦有增高趋势,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05);CD4 ／CD8 比值第6 d起增高(P<0.05),第8 d最大(P<0.01),第10d回落(P<0.05)。MLN中T细胞亚群有较弱增高趋势,无统计学意义(P>0.05)。IEL CD4 、CD8 T细胞在第6、8、10 d均增高,其中CD8 T细胞增高显著(P<0.01);CD4 ／CD8 比值第6 d开始下降,两组间差异有显著性(P<0.05)。 结论 诱导部位PP结CD4 T细胞明显增高,诱导对弓形虫抗原的处理、提呈作用;效应部位IELCD8 T细胞增殖明显,在清除虫体的过程中起主导作用。     

霍乱毒素联合弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的GALT和NALT黏膜免疫应答

目的观察霍乱毒素(CT)联合弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠诱导的肠相关淋巴组织(GALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)黏膜部位的免疫应答。方法将48只5~6周龄BABL/c小鼠随机均分为3组,分别用PBS、ESA和CT+ESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔2周。末次免疫后14 d,处死小鼠,ELISA测定小鼠粪便和鼻咽冲洗液sIgA抗体水平;计数派伊尔淋巴集结(PP)、肠上皮淋巴细胞(IEL)、NALT和鼻通道(NC)淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平。结果免疫后14 d,CT+ESA组小鼠鼻咽冲洗液和粪便sIgA水平显著高于ESA组和PBS组(P<0.01);CT+ESA和ESA组小鼠GALT部位的PP淋巴细胞显著增生,主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主,CD4+/CD8+比值降低(P<0.05)。CT+ESA NALT内淋巴细胞明显增生。CT+ESA组NC淋巴细胞显著升高(P<0.01),以CD4+T细胞增生为主。结论 CT佐剂联合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱导GALT和NALT黏膜部位免疫应答。     

弓形虫DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究

研究弓形虫表面抗原P30和P22 DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。48只BALB/c小鼠随机分成4组:A组(NS对照组),肌注生理盐水100μl/鼠;B组(空质粒对照组),肌注pBK-CMV 100μl/鼠(1mg/ml);C组(pBK-P30免疫组)肌注pBK-P30 100μl/鼠(1mg/ml);D组(pBK-P30&pBK-P22联合免疫组)分别肌注pBK-P30和pBK-P22各100μl/鼠(1mg/ml),免疫后5周,通过ConA刺激,MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率,使用间接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞群进行测定。免疫后10周,免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。结果表明,ConA刺激小鼠脾T淋巴细胞均发生增殖反应,疫苗免疫组略高于两对照组,但4组之间的差异均无显著性(P>0.05)。T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+T细胞在各组的增殖均不明显(P>0.05),但两免疫组CD8+T细胞数量升高,CD4+/CD8+比值降低,与空质粒pBK-CMV对照组和NS对照组之间差异均有显著性(P<0.05,P<0.01),pBK-CMV对照组与NS对照组之间差异也有显著性(P<0.01),两免疫组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫速殖子攻击感染,联合免疫组平均存活时间较两对照组均延长(P<0.05)。但两免疫组间、pBK-P30免疫组与两对照组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫DNA疫苗能诱导BALB/c鼠产生特异性细胞免疫应答及部分抗虫免疫保护作用,此两种DNA疫苗联合免疫有一定的免疫保护效果。     

经口感染弓形虫诱导小鼠黏膜免疫动物模型的建立

目的建立经口感染弓形虫速殖子诱导黏膜免疫的动物模型。方法BALB/c小鼠分别灌胃接种5×103、5×104、5×105、5×106个RH株速殖子,观察小鼠的体况、病理变化;检测肠道分泌型IgA(SIgA)和Peyer’spatches(PP)淋巴细胞及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)T细胞亚群的变化。结果经口接种5×104个弓形虫RH株速殖子可使小鼠出现临床症状和病理改变;SIgA水平升高;黏膜诱导部位的CD4 T亚群及效应部位的CD8 T亚群水平升高。结论5×104个弓形虫RH株速殖子灌胃接种小鼠可以诱导机体黏膜免疫应答。     

