延胡索水提物及左旋延胡索乙素抗吗啡条件性位置偏爱效应机制研究和效果比较

目的:研究延胡索水提物及左旋延胡索乙素(L-THP)抗吗啡条件性位置偏爱(CPP)效应的机制并进行效果比较.方法:吗啡剂量递增注射10d建立大鼠吗啡CPP模型(起始剂量10 mg·kg-1,每天递增10 mg·kg-1,至注射10d时100mg·kg-1),延胡索水提液2,1,0.5 g·kg-1(分别含L-THP 0.153,0.077,0.038 mg),以及L-THP 3.76,1.88,0.94 mg·kg-1灌胃治疗6d后,检测大鼠CPP效应,用比色法和免疫组化分别测定其中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各脑区内谷氨酸递质含量和NR2B的表达.结果:与生理盐水治疗组比较,延胡索2,1g·kg-1及L-THP 3.76,1.88 mg·kg-1组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间明显减少(P＜0.05或P＜0.01),同时VTA,NAc和PFC内谷氨酸含量及NR2B表达均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:延胡索与L-THP均能加速吗啡CPP效应的消退,逆转VTA-NAc-PFC神经环路中升高的谷氨酸含量和下调NR2B的表达,可能是二者加速吗啡CPP效应消退的机制之一;含1倍量L-THP单体的延胡索中药不但在抑制吗啡CPP行为学方面相当于单独应用约24倍L-THP单体的效果,而且,在对VTA-NAc-PFC环路中谷氨酸递质和NR2B的药理作用机制方面也具有很大的相似性.     

延胡索对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱效应的影响

目的 观察延胡索水提液对吗啡诱导条件性位置偏爱(CPP)效应的影响.方法 吗啡剂量递增颈背部皮下注射10 d,建立大鼠吗啡CPP模型.在CPP测试后当日,不同剂量延胡索水提液灌胃治疗.结果 在延胡索1 mg·kg-1,2 mg·kg-1组,大鼠吗啡CPP效应6 d消退,相比模型组(21 d消退)提前2/3时程.结论 延胡索单味中药能加速吗啡诱导CPP效应的消退,提示该药具有治疗吗啡精神依赖的潜能.     

延胡索和左旋延胡索乙素对大鼠吗啡条件性位置偏爱效应消退作用的比较

目的观察并比较延胡索及其有效成分左旋延胡索乙素(l-tetrahydropalmatine,l-THP)对大鼠吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)效应消退时间的影响。方法剂量递增法建立大鼠吗啡CPP模型,雄性SD大鼠颈背部注射吗啡和生理盐水训练10 d,在12 d确认CPP模型建立成功后,连续21 d给予延胡索2,1,0.5 g.kg-1水提液(分别含l-THP0.153,0.077,0.038 mg),以及l-THP 3.76,1.88,0.94 mg.kg-1灌胃治疗,观察各组大鼠吗啡CPP效应的消退时间。结果与生理盐水对照组比较,吗啡模型组大鼠在伴药箱停留的时间明显延长(P<0.05);治疗后,延胡索2,1g.kg-1水提液和l-THP 3.76,1.88 mg.kg-1组的CPP效应在用药6 d消退,而模型组、延胡索0.5 g.kg-1和l-THP0.94 mg.kg-1组在用药第2天消退。结论延胡索和l-THP均能加速大鼠吗啡CPP效应的消退,但含一倍量l-THP单体的延胡索中药相当于单独应用约24倍l-THP单体的效果。     

钩藤对吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱效应的影响

目的:观察钩藤提取液对吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱效应的影响。方法:SD雄性大鼠,取经过基线测定合格的40只大鼠,随机分为空白对照组、吗啡模型组(15 mg.kg-1,sc)、钩藤提取液低剂量(3 g.kg-1,ig)+吗啡组、钩藤提取液高剂量(9 g.kg-1,ig)+吗啡组,每组10只动物,给药5 d。采用倾向性程序训练大鼠,建立位置偏爱模型,观察钩藤提取液对大鼠在伴药箱(白箱)逗留时间的影响。结果:吗啡模型组训练5 d后,大鼠在白箱的逗留时间明显延长(与空白对照组比较,P<0.01),说明经过5 d训练,大鼠对吗啡形成了位置偏爱。给予钩藤提取液高剂量组(9 g.kg-1)能显著缩短大鼠在白箱的逗留时间(与模型组比较,P<0.05)。结论:钩藤提取液能够抑制吗啡诱导的条件性位置偏爱效应的形成,具有一定的抗药物精神依赖作用。     

