细胞色素P4503A4基因多态性分子检测指导分娩镇痛舒芬太尼用药

目的:评价、探讨孕期妇女细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)3 A4基因多态性与分娩镇痛舒芬太尼用药剂量关系,个性化制定给药方案.方法:在尽可能控制其他干扰因素(年龄、性别、身高、体重、孕龄、遗传背景差异)的前提下对131例健康产妇CYP450 3 A4(CYP3A4) rs2242480基因多态性进行检测,根据基因型分为标准给药组(CC型)和减量给药组(CT/TT型):CC型按照标准剂量给药,CT/TT型产妇将药物剂量减至标准剂量的87.6％,比较两组间镇痛效果,并对用药方案的安全性和有效性进行评价.结果:CYP3A4 rs2242480基因型中,CC型和CT/TT型分娩镇痛给药后1h视觉模拟评分(visual analogue score,VAS)分别为3.67±1.2和3.44±1.5,两组间差异无统计学意义,均符合预期镇痛标准.结论:CYP3A4 rs2242480中携带有T等位基因的产妇,分娩镇痛舒芬太尼用药可减低至87.6％,临床评价安全.     

人肝脏组织CYP3A4酶活性的高效液相色谱法测定

目的:建立测定人体肝脏组织中CYP3A4酶活性的HPLC方法。方法:取21例肝癌、16例肝血管瘤、13例胆组织病变患者的肝组织,制作肝微粒体,体外孵育后以咪达唑仑(MDZ)为探针药物,用高效液相色谱法测定CYP3A4的Km值。HPLC色谱条件:色谱柱为AngelC-18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:乙腈:水(体积比53:13:34),流速1mL/min,检测波长220nm,柱温25℃,进样量40μL。结果:1’-OHMDZ与MDZ的出峰时间分别为10.05与15.02min,分离充分(R>1.5),1’-OHMDZ质量浓度的范围为200～6000μg/L,高、中、低浓度回收率均>90%,日内、日间精密度RSD均<5%,稳定性RSD均<5%。50例患者Km值1.75～30.17μmol/L;不同性别、年龄及肝胆病变患者的Km值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该法稳定、快速、重复性好,可用于人体肝组织中CYP3A4酶活性的测定;性别、年龄及肝胆病变情况对CYP3A4酶活性无影响。     

细胞色素氧化酶P4503A4的研究进展

细胞色素P450酶(CYP450)是一类重要的混合功能氧化酶系统,参与许多内源性和外源性物质的生物转化过程.在人基冈组中含有57利PCYP基因,其中CYP 3A在CYP中占的比例最大,在肝内占到30%,而在肠内达70%以上.CYP 3A是十分重要的药物代谢酶,临床中大约有60%以上的药物由CYP 3A代谢,而CYP 3A4是其中最重要的一种.     

细胞色素P4503A5基因多态性与原发性高血压的相关性

目的研究细胞色素P450 3A5(CYP3A5)基因多态性与中国汉族人原发性高血压(EH)的相关性。方法采用TaqmanMGB探针建立了CYP3A5*3(6986A>G)位点的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分型方法,对170例中国汉族EH患者和193例排除EH诊断的对照者进行CYP3A5*3(6986A>G)位点基因分型。结果 EH组GG、GA、AA基因型频率分别为51.2%、42.4%、6.5%,而对照组则为39.9%、50.8%、9.3%。携带GG基因型者EH的患病风险是至少携带一个A等位基因者的1.579倍[95%CI:1.041~2.395]。结论 CYP3A5*3(6986A>G)多态性位点可能与中国汉族人EH具有相关性,A等位基因可能降低EH的患病风险,存在稍低的收缩压水平。     

氟化钠对小鼠肝脏细胞色素P4501A1酶活性的影响

目的：研究高氟对细胞色素P4501A1酶活性的影响,为探讨高氟地区肿瘤的发生发展提供实验依据。方法：昆明种雄性小鼠120只,分3个实验组和1个对照组,每组30只;实验组分别饮用50 mg/L、200 mg/L、400 mg/L NaF水溶液,于2周、5周、8周后,分别用氟离子选择电极法和分光光度法测定小鼠骨氟含量与肝微粒体中CYP1A1酶的活性。结果：实验组与对照组相比CYP1A1酶活性受到诱导,诱导率为2.1%~121%,但各剂量组之间无显著性差异,8周与2周相比酶活性显著增强。结论：NaF可不同程度地诱导CYP1A1的酶活性,摄入过量氟对肿瘤的发生发展具有一定的影响。     

细胞色素P4503A4与药物代谢的研究进展

细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)是一组含血红素的蛋白质,由结构和功能相关的基因超家族(superfamily)编码的同工酶组成的超家族酶系.CYP主要存在于肝脏,能代谢绝大多数药物和外源性化合物,故又称肝药酶.在肠壁、肾、肾上腺、肺及皮肤等组织中也有CYP存在.CYP3 A4是人体内最重要的药物代谢酶,研究CYP3 A4与药物代谢的关系,对于优化联合用药方案和临床个体化治疗具有重要意义.本文就CYP3 A4以及与之相关的代谢性药物相互作用作一综述.     