刚地弓形虫致BALB/c小鼠受精卵发育毒性的研究

目的观察刚地弓形虫感染是否影响小鼠受精卵的发育及卵裂，探讨刚地弓形虫对胚胎发育的毒性作用。方法将BALB／C小鼠随机分为未染虫对照A组和染虫B—E组，A组每只腹腔注射PBS0．2ml；B—E组每只依次腹腔注射刚地弓形虫速殖子25、50、100、200个，注射体积均为0．2ml。染虫3d，使小鼠超排、合笼，查阴栓，将查获阴栓的各组小鼠再随机分为A1-A3、B1-B3、C1-C3、D1-D3和E1-E3组，观察各组小鼠受精卵于受精24、48和72h后的卯裂情况。结果染虫B组与对照A组各项指标均无差异。染虫C～E组小鼠受精24、48h回收的胚胎总数、受精卵百分率均小于A组（P〈0．05），而在受精72h后，C组与A组无差异，D、E组小于A组（P〈0．05）；在受精24h后，1-C胚率比对照A组高（P〈0．05），2-C胚率则比A组低（P〈0．05）；在受精48h后，桑椹胚率低于A组（P〈0．05）；72h后囊胚率低于A组（P〈0．05），而发育延迟胚率和退化胚率在受精48、72h后则都高于A组（P〈0．05）。结论刚地弓形虫对小鼠受精卯的发育具有-定的毒性作用。     

致敏IEL过继转移诱导抗弓形虫感染的机制

目的分离供体鼠感染弓形虫后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)并过继转移,研究其诱导受体鼠抗弓形虫感染作用及其机制。方法BALB/c小鼠经口感染弓形虫速殖子5×104个/只,对照组未感染,作为供体提供IEL。同品系小鼠36只为受体鼠,分为6组,每组6只,经尾静脉分别接受分离自供体鼠感染弓形虫后第7(IEL7组)、9(IEL9组)、11(IEL11组)、13(IEL13组)、15d(IEL15组)的致敏IEL或未致敏(IEL0组,即对照组)的IEL3×105/0.2ml·只。各组小鼠过继转移后第4d,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第13d分离纯化脑、肺、脾组织内速殖子并计数,测定小肠Peyer′s Patch(PP)CD4+、CD8+T细胞亚群水平。结果致敏IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内速殖子数显著减少,接受致敏后第13d IEL的小鼠组织内速殖子数减少最为显著(Ρ<0.01),与IEL0组相比,脑、肺和脾组织内速殖子数分别减少81.13%、58.43%和70.97%;同时,小肠PP结CD4+T细胞增多,CD4+/CD8+比值增高(Ρ<0.01)。结论过继转移致敏IEL能显著提高受体鼠的抗弓形虫感染能力,且保护作用同致敏时间关系密切,以感染后13d分离的致敏IEL保护性最强。     

肠上皮内淋巴细胞抗弓形虫感染的免疫功能研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)经口感染后引发一系列免疫应答,包括先天性免疫和获得性免疫应答。某些近交系小鼠感染后肠道内稳态平衡的改变,导致急性回肠炎。肠道相关淋巴组织(gut-associatedlymphoid tissue,GALT)为抵抗弓形虫感染的首道屏障,肠上皮内CD4 T细胞分泌趋化因子和细胞因子来清除弓形虫,而肠上皮内CD8 T细胞分泌转化生长因子来减轻炎症反应。该文综述了经口感染弓形虫后,以肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)为代表的GALT细胞群在抗弓形虫感染中的免疫功能特征。     

弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响

目的探讨弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响。方法在妊娠第8d,采用腹腔注射法建立弓形虫感染的BALB/c小鼠动物模型,于妊娠第12、14、16和18d分批处死孕鼠,采用流式细胞技术检测胎盘细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果随着妊娠天数的增加,实验组和正常对照组孕鼠胎盘细胞凋亡率及Caspase-3酶的活力单位均在升高,差异均具有统计学意义(P<0.01);相同妊娠天数的比较显示,除妊娠18d的Caspase-3酶活力单位外,其余各妊娠天数的凋亡率以及酶活力单位实验组均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论妊娠中期弓形虫感染可导致孕鼠胎盘细胞凋亡明显增加,致使胎盘组织的完整性受到破坏,影响胎盘的功能,导致不良妊娠结局的发生。     

