碱烧伤后抑制角膜新生血管的实验研究--血管内皮生长因子165反义RNA的作用

目的研究重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子165反义RNA(rAAN-aVEGF165)抑制碱烧伤后角膜新生血管的作用。方法30只SD大鼠随机分成2组，每组15只。实验组前房注射rAAV-aVEGF165，对照组前房注射rAAV-Lacz。30天后，碱烧伤诱导角膜新生血管，以形态学分析评价角膜新生血管的情况，Western blot评价角膜VEGF的表达。结果形态学分析显示实验组角膜新生血管得到抑制，Western blot结果显示，碱烧伤后各个时期角膜VEGF165的表达实验组明显低于对照组。结论下调VEGF能有效抑制角膜新生血管的形成．重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。     

高压氧抑制外伤性角膜血管新生的实验研究

目的 探讨高压氧对化学烧伤所致角膜血管新生（corneal neovascularization,CNV）的影响。方法 实验组与对照组各26只鼠（52眼），用硝酸银灼伤双眼角膜，实验组行高压氧治疗。伤后不同时期定量检测角膜中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth,VEGF）的积分光密度（integration optic density,IOD），计数血管内皮细胞标记指数（labeling index,LI）；伤后第7天用血管灌注、计算机图象分析测定CNV面积百分比。结果 第7天实验组CNV显著少于对照组（P＜0．01）；伤后两组角膜VEGF的IOD与血管皮细胞LI呈明显的平行关系，实验组各值均低于对照组对应值（P＜0．01或P＜0．05）。结论 高压氧治疗能降低角膜VEGF蛋白水平和血管细胞增殖水平，抑制CNV形成。     

血管内皮生长因子与角膜碱烧伤后血管新生

目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管形成中的作用。方法　利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、2 1d处死大鼠,摘除角膜作病理切片,多形核白细胞(PMN)计数;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达。结果　光镜下显示正常组PMN记数为0 . 5 0 0±0 . 62 9,烧伤后1d角膜缘处的PMN开始增多,7d时增加最明显,此后逐渐减少;免疫组化显示:VEGF在CNV中阳性表达逐渐增加,于7d组表达最明显,2 1d后几乎无表达;图像分析与免疫组化结果一致。结论　碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,并与角膜的炎性反应程度平行,PMN浸润可能是CNV形成的关键因素。     

血管内皮生长因子靶向抗体对大鼠角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的研究

目的 通过对角膜碱烧伤大鼠模型结膜下注射VEGF靶向抗体MIL60,观察其对角膜新生血管(corneal neovascularization,CoNV)生长的影响,初步探讨MIL60抑制大鼠CoNV生长的基本作用机制.方法 建立碱烧伤诱导的SD大鼠CoNV模型(右眼造模),根据碱烧伤后第1天结膜下注射的药物不同将72只大鼠随机分为:25 mg·mL-1 MIL60组、地塞米松组、MIL60溶剂组和NaCl组.观察并记录CoNV生长情况及角膜的形态变化,通过软件分析CoNV的长度及累及面积.碱烧伤后第3天、第7天、第14天、第21天和第28天分别处死动物,取角膜组织行HE染色和免疫组织化学染色,同时检测角膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、VEGF受体-1(VEGF receptor-1,VEGFR-1)、VEGFR-2和基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)蛋白的表达.结果 在各个时间点,与MIL60溶剂组和NaC1组比较,地塞米松组、25 mg·mL-1 MIL60 组CoNV面积和长度显著减少,差异均具有统计学意义(均为P＜0.01);25 mg·mL-1MIL60组的CoNV长度和面积与地塞米松组相当(均为P＞0.05).同时,MIL60还能有效降低角膜组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2以及MMP-9蛋白的表达.结论 MIL60能显著抑制角膜碱烧伤后CoNV的生长,并且还能减轻碱烧伤引起的炎症反应.     

瘦素和血管内皮生长因子在碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型中的表达

目的 观察碱烧伤后不同时期角膜的组织病理学变化,以及瘦素和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VFGF)的表达,探讨它们与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的关系.方法 使用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型,采用浸润1 mol·L-1 NaOH溶液、直径为3 mm的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央30 s,制作CNV模型.25只SD大鼠右眼为实验眼,随机分成5组,每组5眼,左眼为正常对照眼.每天用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管,分别计算新生血管长度和面积.并行HE染色和免疫组织化学检测.结果 碱烧伤后4 d、7 d、14 d、21 d,实验组CNV面积分别为:(2.55±0.15)m2、(4.15±0.36)mm2、(10.21±0.45)mm2、(8.56±0.06)mm2.免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后1 d,实验组瘦素、VEGF的表达开始增高,碱烧伤后14 d达高峰,14 d后瘦素、VEGF的表达下降,21 d后显著下降;其表达部位主要分布在形成的新生血管区域和上皮层;正常对照组瘦素可微弱表达于角膜上皮层和基质层,VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达.实验组角膜瘦素、VEGF阳性表达率较对照组明显增加(χ2=29.07,P=0.001;χ2=35.51,P=0.001),瘦素与VEGF的表达具有正相关性(r=0.95,P=0.001).结论 瘦素和VEGF表达水平与角膜新生血管的生成具有相关性,瘦素可能成为治疗CNV的靶点.     