延胡索和左旋延胡索乙素对大鼠吗啡CPP效应、纹状体谷氨酸含量和NR2B表达的影响及比较

目的:观察并比较延胡索与左旋延胡索乙素(l-THP)对吗啡诱导大鼠条件性位置偏爱(CPP)效应、谷氨酸递质含量及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDAR)亚基NR2B表达的影响。方法:吗啡剂量递增皮下注射10d建立大鼠吗啡CPP模型,延胡索2、1、0.5g/kg水提液(分别含l-THP 0.153、0.077、0.038mg)和l-THP 3.76、1.88、0.94 mg/kg灌胃治疗6d后,CPP实验评价大鼠CPP效应;比色法和免疫组化测定纹状体中谷氨酸递质含量和NR2B的表达。结果:与生理盐水治疗组和吗啡模型组比较,延胡索2、1g/kg及l-THP 3.76、1.88mg/kg能明显减少大鼠在白箱的停留时间(P<0.01),同时纹状体中谷氨酸递质含量和NR2B表达均显著降低(P<0.01)。结论:延胡索和有效成分l-THP单体对吗啡CPP效应均具有明显的抑制作用,逆转纹状体中升高的谷氨酸递质含量和下调NR2B的表达,可能是二者有效抑制吗啡CPP效应的机制之一;含1倍量l-THP单体的延胡索不但在抑制吗啡CPP行为学方面相当于单独应用约24倍l-THP单体的效果,而且,在对纹状体中谷氨酸递质和NR2B的药理作用机制方面也具有很大的相似性。     

钩藤对吗啡条件性位置偏爱效应影响的研究

目的:观察钩藤提取液对吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱效应的影响.方法:采用倾向性程序训练大鼠,建立位置偏爱模型,并观察钩藤提取液对其的影响.结果:吗啡(15mg/kg,sc,每日1次,连续用药5d)引起大鼠显著的位置偏爱效应.在训练阶段每天sc吗啡后12h给予钩藤提取液(3、9g/kg,ig),大鼠在白箱的逗留时间有所缩短,钩藤高剂量组(9g/kg)大鼠在白箱的停留时间与空白对照组相比无显著差异(P＞0.05),与给药前相比亦无显著性差异(P＞0.05).结论:提示预先给予钩藤提取液能在一定程度上抑制吗啡诱导的条件性位置偏爱效应的形成.     

黄芪总苷对小鼠吗啡条件性位置偏爱及中枢NO水平的影响

目的观察黄芪总苷(astragalosides,AST)对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)效应的影响及其与中枢NO水平的关系。方法建立小鼠吗啡CPP模型,观察AST对CPP的影响,采用硝酸还原酶法检测小鼠脑组织NO水平。结果吗啡(6mg/kg,sc)可诱导小鼠对伴药箱产生显著的CPP,小鼠脑组织NO水平亦显著升高(P<0.01);训练阶段于每次给予吗啡前30min给予AST(40～160mg/kg)可拮抗小鼠对吗啡的CPP效应(P<0.05、0.01、0.001),且AST(80～160mg/kg)能降低脑内NO水平(P<0.01);仅在测试前30min一次给予AST(160mg/kg)可抑制小鼠已形成的CPP(P<0.01),并降低脑内NO水平(P<0.01)。结论AST可抑制吗啡诱导的小鼠CPP效应的形成和表达,其作用机制可能与降低中枢NO水平有关。     

