桑黄多糖缓解日本血吸虫感染小鼠氧化应激及 肝纤维化的实验研究

目的　探讨桑黄醇提多糖（PPI）对日本血吸虫感染小鼠氧化应激、肝肉芽肿和肝纤维化的改善作用。方法　采用日本血吸虫尾蚴玻片贴腹感染法建立日本血吸虫肝病小鼠模型。设健康对照组（A组）、感染对照组（B组）、PPI单独治疗组（C组）、吡喹酮单独治疗组（D组）和PPI加吡喹酮混合治疗组（E组），每组各10只小鼠；除A组外，其他各组每只小鼠感染（30 ± 2）条尾蚴。自感染后42 d开始，D、E组小鼠灌胃给予500 mg/kg吡喹酮，连续2 d；C、E组给予400 mg/kg PPI灌胃，连续给药30 d。HE染色观察小鼠肝组织病理学改变，测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）及小鼠肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?PX）、谷胱甘肽还原酶（GSH?R）、谷胱甘肽（GSH）含量，采用免疫组化技术检测小鼠肝组织中转化生长因子?β（TGF?β）、α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达水平，采用实时荧光定量PCR检测Nrf2、Gsta4基因表达水平。结果　日本血吸虫感染但未予治疗小鼠出现典型血吸虫病肝病病理改变，PPI干预后能有效减轻小鼠肝虫卵肉芽肿及胶原沉积。血吸虫病肝病小鼠肝脏脂质过氧化加剧，诱导了氧化应激，小鼠血清中MDA含量增加，GSH和各种抗氧化酶含量下降。与B组相比，PPI治疗抑制了脂质过氧化，提高了GSH含量，恢复了抗氧化酶活性。此外，PPI治疗可抑制TGF?β信号通路，提升Nrf2、Gsta4基因表达水平。结论　PPI在治疗血吸虫病肝纤维化方面发挥重要作用，其内在机制可能是通过上调Nrf2和Gsta4基因表达、改善氧化应激损伤，从而抑制肝脏虫卵肉芽肿形成和肝纤维化。     

桑黄液体发酵生产多糖工艺研究

目的 考察不同培养条件对桑黄菌液体发酵生产多糖的影响.方法 通过正交试验设计,对不同培养基种类、起始pH值、发酵温度和摇床转速进行优化,在此工艺基础上,采用5L发酵罐进行发酵放大试验.结果 采用添加0.3 9/L维生素B1和0.3 g/L维生素B2的PD培养基,起始pH值5,发酵温度28℃,摇床转速180 r/min条件下,桑黄菌摇瓶发酵液中胞内多糖和胞外多糖分别为5.80、2.37 g/L;5 L发酵罐发酵液中桑黄胞内多糖和胞外多糖分别为5.85、2.30 g/L.结论 桑黄液体发酵可获得桑黄多糖,本实验结果为桑黄液体发酵工业化生产提供参考.     

桑黄黄酮提取工艺的研究

目的研究桑黄黄酮最佳提取工艺。方法采用单因素和正交实验选出桑黄黄酮最佳提取工艺。结果确定桑黄黄酮最佳提取工艺参数为:温度80℃,提取8 h,料液比1∶20;乙醇质量分数70%。结论在此条件下黄酮的提取可达到(15.502 7±0.331 8)mg/g。     

药用真菌桑黄菌丝体多糖提取工艺的研究

目的筛选药用真菌桑黄菌丝体多糖的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,对影响桑黄菌丝体多糖的提取工艺因素进行了研究。以煎煮液中水溶性多糖的含量为对照,用苯酚一硫酸法对煎煮液中的桑黄多糖进行含量测定。结果桑黄菌丝体多糖的最佳提取工艺为：用50倍量水,温度为90℃,煎煮2h／次,共2次。结论用此工艺提取水溶性多糖简单、易行,方法重现性好,适合于工业化生产来提取多糖。     

桑黄肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

目的 对桑黄肌动蛋白（Actin）基因进行克隆及序列分析。方法 搜索网上已知数据库中Actin基因,与本实验室测得的桑黄转录组数据进行生物信息学比对,找到转录组数据中与Actin相似性最高的片段,并根据其设计引物,提取桑黄菌丝体总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段并对PCR产物进行测序。结果 得到一段839 bp的序列,序列分析表明,该片段编码279个氨基酸,与其他物种Actin基因核苷酸序列同源性在87%以上。结论 首次从桑黄中克隆出了Actin基因,为有效利用该基因奠定了基础。     

