雷公藤红素对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响 及作用机制研究

目的 探讨雷公藤红素对人卵巢癌细胞株HEYa8 增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 采 用MTT 法检测不同浓度和时间雷公藤红素对HEYa8 细胞增殖的影响。将HEYa8 细胞随机分为：雷公藤 红素组（0.4 mg/L,培养24 h）和对照组（未处理）。检测两组细胞的生长迁移情况、细胞分裂指数及细胞 数量。利用Western blotting 检测雷公藤红素激活凋亡并抑制肿瘤细胞的现象及分子机制。结果 雷公藤红 素在浓度为0.4 mg/L 培养24 h 时效果最佳。雷公藤红素组侵袭细胞、细胞分裂指数、细胞数量及CD44 及GSDMS-N 双阳性细胞占总细胞百分比较对照组低（P <0.05）,凋亡相关蛋白相对表达量较对照组高 （P <0.05）。雷公藤红素组PI3K/Akt 信号通路关键分子的蛋白表达量较对照组低（P <0.05）。结论 雷公藤 红素能够抑制HEYa8 细胞生长并诱导细胞凋亡,其分子机制可能与PI3K/Akt 信号通路被抑制有关。     

HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量

目的建立高效液相色谱法测定独子藤中雷公藤红素的含量,为雷公藤红素的药用植物资源开发提供依据。方法采用Supelco Discovery C18柱（25 cm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-5%（体积分数）H3PO4水溶液（体积比80∶20）,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为426 nm。结果雷公藤红素在40～200μg.mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 1）。独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为0.055 5%,雷公藤红素的平均回收率为97.6%,RSD=1.78%（n=6）。结论该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于独子藤中雷公藤红素的含量测定;独子藤中雷公藤红素含量较高,可作为雷公藤红素的资源植物加以开发利用。     

雷公藤红素对狼疮鼠肾组织Ⅲ型胶原和层粘素的影响

目的 :研究雷公藤红素 (Tripterine)对狼疮小鼠肾小球硬化的防治作用。　 方法 :在不同发病时间、用不同剂量的雷公藤红素对BWF1小鼠进行腹腔注射。每 2周测鼠 2 4h尿蛋白量及血清抗dsDNA抗体水平。 2 0周后检测鼠肾组织Ⅲ型胶原 (collagentypeⅢ ,ColⅢ )、层粘素 (laminin ,LM)、基质金属蛋白酶 (MMP) 1及其组织抑制剂 (TIMP) 1、转化生长因子 (transforminggrowthfactor,TGF) β1mRNA的表达。　 结果 :①雷公藤红素抑制小鼠蛋白尿及血清抗dsDNA抗体水平 ,增加肾局部MMP 1而减少ColⅢ、LM、TIMP 1及TGF β1mRNA的表达 ,改善鼠肾组织学病变。②蛋白尿发生前使用雷公藤红素较蛋白尿发生后使用疗效更显著。③蛋白尿发生前使用雷公藤红素 3mg/ (kg·wk)和 6mg/ (kg·wk)的疗效无统计学差异。　 结论 :雷公藤红素对该狼疮模型的肾小球硬化具有保护作用。其降低肾脏ColⅢ及LM沉积可能是通过增加小鼠肾局部MMP 1而抑制TGF β1及TIMP 1的表达而实现的     

雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ca2+和H+浓度的影响

目的；观察雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度的影响。方法：采用荧光染色法，参激光扫描焦显微镜动态研究了不同浓度的胎牛血清对单个血管平滑肌内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度变化的影响效应。结果：３０％胎牛血清可以引起细胞内一快速的，持续的游离Ｃａ＾２＋浓度升高，而３０％胎牛血清加０．３ｍｇ／Ｌ雷公藤红素则可以产生抑制细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度升高的效应；     

雷公藤红素抑制磨损颗粒诱导细胞炎症反应的研究

【摘要】目的 通过体外细胞培养,探讨雷公藤红素抑制人工关节磨损颗粒诱导的无菌性炎症反应的效果。方法 使用真空球磨法制备人工关节磨损颗粒并用无血清培养基配制颗粒悬液。使用RAW264.7巨噬细胞进行传代培养,并将其按不同处理因素随机分成4组：空白对照组（A组）、磨损颗粒组（B组）、磨损颗粒+雷公藤红素组（C组）和雷公藤红素组（D组）。分组处理24h后行CCK-8毒性检测;通过ELISA检测各组肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β表达情况;RT-PCR检测TNF-α、IL-1β和核因子（NF）-κB的基因表达量;Western Blot在蛋白水平检测NF-κB的表达情况。结果 1mg/L雷公藤红素的细胞毒性作用不明显;磨损颗粒组促炎症因子TNF-α、IL-1β的表达和NF-κB的激活明显高于空白对照组（P＜0.05）,加入雷公藤红素后以上各指标表达均明显降低（P＜0.05）。结论 雷公藤红素可在基因和蛋白水平抑制磨损颗粒诱导RAW264.7细胞促炎症因子的表达,并可抑制NF-κB通路的激活。     