血管内皮生长因子反义核苷酸抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的探讨重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子反义核苷酸(rAAV aVEGF165)抑制大鼠角膜新生血管(CNV)发生与发展的作用。方法三质粒共转染法构建rAAV aVEGF165和重组腺相关病毒介导的β半乳糖苷酶的结构基因(rAAV Lacz)。48只SD大鼠用抽签法随机分成实验组和对照组,每组24只,碱烧伤方法诱导CNV生成。实验组结膜囊注射rAAV aVEGF165(1010pfu/ml),对照组结膜囊注射rAAV Lacz(1010pfu/ml);5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷(X gal)组织化学染色,检测Lacz基因在结膜囊中的表达情况;碱烧伤后1、2、4、7、14及30d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况,免疫组织化学检测角膜组织中VEGF的表达。结果对照组rAAV Lacz结膜囊注射2d后,检测Lacz基因在结膜组织中的表达效率为21.36%±1.07%;30d后Lacz基因在结膜下组织中的表达效率为28.02%±1.16%。碱烧伤后结膜囊注射rAAV aVEGF165,实验组CNV面积明显减少,新生血管密度降低,VEGF在角膜组织中的表达明显降低,差异有统计学意义(F=1639.22,F=2187.16,F=719.17,P<0.01)。结论rAAV aVEGF165能显著抑制碱烧伤后CNV的形成,其机制与降低角膜组织中VEGF的表达有关,重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。     

血管内皮生长因子在鼠角膜新生血管模型的表达

正常角膜透明无血管 ,而角膜局部和全身因素均可导致角膜新生血管 (ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ,ＣＮＶ)增生。角膜致盲的主要原因为角膜新生血管性病变。ＣＮＶ可促进组织的修复 ,但严重影响角膜的透明性 ,致使视力下降 ,增加了角膜移植术后排斥反应的发生率。目前的研究表明 ,血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是作用于血管内皮细胞的多肽类因子 ,可增加毛细血管通透性 ,促进新生血管的形成[1 3 ] 。我们观察大鼠正常角膜及损伤后角膜中ＶＥＧＦ的表…     

干扰素抑制角膜新生血管的实验研究

目的 :探讨局部应用干扰素对角膜新生血管是否具有抑制作用 ,为临床治疗角膜新生血管提供依据。方法 :2 5只大耳白兔皆以双眼碱烧伤制备角膜新生血管模型 ,随机分成实验和对照二组 :实验组分成A、B、C三组 ,B、C组给予不同深度α IFN隔日结膜下注射 ,A组给予α IFN点眼。碱烧伤后第 14天各组免以墨汁灌注法显示角膜新生务管 ,进行血管图像分析 ,统计学处理 ,扫描电镜下比较两组间新生血管形态差异。结果 :结膜下注射α IFN实验和对照血管图像分析 ,统计学处理后F >F0 .0 1,P <0 . 0 1;结膜下注射α IFN使角膜新生血管形成受到抑制破坏。结论 :结膜下注射α IFN具有抑制角膜新生血管作用 ,且剂量大者抑制作用显著。但α IFN局部点眼对角膜新生血管无抑制作用。     

角膜新生淋巴管与血管内皮生长因子C

角膜新生淋巴管（CL）存在于血管化角膜上，常引起并加重角膜混浊和角膜移植排斥反应，是重要的致盲原因之一。血管内皮生长因子C（VEGF—C）是血管内皮生长因子（VEGF）家族成员之一，是VEGFR-2和VEGFR-3受体的配体。VEGF-C通过与VEGFR-3结合促进淋巴管增生，是一个特异性的淋巴管生长因子，在CL形成中起着重要的作用。就近年来CL研究进展及与VEGF—C的关系进行综述。     

兔角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系

目的:研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)的表达与角膜新生血管的关系。方法:普通家兔25只碱烧伤诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间(1,3,5,7,14d)形态学分析来评价角膜新生血管的情况,免疫组化评价角膜VEGF的表达。结果:角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始升高,伤后5d达高峰(阳性表达最强,遍布全层),伤后7dVEGF的表达开始下降,14d后显著下降。碱烧伤后,角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论:碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性,并在其中发挥了重要作用。     