HPLC法测定尿素氢化可的松乳膏中氢化可的松的含量

目的：建立测定尿素氢化可的松乳膏中氢化可的松含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-水（50：50）,流速为1.0 ml/min,氢化可的松的检测波长为245 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。结果：氢化可的松在3.15～22.05μg/ml（r=0.999 9）的范围内,线性关系良好。平均回收率为99.8%（RSD=1.74%）。结论：方法快速灵敏、结果准确,可用于氢化可的松乳膏的质量控制。     

中国人细胞色素P4501A1基因外显子7的多态性分析

为探讨中国人与吸烟致癌力有关的细胞色素P4 5 0 1A1 (cytochromeP4 5 0 1A1 ,CYP1A1 )基因催化部位 (外显子 7)的多态性分布情况 ,分析了 4 5 8例中国人CYP1A1基因外显子 7的多态性分布频率。结果显示这种多态性在男女之间没有显著差异 ,4 5 8例中国人该基因不同类型的比例分别为Ile/Ile 61 .6%、Ile/Val 2 6.4 %、Val/Val 1 2 .0 % ,其中Val/Val基因型所占的比例显著高于日本人、白种人或非洲 美国人     

HPLC法测定人尿样中内源性6β-羟基氢化可的松和氢化可的松色谱条件优化

解析高效液相色谱法分离人尿样中内源性6β-羟基氢化可的松和氢化可的松4种不同色谱方案,研究改进思路,建立最佳分离色谱分离条件.     

酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的 观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据.方法 采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组.酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min.反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性.结果 细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16mg/L.而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P＜0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P＜0.05).结论 酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用.然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,衙高剂量有诱导作用.     

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的 研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶（CYP450）CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法 采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量RT-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果 给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达（P <0.05）。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论 连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。     

HPLC法测定人尿样中内源性6β-羟基氢化可的松和氢化可的松尿样提取方案优化

解析高效液相色谱法分离人尿样中内源性6β-羟基氢化可的松和氢化可的松中尿样处理方案,研究改进思路,建立适合大样本研究最佳提取条件.     

细胞色素P4503A代谢模型的研究进展

细胞色素P450(CYPs)是一组结构和功能相关的超家族基因编码的同工酶,负责内源性底物、外源性物质和许多其他合成性化学物质的代谢.CYP3A亚家族成员因为其含量最多、底物谱大,是药物代谢反应中最主要的限速酶.本文综述了近年来CYP3A的代谢模型的研究进展,     

硝苯地平骨架型缓释微丸在大鼠体内药代动力学及其与CYP3A4代谢酶活性的关系

考察自制硝苯地平骨架型缓释微丸在大鼠体内药代动力学行为,并研究其与CYP3A4代谢酶活性的关系。首先建立用于CYP3A4活性测定的梯度洗脱高效液相色谱法,同时测定大鼠尿中的6β-羟基氢化可的松(6β-OHF)和氢化可的松(FC)含量;以尿液中6β-OHF和FC之比作为活性指标。以FC为探针,测定10只大鼠体内的CYP3A4酶活性;然后建立硝苯地平大鼠体内的分析测定方法,以市售硝苯地平片为参比制剂进行大鼠体内药物动力学研究;同时研究CYP3A4酶活性与硝苯地平大鼠体内药代动力学性质的关系。研究结果显示,10只大鼠CYP3A4酶活性为0.271±0.129;自制硝苯地平骨架型缓释微丸c_max显著降低约70%,t_max显著增加约400%、t_1/2和MRT增加约230%,AUC_0-∞无显著差异。硝苯地平缓释微丸与市售制剂相比,在大鼠体内具有明显的缓释效果,且CYP3A4酶活性会影响其药代动力学行为。     

