抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮-间充质转化的研究进展

视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是增殖性玻璃体视网膜疾病(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的主要发病机制,也是治疗脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)时,造成抗血管内皮生长因子(anti-vascular endothelial growth factor, anti-VEGF)疗效降低的重要因素。除此之外,随着细胞替代治疗作为年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)的新型治疗方式而兴起,人类胚胎干细胞(hESC-RPE)、体细胞诱导多能干细胞(iPSC-RPE)定向诱导分化的RPE细胞以及来自于流产胎儿的胎儿视网膜色素上皮细胞(fetal RPE,fRPE)逐渐受到了研究者们的关注。为了发挥最好的治疗效果,保证治疗用细胞的稳定增殖及高效分化是极其重要的。但是在传代扩增的过程中,由于上皮间充质转化的存在,导致这些细胞出现增殖困难以及再分化能力下降,从而影响治疗效果并阻碍了治疗人群的普及,使细胞替代治疗难以推广。所以,鉴于上皮间充质转化在视网膜疾病的发生和治疗中都造成了重要影响,抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化就显得尤为重要,为此,我们将阻止上皮间充质转化研究的最新进展综述如下。     

上皮-间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病机制中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是孔源性视网膜脱离及玻璃体视网膜手术后的常见并发症,其主要特征是在视网膜前形成无血管的纤维细胞膜.超微结构和免疫病理研究表明,多种细胞参与PVR的发生与发展,如视网膜色素上皮细胞、神经胶质细胞、巨噬细胞、玻璃体细胞、成纤维细胞和肌成纤维细胞等.其中,肌成纤维细胞是引起PVR增生膜收缩导致视网膜复位手术失败的主要细胞,主要来自于视网膜色素上皮细胞的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),在PVR的发生发展中具有重要作用.因此,阻断视网膜色素上皮细胞转分化为肌成纤维细胞可能成为预防和治疗PVR的一种有效的方法.     

血管内皮生长因子及上皮-间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是一种发生在孔源性视网膜脱离(RRD)自然病程中或复位手术后的严重并发症,常常导致患者视力丧失。目前,临床缺乏有效的治疗方法。PVR病理特征是多种细胞在细胞因子的作用下发生的过度炎症反应和异常增生,最终在视网膜表面形成增殖膜及进一步的牵拉性视网膜脱离(TRD)。对PVR发病机制的深入研究将有助于为其治疗寻找有前景的分子靶标。近年研究发现,血管内皮生长因子(VEGF)及视网膜色素上皮(RPE)细胞的上皮-间充质转化(EMT)在PVR发病中发挥着重要作用。本文就VEGF及RPE细胞EMT在PVR发病中的作用,以及二者的相互联动机制进行了总结,以期为PVR的治疗和临床研究提供新的思路。     

玻璃体内应用抗PVR药物缓释制剂的研究进展

玻璃体内应用抗ＰＶＲ药物缓释制剂已成为近年研究的热点。本文依照有、无载体、制剂的释药方式等特点分别介绍玻璃体内各种抗ＰＶＲ药物缓释制剂及其优缺点。其依照有、无载体可分为两类：一类是以高分子聚合物为载体的缓释制剂,另一类是无载体的抗ＰＶＲ药物联合制剂。前者按照其释药方式又可分为延缓释放制剂和控释给药制剂,后者依据其剂型不同又可分为粉剂与联合片剂、注射用粉剂与植入用片剂。它们各有所长,但均有不足之处。理想的缓释制剂应是尽量具有持效时间长、释药恒速、位置固定、自行降解、容易消毒、使用方便及良好的生物相容性。     

上皮间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病机制中的潜在作用

增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy,PVR）是一种以纤维化为特点具有潜在致盲性的眼科并发症,其病理改变是产生视网膜前膜（epiretinal membranes,ERMs）。ERMs是一种纤维增殖膜,在视网膜前后表面及玻璃体内形成,当其收缩后导致PVR的发生,最终形成视网膜皱褶和牵引视网膜脱离（tractional retinal detachment,TRD）。多种细胞类型在ERMs中已被确定,视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）在PVR的病理生理学中至关重要。大量的临床和实验证据研究表明,RPE细胞采用了成纤维细胞表型发生了上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,并且还涉及大量的细胞因子、转录因子。EMT的特点是细胞间黏附和顶面-底侧细胞极性的缺失,这增加了细胞的移行性。由此产生的细胞能够通过细胞外基质迁移和转移。细胞间黏附由连接复合体维系着,它们在维护RPE细胞表型方面起重要作用,其通过激活一些信号通路及转录因子破坏这些连接复合体并导致EMT的发生。经过EMT过程后,转化生长因子-β使RPE细胞进一步分化为肌成纤维细胞。源自RPE细胞的成纤维细胞和肌成纤维细胞可以通过细胞迁移、增殖,导致ERMs的形成,这在PVR的病程发展中起着关键性作用。     