VEGF、NO在角膜碱烧伤新生血管形成中的影响

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、一氧化氮(nitric oxide,NO)对角膜碱烧伤新生血管形成的影响。方法40只兔制作角膜新生血管模型,观察角膜碱烧伤后不同时期的角膜新生血管生长情况,检测角膜VEGF的表达和NO的含量,与应用一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-l-argininemethyl ester,L-NAME)组相比较。结果VEGF的表达及NO含量在伤后即迅速升高,至高峰后逐渐下降,L-NAME组的角膜新生血管面积和VEGF表达及NO的含量在伤后同期均较碱烧伤组显著下降(P<0.01,P<0.05)。烧伤后第4d、7d、14d碱烧伤组和L-NAME组的角膜新生血管面积分别为(20.93±0.65)mm2、(29.73±1.78)mm2、(48.72±2.62)mm2和(16.70±0.64)mm2、(21.87±0.97)mm2、(34.74±1.47)mm2;烧伤后第1d、4d、7d、14d2组VEGF面密度值分别为0·0812±0.0025、0.1029±0.0044、0.0764±0·0023、0.0172±0.0008和0.0516±0·0026、0.0823±0.0019、0.0363±0.0015、0·0169±0·0005;2组NO含量分别为(6.58±0.07)μmol·gprot-1、(6.90±0.03)μmol·gprot-1、(6·41±0.03)μmol·gprot-1、(6.04±0.05)μmol·gprot-1和(6.44±0.06)μmol·gprot-1、(6.61±0·05)μmol·gprot-1、(6.21±0.02)μmol·gprot-1、(5.95±0.03)μmol·gprot-1;且VEGF表达和NO含量变化呈显著正相关(r=0.962,P<0.01)。结论VEGF和NO均可能参与了角膜新生血管的形成过程;L-NAME可通过抑制NO的产生而降低VEGF的表达,从而抑制角膜新生血管的生长。     

VEGF和PEDF在实验性大鼠角膜新生血管组织中的动态表达

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepitheliumderivedfactor,PEDF)在实验性大鼠角膜新生血管(cornealneovascularization,CNV)形成过程中的动态表达及作用。方法诱导大鼠角膜碱烧伤模型,免疫组化法检测烧伤后1d、3d、5d、7d、10d、14d角膜VEGF及PEDF免疫反应;图像分析系统测定其蛋白表达。结果在CNV组织中,VEGF阳性表达于3~7d最明显,14d后表达微弱;PEDF在7~10d时表达最强烈,14d时明显下降。2种因子动态表达与CNV发展存在一定时间相关性。结论VEGF与PEDF在缺血缺氧诱导的大鼠CNV的形成过程中均有显著表达,且其动态过程与CNV的发展进程一致,二者表达失衡可能参与CNV形成及发展过程的调控。     

大鼠角膜碱烧伤后ILK和VEGF的表达与角膜新生血管的相关性研究

目的:研究大鼠角膜碱烧伤后整合素连接激酶(ILK)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与角膜新生血管(CNV)的相关性.方法:通过碱烧伤Sprague-Dawley(SD)大鼠角膜制备角膜新生血管动物模型,采用形态学方法观察碱烧伤后新生血管的生成,免疫组织化学方法检测ILK及VEGF在碱烧伤后不同时间点的表达情况.结果:ILK及VEGF在正常大鼠角膜上皮中仅有微弱表达,而在碱烧伤后各时间点的角膜上皮以及血管内皮中均有明显表达(P<0.01).碱烧伤后3~5d,可见二者阳性表达,且迅速增加;7~10d,二者表达达到高峰;14d以后二者表达逐渐减弱,与形态学观察CNV生长过程一致.即碱烧伤后3~5d新生血管生长迅速,7~10d生长达到高峰,14d以后血管开始逐渐减少退化.ILK及VEGF表达的变化均与CNV的变化呈正相关(ILK与CNV面积相关系数r=0.900,P<0.01;VEGF与CNV面积相关系数r=0.878,P<0.01),且二者之间也存在正相关性(r=0.926,P<0.01).结论:大鼠角膜碱烧伤后ILK及VEGF均有明显表达,二者作为重要的调控子共同参与了CNV的形成过程.     