稳定表达细胞色素P4501A1人肝癌细胞系的建立

目的:建立稳定表达人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌细胞系(Bel-7402)。方法:通过将人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的表达质粒转染到人肝癌细胞系(Bel-7402),经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成系,WesternBlotting检测蛋白的表达。细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯并蒽(DMBA)对Bel-7402/1A1细胞的增殖抑制作用。双核微核实验对Bel-7402/1A1细胞进行了遗传毒理的短期实验。结果:转染后筛选得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达。细胞暴露于DMBA时,Bel-7402/1A1与Bel-7402细胞相比,细胞增殖明显抑制。双核微核试验表明Bel-7402/1A1细胞的微核率随DMBA浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化。连续传代后仍有CYP1A1标志酶EROD的较高表达,该酶活性能被CYP1A1抑制剂α-萘黄酮抑制。结论:建立了一个新的稳定表达CYP1A1的1个肝癌细胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性。该细胞系可用来筛选能被CYP1A1代谢的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用来研究CYP1A1的催化性质及被CYP1A1代谢的化合物的毒性机理。     

被促衰老P8型小鼠肝细胞色素P450 3A对学习与记忆的影响

目的探讨学习与记忆是否与细胞色素P450 3A(CYP3A)的活性变化有关.方法 本文用红霉素N-脱甲基酶活性测定法分别检测了SAM-R1和SAM-P8组被促衰老小鼠(SAM)在7、13、36及84周龄时其肝微粒体细胞色素P450 3A的活性变化.结果以SAM-R1组为对照,随着年龄增长,SAM-P8组中的CYP3A活性明显降低.结论 CPY3A的活性随着年龄增长对学习与记忆有一定的影响.SAM-P8对研究有关人类衰老时记忆减退提供确实有效的动物模型.     

葡萄柚汁对小白鼠肝和小肠细胞色素P4503A活性的影响

目的:了解细胞色素P4503A在正常普通小白鼠肝和小肠的含量,探讨葡萄柚汁对小白鼠肝和小肠细胞色素P4503A活性的影响。方法:选取普通雌性小白鼠50只,随机分为5组,分别给予生理盐水,50%,100%纯度的葡萄柚汁,按55ml/kg.d分两次给小白鼠灌胃,连续1或2周后,用颈椎脱臼法处死,取肝脏及小肠制备微粒体匀浆,用红霉素脱甲基酶活性测定法测定各组小白鼠肝和小肠细胞色素P4503A的活性。结果:正常组小肠细胞色素P4503A活性为27.3648±9.5750pmolHCHO.min-1.mg-1Pro,较肝细胞色素P4503A活性23.4962±7.6137pmolHCHO.min-1.mg-1Pro稍高,但无统计学意义。实验各组肝脏和小肠细胞色素P4503A活性均下降,随着葡萄柚汁摄入时间的延长、浓度的提高,小肠和肝脏细胞色素P4503A活性总体呈下降趋势,且以小肠下降为显著。结论:正常普通小白鼠小肠细胞色素P4503A的活性稍高于或相当于肝脏,葡萄柚汁灌胃连续1或2周后可抑制小白鼠肝脏和小肠的细胞色素P4503A活性。     

卡瓦胡椒提取物和卡瓦内酯对细胞色素P4503A4的抑制作用

由于卡瓦胡椒Piper methysticaum存在肝毒性,该植物制品最近已从德国市场撤消,但其肝毒性的原因尚不清楚。鉴于细胞色素P450酶在肝代谢和清除外来抗生素中起重要作用,作者研究了该植物提取物对细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的影响。     

HPLC法测定CYP 3A4酶活性的研究

目的建立一种快速、准确的以咪达唑仑作为＂探针药物＂评价或测定细胞色素酶（CYP3A4）酶活性的高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）-紫外检测（UV detection,VWD）方法。方法采用的色谱柱为依立特C18柱（4.6mm×100mm,5μm）,流速0.8ml/min,紫外检测波长254nm,柱温40℃。咪达唑仑（midazo-lam,MDZ）与大鼠肝微粒体温孵后,加入甲醇在低温下终止反应,再加入定量内标地西泮（diazepam,DZP）,涡旋后高速离心,取上清液50μl进样。结果1′-羟基咪达唑仑（1-hydroxymidazolam,1′-OHMDZ）与内标DZPtR分别为7.02min、10.51min,峰形对称且分离充分（R＆gt;1.5）,线性范围为15.6-780ng.ml-1,最低定量限（lower li mit of quantitation,LLOQ）为15.6ng.ml-1,高中低浓度提取回收率为106.3%、102.5%和102.6%,待测物的日内、日间相对标准偏差（rela-tive standard deviation, RSD）小于10％。肝微粒体Km=15μmol·L^-1,Vmax=0．08159nM·min^-1·mg^-1。结论温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外DZP及其代谢产物1′-羟基咪达唑仑的测定,可用于体外CYP3A酶活性测定或酶动力学研究。