桑黄菌发酵过程中酶活性的变化

目的 研究桑黄菌发酵过程中酶活性的变化及其和胞外多糖量的关系。方法 在发酵过程中测定原始菌株和变异菌株的羧甲基纤维素酶、滤纸酶、木质素过氧化物酶（LiP）、锰过氧化物酶（MnP）、漆酶（Lac）活性变化及培养基中胞外多糖量变化。结果 2菌株的羧甲基纤维素酶和滤纸酶的活性变化呈单峰曲线,分别在第4天和第6天达到峰值;原始菌株和变异菌株的LiP、锰过氧化物酶和漆酶活性的变化呈双峰曲线,且原始菌株和变异菌株LiP的酶促反应米氏常数（K_m）分别为25.96、27.07 μg/mL;MnP的K_m分别为13.28、13.49 mmol/mL;Lac的K_m分别为0.12、0.21 mmol/mL;培养基中多糖量前期快速下降,10 d后趋于稳定。结论 桑黄菌发酵时能产生较全面的分解木质素和纤维素的酶系统,原始菌株和变异菌株产生的LiP和MnP为同种酶,Lac为同功酶。桑黄菌胞外酶活性变化和培养基中胞外多糖量变化有一定关系。     

药用真菌桑黄的研究进展

桑黄(phellinus)作为寄生在桑树上的真菌,在2 000多年前就有用作珍贵中药材的记载,在调节机体免疫、延缓衰老和抗肿瘤等方面具有良好的功效。该文综合近几年国内外有关桑黄的分类学问题、活性成分、药效及其作用机制、提取工艺等方面的研究进展进行阐述,并对目前存在的问题及今后的研究方向进行了探讨。     

桑黄正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的 探讨桑黄正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Phellinus igniarius decoction,BAEP）体外对白念珠菌（Candida albicans）标准株SC5314生物膜形成的影响。 方法 采用二倍稀释法测定BAEP对白念珠菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和抑制50%生物膜形成的最低浓度(sessile minimal inhibitory concentration,SMIC50);采用XTT还原法测定BAEP对白念珠菌生物膜代谢的影响;固体培养基上观察BAEP对白念珠菌菌落形态的影响;倒置显微镜与荧光显微镜下分别观察BAEP对白念珠菌生物膜形态与活性的影响;扫描电镜下观察BAEP对白念珠菌生物膜形态结构的影响;实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测生物膜相关基因ALS1和HWP1的转录水平变化。结果 BAEP对白念珠菌生物膜的SMIC50为1 024 μg/mL;菌落形态实验观察结果显示,1 024 μg/mL BAEP可影响白念珠菌菌落;倒置显微镜、荧光显微镜下显示1 024 μg/mL BAEP可抑制白念珠菌生物膜的形态和活性;扫描电镜下显示1 024 μg/mL BAEP对白念珠菌生物膜有明显的抑制作用;qRT-PCR检测结果显示BAEP可明显下调HWP1的表达水平和上调ALS1基因的表达水平。结论 BAEP对白念珠菌SC5314生物膜的形成有一定的抑制作用。     

RP-HPLC法测定番石榴叶中桑黄素来苏糖苷和桑黄素阿拉伯糖苷的含量

目的:建立番石榴叶中桑黄素来苏糖苷和桑黄素阿拉伯糖苷的含量测定方法。方法:用DiamonsilC₁₈色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液(35∶65)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为355nm。结果:桑黄素来苏糖苷在0.06132～0.14308μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);桑黄素阿拉伯糖苷在0.05844～0.13636μg范围内呈良好的线性关系(r=1),平均回收率分别为98.6%和100.7%,RSD分别为1.0%和1.7%。结论:本方法对番石榴叶质量标准的制定具有很好的参考价值。     

桑黄对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用

目的 :研究桑黄对肝损伤的保护作用。方法 :以四氯化碳诱导大鼠肝损伤 ,观察桑黄对血清学和组织学指标的影响。结果 :桑黄治疗组大鼠肝细胞变性明显减轻 ,肝组织结构完好 ;血清氨基酸转移酶水平显著降低 ,蛋白合成能力增强 ;血清活性氧显著减少 ,肝组织超氧化物歧化酶活力提高 ;血清白细胞介素 -4水平降低 ,γ -干扰素显著增高。结论 :桑黄具有保护肝细胞功能 ,抗脂质过氧化和调节炎症因子水平为其作用机理。