人参皂苷Rg_1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白及NMDA受体亚单位NR1,NR2B表达的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白(Phosphory protein Tau,P-Tau)及N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位1(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 1,NR1)、亚单位2B(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)的表达影响。方法:将5周龄雄性Wistar大鼠脑片(含皮层和海马)随机分为5组:空白对照组、模型组和低、中、高剂量人参皂苷Rg1组,每组10张脑片,脑片放置盛有人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)的6孔板中培养,温度(32.0±0.5)℃,整个过程ACSF中持续通入混合氧气(95%O2+5%CO2)。人参皂苷Rg1各组ACSF中首先加入人参皂苷Rg1(60,120,240μmol.L-1)作用2 h,然后模型组和人参皂苷Rg1各组ACSF中分别加入冈田酸(okadaic acid,OA)1μmol.L-1作用3 h,空白对照组不加任何处理因素。采用免疫组织化学、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-Tau,NR1,NR2B表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠脑片P-Tau的表达增加(P0.05或P0.01),NR1,NR2B的表达降低(P0.01);人参皂苷Rg1各组与模型组比较,大鼠脑片P-Tau的表达降低(P0.01或P0.05),NR1,NR2B的表达增加(P0.01或P0.05),其中以高剂量人参皂苷Rg1组效果最佳。结论:人参皂苷Rg1可以降低大鼠脑片AD模型P-Tau表达水平,并能上调学习记忆相关蛋白NR1,NR2B的表达,以此途径发挥抗痴呆作用。     

左旋多巴对偏侧帕金森病大鼠纹状体多巴胺D2受体表达数及多巴胺含量的影响

 目的了解左旋多巴(L-dopa)在抗帕金森病(PD)治疗中对纹状体区多巴胺D₂受体表达数及多巴胺含量的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型。用免疫组化染色法和高效液相色谱法分别检测PD模型大鼠在L-dopa100mg·kg^-1·dkg^-1)腹腔注射15d前后纹状体部位的多巴胺D₂受体表达数、多巴胺及其代谢物含量变化。结果与L-dopa治疗前组相比,L-dopa治疗后PD大鼠模型纹状体中D2受体阳性表达细胞数明显减少(P<0.01),而多巴胺和代谢物含量明显增高。结论偏侧PD大鼠模型损毁侧纹状体区多巴胺D₂受体因代偿作用出现明显上调,而L-dopa干预能很大程度逆转了这种上调作用。     

安神定志灵对自发性高血压大鼠脑中多巴胺受体D3,D4,D5基因表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型大鼠脑边缘系统多巴胺受体D3(dopamine receptor-3,DRD3)、D4 (dopamine receptor-4,DRD4)及D5(dopamine Receptor-5,DRD5)和前额叶皮质DRD4基因表达的影响,探讨该药治疗ADHD可能的作用机制.方法:30只自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)随机分为5组(安神定志灵高、中、低剂量组,利他林组,模型组),6只同龄Wistar大鼠作为正常对照组.安神定志灵高、中、低剂量组分别给予生药剂量34.1,17.1,8.5 g·kg-1,利他林组予2.1 mg· kg-,模型组和正常对照组予10mL· kg-1生理盐水,各用药组每次均以每天相应剂量的1/2 ig,2次/d,连续给药1月后进行实验处理,迅速分离脑组织,采用RT-PCR检测各组大鼠脑边缘系统DRD3,DRD4及DRD5和前额叶皮质DRD4基因表达水平.参照基因表达谱芯片分析,当目的基因表达≥2,认为该基因表达增高;若≤0.5认为基因表达降低.结果:与正常组比较,模型组大鼠不论是脑边缘系统中DRD3,DRD4和DRD5基因表达还是前额叶皮质中DRD4基因表达均降低.与模型组相比,利他林组脑边缘系统中DRD3,DRD4及DRD5基因的表达和前额叶皮质中DRD4基因的表达均回调;安神定志灵低剂量组回调脑边缘系统中DRD3,DRD4,DRD5的表达和前额叶皮质中DRD4的表达,中剂量组仅发现前额叶皮质中DRD4的表达增加,高剂量组上调脑边缘系统中DRD3的表达的同时显著下调前额叶皮质中DRD4的表达.结论:DRD3,DRD4及DRD5与ADHD的发生存在一定的关联性,不同剂量的安神定志灵在调控中脑-皮质-边缘系统多巴胺通路的功能中发挥不同的作用,提示临床给药剂量需结合临床症状和体征等.     