兔角膜及房水中VEGF的表达与角膜新生血管形成的相关性

目的:探讨兔角膜与房水中VEGF的表达与角膜新生血管(corneal neovasucularization,CNV)形成的相关性。方法:兔33只,随机分为正常对照组、实验组和实验对照组,角膜缝线制备CNV模型,实验对照组自术后当日起隔日结膜下注射一定剂量地塞米松治疗。术后每日观察CNV生长情况并计算其面积。分别于术后1,4,7,14,21d检测角膜组织及房水中VEGF的表达情况。结果:实验对照组CNV生长情况及角膜组织炎症细胞浸润程度较实验组明显受到抑制(P<0.05)。角膜组织中VEGF主要定位于上皮细胞、基质纤维细胞、内皮细胞、浸润的炎症细胞及新生血管内皮细胞胞质中。实验组角膜组织内VEGF表达的阳性率随时间推移逐渐增高,且表达强度与CNV面积具有显著的相关性。角膜缝线后14,21d实验组VEGF表达阳性率显著高于实验对照组(P<0.05)。实验组房水中VEGF的含量随着时间的推移逐渐增长,各检测点均高于实验对照组,并且房水及角膜组织中VEGF的表达与CNV面积显著正相关。结论:CNV的形成与炎症细胞浸润密切相关,角膜及房水中的VEGF可能在CNV形成过程中发挥着重要的调控作用。地塞米松可能通过抑制炎症反应、下调VEGF等细胞因子的表达,进而抑制CNV的生长。     

大鼠角膜化学伤后PEDF和VEGF的不平衡表达

目的比较硝酸银化学伤后大鼠角膜和正常角膜色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达水平，揭示两者与角膜新生血管的相关性。方法10只大鼠左眼角膜硝酸银化学伤后为实验组，右眼为正常对照组，伤后15d行免疫组织化学法定位及Western blot定量检测样本角膜PEDF、VEGF等的表达。结果免疫组织化学检查：实验组角膜VEGF、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）强表达，PEDF未见表达或弱表达。正常组角膜PEDF高表达，VEGF弱表达，bFGF几乎不表达。Western Blot分析：实验组角膜PEDF表达明显下降（t=8．0049，P〈0．01），VEGF表达显著升高（t=48．3637，P〈0．01）。结论角膜严重化学伤后新生血管抑制因子PEDF破坏，刺激因子VEGF产生增加，PEDF／VEGF比值降低，角膜血管新生。     

角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系

目的研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor，VEGF）的表达与角膜新生血管化的关系。方法30只Sprague-Dawleg（SD）大鼠碱烧伤，诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间形态学分析来评价角膜新生血管的情况，免疫组化及Westem blot评价角膜VEGF的表达。结果角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始增高，伤后4d达高峰，伤后7d VEGF的表达下降，14d后显著下降。碱烧伤后，角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论碱烧伤后大鼠角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性，并在其中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子及其受体通道与角膜新生血管的关系研究进展

角膜新生血管(CNV)性疾病是目前致盲的主要原因之一,抑制CNV形成是挽救角膜盲患者视力,提高患者生活质量的重要途径之一.血管内皮生长因子(VEGF)及其受体通道是国内外新生血管性疾病的研究热点,是CNV形成的调节通道之一,是目前公认的较强的血管生长因子.对VEGF及其受体通道、其促血管生成机制、通过抑制VEGF及其受体通道来抑制CNV的研究现状及前景做一综述.     

卡托普利对大鼠角膜新生血管生长的影响

目的研究血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对角膜新生血管生长的影响。方法缝线诱导角膜新生血管模型，28只SD大鼠随机分为正常对照组、角膜新生血管对照组、卡托普利灌喂组、卡托普利球结膜下注射组。比较第8d各组新生血管并计算生长面积，分别检测血管内皮生长因子(VEGF)在基因和蛋白质水平的表达。结果卡托普利灌喂或球结膜下注射均显著抑制了角膜新生血管的生长，以后者更为明显；免疫组织化学染色，VEGF在正常角膜不表达或在上皮基底细胞有弱表达，新生血管对照组染色明显增强，球结膜下注射组表达明显减弱；VEGFmRNA和蛋白质水平表达有一致性。结论卡托普利球结膜下注射较全身应用更有效地抑制了角膜新生血管的生长，其抑制金属蛋白酶活性可能只是卡托普利治疗角膜新生血管机制的一部分。     

VEGF和PEDF与角膜新生血管形成的相关性

血管内皮生长因子和色素上皮细胞衍生因子是目前发现的作用最强的角膜新生血管形成促进因子和抑制因子。而新生血管和眼前段炎症反应是角膜植片发生免疫排斥反应的2个主要诱发因素。本文就角膜新生血管形成过程中,血管内皮生长因子和色素上皮细胞衍生因子的表达与炎症反应的相关性作一综述。