增生性玻璃体视网膜病变中调控上皮间质转化的研究进展

增生性玻璃体视网膜病变是眼外伤和视网膜脱离常见的并发症，可造成视力不可逆转的急剧下降。手术治疗的高复发率促使学者们积极寻求有效的药物辅助治疗方法。虽然该病的发病机制至今仍未完全阐明，但研究表明，视网膜色素上皮细胞经历的上皮-间质转化过程是其发病的关键步骤。近年来学者们对上皮-间质转化在增生性玻璃体视网膜病变中所涉及的信号通路、增殖作用和纤维化、能量代谢和氧化应激、表观遗传以及中药提取物等多方面做了大量研究，本文将对此展开综述。     

缓激肽对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响

目的　制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）细胞模型,研究缓激肽（bradykinin,BK）对视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞发生EMT的影响,并探讨BK对PVR的影响机制。方法　体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,采用不同浓度转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1,TGF- β1）分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8检测细胞增殖情况,确定TGF-β1浓度及作用时间;利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和波形蛋白（Viminten）表达情况;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力。同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达。结果　TGF- β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型。当TGF-β1浓度为10 μg·L^-1、作用时间为48 h时,细胞增殖最明显。BK在TGF- β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达,升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力。这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转。TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时,pSmad3表达量升高;TGF-β1刺激前给予BK刺激,pSmad3表达量减少;加入BK前预敷HOE-140,然后给予TGF-β1刺激,BK作用减弱,pSmad3表达量升高。Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反。结论　10 μg·L^-1 TGF-β1可导致ARPE-19细胞发生EMT。BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad 7的表达、下调pSmad 3的表达,从而逆转TGF-β1诱导的EMT。提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法。     

上皮间充质转化在后囊膜下混浊中的研究进展

白内障是我国首位致盲性眼病,也是世界上多数国家致盲的主要原因,目前手术是唯一有效的治疗方法。而后囊膜下混浊即后发性白内障(PCO)是白内障术后常见的并发症,也是导致术后视力下降的主要原因。研究表明,术后残留的晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮间充质转化(EMT)在PCO的发生发展中起到了重要的作用。本文主要概述了近些年来EMT在PCO中的研究进展。     

结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。     

藤黄酸通过CYLD/NF-κB信号通路抑制高糖环境下RPE细胞上皮-间充质转化的作用

目的 基于去泛素化酶圆柱瘤蛋白/核因子κB(CYLD/NF-κB)通路,研究藤黄酸(GA)对高糖环境下视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用。方法 体外培养ARPE-19细胞,高糖诱导,实验分为NC组(含5.5 mmol·L^-1葡萄糖),HG组(含30 mmol·L^-1葡萄糖),HG+不同剂量GA组(2μmol·L^-1、4μmol·L^-1、8μmol·L^-1GA分别预处理RPE细胞1 h,加30 mmol·L^-1葡萄糖)。CCK-8检测各组RPE细胞增殖活力,免疫荧光染色检测RPE细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)表达;Western blot检测RPE细胞中α-SMA、CYLD、磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果 与NC组相比,HG组RPE细胞出现明显增殖,RPE细胞中α-SMA、p-NF-κB蛋白表达均增加,CYLD蛋白表达减少(均为P<0.01);与HG组相比,HG+不...     

Activated Blood Coagulation Factor X (FXa) Contributes to the Development of Traumatic PVR Through Promoting RPE Epithelial-Mesenchymal Transition