延胡索化学成分研究

目的:对延胡索Corydalis yanhusuo块茎化学成分进行分离和鉴定.方法:应用大孔树脂、硅胶和Sephadex LH-20等色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据鉴定化合物的结构.结果:分离鉴定了22个化合物,分别为延胡索甲素(1),延胡索乙素(2),原阿片碱(3),四氢紫堇萨明(4),四氢黄连碱(5),四氢小檗碱(6),四氢非洲防己胺(7),降氧化北美黄连次碱(8),脱氢紫堇碱(9),脱氢海罂粟碱(10),非洲防己胺(11),8-氧黄连碱(12),13-甲基非洲防己胺(13),黄连碱(14),巴马亭(15),小檗碱(16),氧海罂粟碱(17),13-甲基巴马亭红碱(18),脱氢紫堇鳞茎碱(19),千金藤宁碱(20),腺苷(21),δ-乙酰鸟氨酸(22).结论:化合物13,20,21,22为首次从该植物中分离获得.     

鲜元胡一体化加工炮制技术研究

目的:研究将鲜元胡初加工与醋制结合的一体化加工技术.方法:通过采用不同的加工方法,并与传统炮制进行对比,测定各样品中延胡索乙素含量、水浸提物和醇浸提物含量.结果:以元胡鲜切片在米醋中减压抽真空2次及鲜切片干燥后用米醋浸润的样品中延胡索乙素含量最高;水热浸提物含量则以鲜切片干燥后用米醋浸润处理最高,其次是鲜切片在米醋中减压抽真空处理,其他处理样品与传统炮制差异不大;醇浸提物含量在各样品间差异不大.结论:可以对鲜元胡直接进行一体化加工及炮制.     

微量元素对延胡索有效成分含量的影响

目的:探讨微量元素对中药材有效成分含量的的影响.方法:色谱柱为Inertsil ODS C18,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液( pH 6.0) (60∶ 40),检测波长为280 nm,流速1 mL· min-1,柱温为25℃.结果:延胡索乙素在10～100 mg·L-1呈良好的线性关系,加样回收率为101.4％,RSD 1.42％.结论:叶面喷施铁肥对元胡中有效成分含量的增加有促进作用,铜肥和锌肥的作用不明显.     

三甲基硅烷衍生化GC-MS研究延胡索中 水溶性非生物碱类化学成分

目的:研究延胡索Corydalis yanhusuo中水溶性非生物碱类化合物。方法:延胡索的80%乙醇提取物经DA201大孔树脂柱吸附,收集水洗部位,该水洗脱部位再经732阳离子树脂交换,其水洗脱组分干燥后进行三甲基硅烷衍生化。采用GC-MS检测分析,NIST 2005标准谱库结合具体衍生物的MS/MS质谱图进行化合物结构推断。结果:GC-MS共检出约50个色谱峰,初步鉴定了其中的16个化合物,均为含有羟基或羧基的大极性化合物。结论:16个化合物为首次从延胡索中发现,该研究结果为延胡索的深入开发提供了科学依据。     

延胡索抗阿片类药物成瘾的研究进展

延胡索及有效成分四氢巴马汀镇痛疗效确切,并具有扩张血管、保护心肌、抗菌、抗炎等功效,临床用于多种疾病的治疗。延胡索为中药戒毒常用药,现就延胡索的化学成分、相关药理作用以及抗阿片类药物成瘾的基础研究进展进行综述,为延胡索的现代化研究和综合利用提供科学依据。     

HPLC测定小花黄堇中原阿片碱的含量

目的:建立用HPLC测定小花黄堇中原阿片碱含量的方法。方法:Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-三乙胺醋酸溶液(20∶80);流速1.0 mL.min-1;检测波长289 nm;柱温30℃。结果:小花黄堇中原阿片碱的平均质量分数0.905%,原阿片碱在0.124~1.36μg线性关系良好,平均回收率98.49%,RSD 1.9%(n=6)。结论:该方法操作简便,重复性较好,测定结果较为可靠,可用于测定小花黄堇中原阿片碱的含量。     

