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1.
目的克隆人的高迁移率族蛋白B1(HMGBl)基因,插入pc-DNA3载体中并检测其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)报告基因活性的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出HMGBl基因,插入载体pe-DNA3中,确定所扩增的DNA序列;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)在293T细胞中检测其表达;应用报告基因方法检测其对TNF-α报告基因表达的影响。结果酶切和测序结果表明扩增的HMGBl序列正确,大小为648bp。在293T细胞中正确表达相对分子质量约24000的HMGBl蛋白。下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,构建的真核表达载体在内毒素刺激后以先增加后降低的方式影响TNF-α的活性,且对从95-120长度的TNF-α报告基因活性影响最明显。结论HMGBl以先增加后降低的方式影响TNF-α基因的表达,且主要通过26个碱基大小的片段发挥作用。 相似文献
2.
3.
目的:建立同时测定何首乌中10种核苷类成分的QTRAP UPLC-MS/MS分析方法,分析比较生何首乌和制何首乌中核苷类成分的差异。方法:采用QTRAP UPLC-MS/MS技术,Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm),流动相甲醇-5 mmol·L-1乙酸铵(含0.1%冰乙酸),0.4 m L·min-1梯度洗脱,采用正离子多反应监测模式测定何首乌商品药材中10种核苷类成分的含量。结果:10种核苷类成分具有良好的线性关系,相关系数均0.99;何首乌商品药材中核苷类成分尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胞苷含量均较高;生何首乌与制何首乌中核苷类成分含量差异明显。结论:该方法简便、灵敏、准确。该研究为何首乌药材内在质量的评价和控制提供可靠的检测方法。 相似文献
4.
5.
张瑞 《中华临床医学研究杂志》2005,11(3):383-384
线粒体(mitochondria)内含有它自身的DNA,与同细胞内核的DNA在碱基成分上不同,即鸟嘌呤和胞嘧啶碱基对含量有别,表现为裸露的环状DNA。此外,线粒体中还有RNA(mRNA tRNA rRNA),核糖体,氨基酸活化酶等。说明线粒体具有自我繁殖所需的基本成分,它是一个含有DNA并能进行转录和翻译的细胞器,因此,有人将一体DNA称为是真核细胞的第二遗传系统。 相似文献
6.
幽门螺杆菌与DNA错配修复系统 总被引:1,自引:0,他引:1
H pylori感染导致了真核细胞错配修复(mismatch repair,MMR)系统的缺陷,在胃上皮细胞中引起微卫星不稳定(micrsatellite instable,MSI),使相关基因自发突变率增加,最终可导致机体对肿瘤的易感.DNA错配修复功能通过纠正复制或重组过程中出现的错配碱基、诱导DNA严重受损的细胞发生凋亡,从而阻止突变细胞过度增殖以及肿瘤的发生.在错配修复基因突变中,绝大部分是点突变,以单个碱基的替代大于碱基的缺失或插入,其中hMLH1和hMSH2基因是DNA错配修复系统的主要控制基因.研究表明H pylori的感染及其导致的错配修复系统功能缺陷在胃癌的发生、发展中起着主导作用. 相似文献
7.
目的探讨内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因碱基重复序列(VNTR)多态性与短暂性脑缺血发作(TIA)的关系. 方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,检测112例TIA患者的基因型,并与104例对照组比较. 结果老年TIA组和非老年TIA组eNOS基因ab基因型的频率差异无统计学意义(分别为26.2%和23.5%)(P>0.05),对照组中老年组和非老年组eNOS基因ab基因型的频率差异无统计学意义(分别为15.7%和16.9%)(P>0.05), TIA组eNOS基因ab基因型的频率(25.0%)明显高于对照组(16.3%),a等位基因的频率(14.3%)也明显高于对照组(9.2%),且差异有统计学意义(P<0.05).颈内动脉系统TIA组eNOS基因ab基因型的频率(28.8%)和a等位基因的频率(17.4%)均明显高于椎基底动脉系统TIA组(19.5%和9.7%)和对照组(16.3%和9.2%),P<0.05. 结论 ab基因型与颈内动脉系统TIA有相关性. 相似文献
8.
9.
目的探讨一个遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者及其家系成员中FⅪ基因突变方法用自动凝血仪检测患者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT),一期法检测血浆F Ⅺ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅫ活性;采用ELISA法检测血浆FⅪ:Ag。以外周血中抽提的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅪ基因的所有外显子及其侧翼序列,用直接测序的方法查找突变以RT-PCR检测患者FⅪ mRNA的水平,分析突变对FⅪ mRNA剪切造成的影响。结果患者及部分家系成员APTT延长,先证者及其兄血浆FⅪ:C、FⅪ:Ag均低于正常人的10%,其父母血浆FⅪ:C、FⅪ:Ag均低于正常人的.50%。基因测序结果表明FⅪ基因内含子10 3’端4个碱基缺失(IVs J-4delgttg),先证者及其兄为纯合突变,其父母及侄女、外甥均为杂合型。在患者外周血中未能检测到FFⅪ mRNA。结论该突变导致FⅪ mRNA不能正常剪切,引起FⅪ转录本质和量的改变,不能合成正常的F Ⅺ,是导致该遗传性F Ⅺ缺陷症家系成员发病的分子遗传学基础。 相似文献
10.
目的 通过对"亚洲型"DEL基因第7内含子全长序列测序分析,探讨其Mrna含有来自第7内含子170 bp片段的分子机制.方法 根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank BN000065的RHD基因序列,设计4对特异性寡核苷酸引物,分四段分别扩增RHD基因第7内含子.测序分析1名正常Rh阳性个体和2名RhDel表型个体(携带RHD1227A等位基因)的RHD第7内含子全长序列,然后通过NCBI Basic BLAST与参考序列(GenBank BN000065)进行比对,并作相互比对.结果 发现3名个体第7内含子共观察到33处碱基变异(GenBank EU372940~2),其中8处变异相同;另有2处碱基变异仅在DEL样本中检出,在正常Rh阳性个体中未发现.结论 这些变异不足以解释以往发现的DEL Mrna存在170 bp来自第7内含子序列而正常D阳性个体却不存在的现象,但测序结果 提示该片段二侧的AG-GT可能参与这一分子事件的形成,因其正好与第7内含子二侧的GT-AG拼接位点协同将内含子一分为二,但具体机制可能十分复杂. 相似文献