人肝脏组织CYP3A4酶活性的高效液相色谱法测定

目的:建立测定人体肝脏组织中CYP3A4酶活性的HPLC方法。方法:取21例肝癌、16例肝血管瘤、13例胆组织病变患者的肝组织,制作肝微粒体,体外孵育后以咪达唑仑(MDZ)为探针药物,用高效液相色谱法测定CYP3A4的Km值。HPLC色谱条件:色谱柱为AngelC-18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:乙腈:水(体积比53:13:34),流速1mL/min,检测波长220nm,柱温25℃,进样量40μL。结果:1’-OHMDZ与MDZ的出峰时间分别为10.05与15.02min,分离充分(R>1.5),1’-OHMDZ质量浓度的范围为200～6000μg/L,高、中、低浓度回收率均>90%,日内、日间精密度RSD均<5%,稳定性RSD均<5%。50例患者Km值1.75～30.17μmol/L;不同性别、年龄及肝胆病变患者的Km值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该法稳定、快速、重复性好,可用于人体肝组织中CYP3A4酶活性的测定;性别、年龄及肝胆病变情况对CYP3A4酶活性无影响。