PurposeUncontrolled coagulation reactions contribute to pathological fibroproliferation in several organs, and yet their role in proliferative vitreoretinopathy (PVR) remains to be elucidated. In this study, we evaluated the profibrotic effects of FXa in RPE cells and in a mouse model of PVR.MethodsFXa levels in the eyes of traumatic PVR patients and rabbit models of mechanical ocular trauma was measured by ELISA and immunohistochemistry. FXa-induced RPE EMT was assessed by examining cell proliferation, migration, tight junction changes, and expression of fibrotic markers. For in vivo study, FXa was injected into dispase-injured eyes, then intraocular fibrosis was evaluated by histological analysis and Western blotting. The therapeutic effect of FXa inhibitor was also examined in PVR mouse models.ResultsVitreous FXa were higher in patients with traumatic PVR compared to patients with macular hole. Moreover, expressions of FXa and PAR1 were found in the epiretinal membranes from traumatic PVR patients. Vitreous FXa were markedly increased after mechanical ocular trauma in rabbits. In vitro, FXa stimulated RPE EMT characterized as ZO-1 disruption, compromised cell polarity, and increased fibronectin expressions. Co-injection of FXa and dispase in mice induced more severely damaged retinal structures, and increased α-SMA expressions than FXa or dispase treatment alone. Oral FXa or thrombin inhibitors significantly blocked intraocular fibrosis in PVR mouse models. FXa promoted phospho-activation of p38 in ARPE19 cells, which was dependent on PAR1. Moreover, TGF-βR inhibitor also significantly alleviated FXa-induced intraocular fibrosis in mice.ConclusionsFXa promotes intraocular fibrosis in mice via mechanisms involving RPE activation.     

Immunocytochemical Study of Cells in the Vitreous of Proliferative Virteoretretinopathy

Purpose: To identify the cellular components of vitreous samples obtained during vit-rectomy for proliferative vitreoretinopathy(PVR).Methods: With the use of three intermediate filament (IF) proteins, vimentin, glialfibrillary acidic protein (GFAP), and cytokeratin (CK), cytocentrifuge slides of 14fresh vitreous aspirates were detected with immunohistochemical technique.Results: All the specimens contained epithelial-like proliferative cells with or withoutpigment and some membrane-like pieces. Immunocytochemical staining showed that76.0-90.0% cells stained for CK, 17.4-29.6% cells expressed GFAP, and 80.1-91.0% cells were positive for vimentin.Conclusions : Majority of cells in the vitreous samples originated from retinal pigmentepithelial cells (RPE) and glial cells in PVR. Expression of IF proteins may be determinedby tissue of origin and local microenvironment. Eye Science 1999 ; 15; 13 - 16.     

Artesunate inhibits proliferation and migration of RPE cells and TGF-β2 mediated epithelial mesenchymal transition by suppressing PI3K/AKT pathway

AIMTo study the braking effectiveness of artesunate on transforming growth factor (TGF)-β2 mediated epithelial-mesenchymal transition (EMT) in retinal pigment epithelium (RPE) in vitro.METHODSThe fostered ARPE-19 cells were processed with artesunate alone or combined with the TGF-β2. The CCK-8 examination was utilized to test the cell propagation. Cell migration was detected by scratch as well as the Transwell examination. The EMT characters and activation of PI3K/Akt signal channel were estimated by Western blotting and immunofluorescence. The Western blotting was utilized in order to confirm the vitreous of controls as well as patients with proliferative vitreoretinopathy (PVR) were collected and the levels of PI3K, phospho-PI3K, Akt.RESULTSDisposal of ARPE-19 cells with artesunate (50-150 µmol/L) obviously suppressed their propagation and immigration, which dependent on the concentration and time. Artesunate suppressed the EMT which was induced by TGF-β2 in ARPE-19 cells through sustaining the expression of vimentin and α-SMA through the suppression of PI3K, phospho-PI3K, phospho-Akt and Akt. Levels of PI3K, phospho-PI3K, AKT and phospho-Akt was increased in the vitreous in PVR (P<0.05).CONCLUSIONSuch findings indicate that PI3K/Akt signal channel is highly activated in vitreous of PVR. Artesuante is an operative depressor of the propagation, immigration and TGF-β2-mediated EMT of ARPE-19 cells by reduced the expression of PI3K/Akt channel.     

视网膜色素上皮细胞在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是在炎症和免疫功能细胞及多种活化因子对眼内细胞修复反应的调控过程中,由于过度促进细胞增殖、移行以及由细胞介导的胶原收缩而形成的。参与PVR的细胞目前已知的有5种,其中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞是最主要的,本文将影响RPE细胞功能的各种影响因素及PVR的治疗进展作一综述。     

视网膜下液对培养的人眼视网膜色素上皮细胞和成纤维细胞增殖作用的影响

目的：了解不同程度增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的视网膜下液（SRF）对视网膜色素上皮细胞（RPE）、成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：用溴标法和MTT法测定不同程度PVR的SRF对RPE和FB增殖的促进作用。结果：几乎所有的SRF都具有促进细胞增殖的作用,用1：10比例稀释,PVR程度为PVR＜C1,PVRC1,PVR＞C13组。SRF作用24h后RPE的增殖率分别为对照组的128.5％,139.8％,156.8％,FB的增殖率分别为对照组的126.3％,143.1％及172.3％。结论：SRF液促进细胞增殖的作用随着PVR程度的加重而增强。     