小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答

目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原（excreted/secreted antigens,ESA）鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5～6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20μl/只PBS滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP（Peyer’s patches）个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞（intraepithelial lymphocyte,IEL）及肠系膜淋巴结细胞（mesenteric lymph node lympho-cyte,MLNL）并计数。眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA。结果72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势。各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果最好。     

弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察

目的观察弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用. 方法重组质粒pBK-P30用生理盐水稀释后,肌注免疫BALB/c小鼠.分别于免疫后5周和10周,ELISA测定IgG抗体滴度;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉PCR扩增P30基因;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染.结果两次检测,均可测到特异性IgG抗体,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高;免疫后5周,免疫鼠的上述组织均可扩增出P30基因条带,但免疫后10周仅血液扩增出特异P30基因条带;弓形虫速殖子腹腔攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长,但统计学差异不显著(P＞0.05). 结论弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用.     

弓形虫P22编码基因真核表达质粒接种小鼠后的细胞免疫效果

目的　观察分析弓形虫表面抗原 P2 2编码基因真核表达质粒 (p BK/P2 2 )接种小鼠诱导的细胞免疫效果。方法　采用肌肉注射免疫接种 BAL B/c小鼠 ,5周后 ,取鼠脾细胞作 Con A刺激淋转试验 (MTT法 )及 T细胞亚群的测定。结果　MTT试验中 ,p BK/P2 2免疫组、空质粒 p BK- CMV对照组与 NS对照组的 Con A孔的光密度值与不加 Con A孔的光密度值的差值疫苗免疫组略高于二对照组 ,统计学分析无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;CD+4 细胞数量变化无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,而 CD+8细胞数量则明显增多 ,p BK/P2 2免疫组、空质粒 p BK- CMV均高于 NS对照组 ,其差异有显著性 (P<0 .0 1) ;p BK/P2 2免疫组与空质粒组间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　 p BK/P2 2对 Con A刺激的淋巴细胞增殖功能作用不明显 ;T淋巴细胞亚群测定结果表明 ,p BK/P2 2免疫后小鼠 CD+4 淋巴细胞增殖不明显 ,而 CD+8淋巴细胞则显著增殖     

弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导细胞免疫应答的研究

目的观察弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫应答.方法大量制备重组真核表达质粒pBK-P30,用生理盐水(NS)稀释至1 μg/μl,1次肌注免疫BALB/c小鼠,分别在免疫后5和10周,通过ConA刺激,MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率;使用间接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CDs+T细胞亚群进行测定.结果ConA刺激小鼠脾T淋巴细胞发生增殖反应,pBK-P30免疫组与两对照组及对照组之间的差异均无显著性(P＞0.05).T细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+T细胞在各组增殖均不明显(P＞0.05),但免疫组CDs+细胞数量升高,CD4+/CDs+比率下降,与空质粒pBK-CMV对照组和NS对照组之间差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01),pBK-CMV对照组与NS对照组之间差异也有显著性(P＜0.01).免疫后10周,与NS对照组相比较,免疫组和pBK-CMV对照组CDs+细胞仍升高(P＜0.01),但它们之间的差异无显著性(P＞0.05).结论弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定的细胞免疫应答.     