高效液相色谱法测定夏天无中4种生物碱的含量

目的:建立同时分离测定夏天无中原阿片碱、盐酸巴马亭、比枯枯灵、四氢巴马亭4种生物碱含量的高效液相色谱方法.方法:采用ZORBAX Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为20 mmol·L-1乙酸铵-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min -1,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为10 μL.结果:在本实验条件下,4种生物碱有很好的分离,原阿片碱、盐酸巴马亭、比枯枯灵、四氢巴马亭的质量浓度与峰面积分别在1.44～46.0(r=0.999 4),1.26～40.2(r=0.999 8),1.37 ～44.0(r=0.999 9),1.36 ～43.6 mg·L-1(r=0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率依次为98.2%,101.9%,102.8%,98.8%,RSD为2.7%,2.5%,3.5%,3.1%.结论:该方法简便易行、准确、重复性好,可用于夏天无中原阿片碱、盐酸巴马亭、比枯枯灵、四氢巴马亭4种生物碱含量测定.     

延胡索及其有效成分抗吗啡成瘾多巴胺系统作用机制研究和效果比较

为了观察延胡索和左旋延胡索乙素(L-tetrahydropalmatine,L-THP)对吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠学习记忆相关脑区海马(Hip)和纹状体(Str)内多巴胺递质含量,多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)和多巴胺D2受体(D2R)表达的影响。对各组大鼠颈背部皮下注射生理盐水或吗啡后(吗啡起始剂量为10 mg·kg-1,逐日递增,至第10天为100 mg·kg-1),末次训练48 h进行CPP测试确认模型建立成功,立即处死生理盐水对照组和模型组大鼠,分别取海马、纹状体脑组织。延胡索高、中、低剂量组大鼠则分别给予延胡索2,1,0.5 g·kg-1水提液(内含L-THP的量分别为0.274,0.137,0.069 mg),L-THP高、中、低剂量组分别给予L-THP 3.76,1.88,0.94 mg·kg-1灌胃治疗,生理盐水治疗组灌胃生理盐水,持续治疗6 d,再次CPP测试后处死,同前取材。采用高效液相色谱法检测多巴胺递质含量;Western blot技术检测DAT和D2R的表达。结果显示,与生理盐水治疗组比较,延胡索和L-THP高、中剂量组大鼠在白箱停留的时间显著减少(P0.01),同时海马和纹状体脑区内多巴胺递质含量明显降低(P0.01或P0.05),DAT表达上调(P0.01),D2R表达上调(P0.01)。学习记忆相关脑区海马和纹状体是延胡索和L-THP治疗精神依赖的又一神经解剖学作用位点,其机制与下调其升高的DA递质含量以及上调DAT和D2R的表达有关;对吗啡CPP效应消退的药效作用,以及对学习记忆相关脑区海马、纹状体中DA递质含量、DAT和D2R的影响,含1倍量L-THP单体的延胡索中药相当于单独应用约14倍L-THP单体的效果。     

The effect of Salvia divinorum and Mitragyna speciosa extracts,fraction and major constituents on place aversion and place preference in rats

Ethnopharmacological relevance

Consumer use of botanicals has increased despite, in many instances, the paucity of research demonstrating efficacy or identifying liabilities. This research employed the place preference/aversion paradigm to characterize the psychoactive properties of Salvia divinorum extract (10, 30, 100 mg/kg), salvinorin A (0.1, 0.3, 1.0 mg/kg), Mitragyna speciosa MeOH extract (50, 100, 300 mg/kg), Mitragyna speciosa alkaloid-enriched fraction (12.5, 25, 75 mg/kg) and mitragynine (5, 10, 30 mg/kg) in rats.

Material and methods

Following apparatus habituation and baseline preference scores, male Sprague-Dawley rats were given eight counter-balanced drug versus vehicle conditioning trials followed by a preference test conducted under drug-free states. S(+)-amphetamine (1 mg/kg) served as the positive control (in Exp. 2) and haloperidol (0.8, 1.0 mg/kg) served as the negative control in both studies.

Results

Rats displayed place aversion to both Salvia divinorum and salvinorin A that exceeded that of haloperidol. Rats showed place preference to mitragynine that was similar to that of S(+)-amphetamine. This CPP effect was much less pronounced with the Mitragyna speciosa extract and its fraction.

Conclusions

These findings suggest that both botanicals possess liabilities, albeit somewhat different, that warrant caution in their use.