维生素E对IL-6作用的视网膜色素上皮细胞增生及胶原合成的影响

目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生及胶原合成的作用，以及维生素E对这种作用的影响。方法 采用放射自显影的方法测定RPE细胞增生和胶原合成。用含IL-6和不同浓度维生素E的EMDM培养基培养RPE细胞，加入氚标记的胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)和氚标记的脯氩酸(^3H-proline)，测定每分钟闪烁值cpm，反映^3H-TdR和^3H-proline的掺入量，即RPE细胞增殖和胶原合成情况。结果 IL-6与RPE细胞共同孵育后，^3H-TdR和^3H-proline的掺入量较单纯RPE细胞培养组明显升高，提示IL-6促进RPE细胞增牛明显，胶原合成显著增加：不同浓度的维生素E和IL-6共同培养的RPE细胞^3H-TdR和^3H-proline的掺入量较单纯IL-6培养的RPE细胞组明显降低。且维生素E浓度越高，^3H-TdR和^3H-proline的掺入量越低，提示维生素E抑制IL-6引起的RPE细胞的增生和胶原合成，且抑制作用随浓度的增加而增加。结论 IL-6对RPE细胞的增生和胶原合成有促进作用，维生素E抑制IL-6引起的RPE细胞的增生和胶原合成，抑制作用与维生素E浓度成正比。     

微小RNA调控增生性玻璃体视网膜病变的研究进展

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是一个眼部组织的创伤修复和纤维化过程,其特征性改变是在玻璃体腔和(或)视网膜表面形成由细胞外基质(ECM)和各种类型的细胞组成的视网膜前膜(ERM),ERM收缩形成视网膜皱褶,并牵拉视网膜引起视网膜脱离(RD)。视网膜色素上皮(RPE)细胞发生上皮-间质转化(EMT)和ECM累积是ERM形成的重要病理机制。转化生长因子-β(TGF-β)等诱导RPE细胞发生EMT,细胞失去上皮表型、细胞间黏附减弱和表达间充质表型。由间充质细胞分化而成的成纤维细胞样细胞分泌ECM等成分,与神经胶质细胞、成纤维细胞等共同形成ERM。RPE细胞的EMT过程受许多细胞因子/生长因子、转录因子及微小RNA(microRNA,miRNA)等的调控,研究证明miRNA是一类新型且功能强大的调节基因,在PVR的EMT过程中起着重要调控作用。本文将近年来miRNA调控PVR的作用机制和干预性治疗研究进行综述。     

IL-6对培养PVR的视网膜色素上皮细胞生长的影响及地塞米松的调节作用

目的　探讨白细胞介素 6(IL 6)对增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)的视网膜色素上皮 (RPE)细胞体外生长的影响 ,以及地塞米松对这种增生的调节作用。方法　将地塞米松加入体积比为 10 %PVR的玻璃体切割物培养的RPE细胞培养板中 ,放射免疫学方法检测IL 6的分泌 ;将IL 6、PVR的玻璃体切割物和RPE细胞共同培养 ,测定掺入的3 H TdR和3 H proline的cpm值 ;用不同浓度的地塞米松、PVR玻璃体切割物和RPE细胞共同培养 ,测定掺入的 3 H TdR和3 H proline的cpm的值。 结果　加入地塞米松培养PVR的RPE细胞合成IL 6的量减少 ;IL 6和PVR的RPE细胞共同孵育后 ,细胞增殖明显 ,胶原合成增强 ;地塞米松抑制培养PVR的RPE细胞增殖和胶原合成 ,且随浓度的增加 ,抑制作用增强。结论　IL 6促进PVR培养的RPE细胞增殖和胶原的合成 ,地塞米松抑制RPE细胞增殖和胶原合成 ,一定程度是通过抑制IL 6合成而发挥作用。     

金丝桃素抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的初步研究

目的研究蛋白激酶C特异性抑制剂—金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment ep-ithelialcells,RPE细胞)增殖的影响,探讨它防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的细胞机制。方法用含0.5～5μM金丝桃素血清培养人RPE细胞,用细胞计数法、MTT比色法测定金丝桃素对RPE细胞增殖的影响。结果细胞计数法显示金丝桃素药物作用3d后,能抑制RPE细胞增殖,呈明显的剂量依赖性。四唑盐(tetra-zolium salt)MTT比色实验显示金丝桃素对PMA诱导的RPE细胞增殖有剂量和时间依赖性抑制。结论金丝桃素对体外培养的RPE细胞有剂量和时间依赖性抗增殖效果,具有潜在的治疗PVR前景。