感染弓形虫小鼠早期细胞免疫的探讨

目的：对感染弓形虫小鼠的早期细胞免疫进行探讨。方法：采用脾淋巴细胞转化试验，ＮＫ细胞杀伤活性测定，血清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）测定及血清中特异性ＩｇＧ抗体测定等方法。结果：小鼠感染弓形虫早期脾淋巴细胞增殖反应增强，ＮＫ细胞杀伤活性增强，血清中ＴＮＦ含量增高，ＩｇＧ抗体水平无明显变化。结论：小鼠感染弓形虫早期，其抵抗弓形虫感染的免疫应答中，细胞免疫和体液免疫存在着协同作用，且细胞免疫较体液免疫有效。     

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的体液免疫反应及保护性观察

目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果. 方法P30乳酸球菌口服免疫BALB/c小鼠,以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照,4周内免疫7次,免疫结束后,分别收集各组小鼠血清,ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平,同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠. 结果 P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体,抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1,两对照组均检测不到明显的相应抗体;攻击后,口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4 d. 结论 P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体,诱导产生了偏向Th1型的免疫反应,且在小鼠体内发挥了部分保护作用.     

孕鼠感染弓形虫后的动态病理变化观察

经昆明种孕鼠尾静脉注射弓形虫ＮＴ强毒株滋养体孵育液，于注射后第２、４、８、１２、２４、４８、７２ｈ分批处死，动态观察孕鼠各主要脏器的病理变化。结果表明在肺、肾、肝、脾、心等脏器的实质细胞核内或胞浆内均发现弓形虫，引起的病理变化均为非特异性，表现为实质细胞的轻度变性、坏死及少量淋巴细胞、单核细胞浸润。本实验结果提示在积极预防、治疗先天性弓形虫病胎儿发育异常的同时，对母体各脏器的功能、形态学变化需引起足够的重视，这是降低先天性弓形虫病发病率的关键。     

弓形虫RH株在实验感染小鼠体内分布的研究

以间接免疫酶法观察弓形虫感染时的急性期病变特点及虫体在主体脏器的动态分布,以期为弓形虫病的病理诊断提供依据,并对弓形虫致病机理加深理解。方法用弓形虫ＲＨ株速殖子１０＾３个经腹腔感染昆明小鼠,于感染后第２、４、６和８ｄ,取肝、脾、肺和脑进行间接免疫酶染色。     

孕鼠感染弓形虫对子代的影响

目的观察孕期感染弓形虫对子代鼠发育、寿命和免疫功能的影响。方法以不同剂量RH株弓形虫腹腔感染孕中期鼠(d10),分娩后观察记录子鼠发育过程中体长、体重、寿命;给予实验目的要求的干预措施,观察智力发育情况及免疫功能变化。结果弓形虫轻感组、重感组、对照组孕鼠分娩子鼠体长差异无显著性,体重、寿命、智力发育有差别;重感组子鼠寿命明显短于对照组和轻感组。轻感组子鼠智力干预前后差异有显著性,子鼠智力可以通过干预措施达到正常或得到改善,其他组无明显变化;受到再攻击感染时,重感染组子鼠感染率显著高于轻感组和对照组,且与IgG含量成反比。孕期弓形虫重度感染使子鼠抗感染能力下降,但血清特异性抗体IgG能起到一定的保护作用。结论孕期感染弓形虫出生子鼠体重、智力、免疫功能降低,寿命缩短,与感染剂量大小有关。对体长无明显影响。     

弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导的细胞免疫应答

目的用pcDNA_3－P30真核表达质粒直接免疫小鼠,观察所诱导的小鼠细胞免疫应答。方法大量制备量级质粒pcDNA_3－P30,经肌肉注射BALB／c小鼠,每隔3周接种1次,一共免疫3次。用MTT方法对脾脏的NK杀伤细胞率和淋巴细胞的转化率进行测定,采用免疫荧光法对CD4 、CD8 细胞进行测定。结果实验组NK细胞杀伤率为：70．0％±3．64,对照组及空白对照组分别为48．5％±6．06和470％±5．93,实验组NK细胞活性比对照组明显增高（P＜0．05）;ConA刺激小鼠淋巴细胞转化实验,实验组与对照组及空白对用级差异无显著性（P＞0．05）;对T淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋进行动态分析,可见随着感染时间的延长,CD8＋的数量逐渐上升,CD4＋／CD8＋的比率逐渐下降,实验组与对照组及空白对照有明显差异（P＜0．05）。结论重组质粒pcDNA3-p30免疫BALB／c小鼠可诱导一定的细胞免疫。