雷公藤红素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中NF-κB和Eotaxin表达的影响

目的:观察雷公藤红素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中核因子-κB(NF-κB)和Eotaxin的作用,以及它们之间的关系,从而探讨雷公藤红素治疗变应性鼻炎的可能机制。方法:健康SD大鼠40只随机分为4组:卵清蛋白(OVA)致敏组,雷公藤红素处理组,地塞米松处理组和生理盐水组。以OVA致敏法建立变应性鼻炎大鼠模型,苏木精-伊红染色观察鼻黏膜组织病理学变化,免疫组织化学SP法测定鼻黏膜组织中NF-κB、Eotaxin的表达。结果:生理盐水组病理学未见异常表现;雷公藤红素处理组和地塞米松处理组可见鼻黏膜轻度肿胀,少量炎性细胞浸润;OVA致敏组可见鼻黏膜高度肿胀,大量炎性细胞浸润。OVA致敏组与其他3组比较,NF-κB和Eotaxin表达强度差异均有统计学意义(均P<0.01);雷公藤红素处理组和地塞米松处理组间差异无统计学意义(P>0.05);OVA致敏组大鼠鼻黏膜组织中NF-κB的表达强度与Eotaxin呈正相关(r=0.908,P<0.01)。结论:雷公藤红素可通过抑制鼻黏膜NF-κB的活性抑制Eotaxin的表达。     

雷公藤红素纳米结构脂质载体的制备及其体外透皮研究

目的 制备雷公藤红素纳米结构脂质载体(nanostructured lipid carriers,NLC),考察其性质并进行体外透皮研究.方法 采用溶剂挥散法制备雷公藤红素NLC,并对其微观形态、粒径、Zeta电位、包封率及体外释放行为进行研究,用Franz扩散池考察其透皮吸收行为,HPLC法测定雷公藤红素的量.结果 雷公藤红素NLC平均粒径为(132.3±25) nm,Zeta电位为(-26.5±3.4)mV,包封率为(88.64±0.37)％,NLC的微观形貌呈类球形粒子.雷公藤红素NLC中药物的体外释放符合Higuchi方程(Q=0.096 2 t1/2-0.040 6,r=0.995 1),其12h药物累积透皮量虽低于雷公藤红素溶液,但皮肤滞留量是雷公藤红素溶液的11.59倍.结论 所制备的雷公藤红素NLC可以显著增加药物在皮肤中的滞留量,有望开发为雷公藤红素的新型局部给药制剂.     

雷公藤红素对高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的观察雷公藤红素对高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞VEGF和PEDF表达的影响。方法将体外培养的大鼠视网膜血管内皮细胞分为空白对照组、高糖组、高糖+雷公藤红素(0.05mg·L-1)组,进行相应处理后分别用免疫细胞化学及ELISA法检测细胞中VEGF和PEDF的表达。结果免疫细胞化学灰度值测定,空白组、高糖组及高糖+雷公藤红素组VEGF表达分别为74.40±4.19、110.12±7.32、78.11±5.81,PEDF表达量分别为124.65±6.01、88.73±7.84、93.31±5.67;ELISA结果显示空白组、高糖组及高糖+雷公藤红素组VEGF表达量分别为(155.21±13.36)ng·L-1、(237.69±19.41)ng·L-1、(168.57±26.32)ng·L-1,PEDF表达量分别为(251.37±17.95)ng·L-1、(178.35±25.36)ng·L-1、(191.58±31.37)ng·L-1,与正常对照组相比,高糖组VEGF表达增高(P<0.05),PEDF表达减少(P<0.05);与高糖组相比,高糖+雷公藤红素组VEGF表达减少(P<0.05),PEDF表达无明显差异性(P>0.05)。结论雷公藤红素能减少高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞中VEGF表达,对PEDF表达的影响不明显。     

Tripterine prevents endothelial barrier dysfunction by inhibiting endogenous peroxynitrite formation

Background and purpose:

Tripterine is an inhibitor of heat shock protein 90 and an active component of Tripterygium wilfordii Hook F., which is used in traditional Chinese medicine to treat inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. We hypothesized that tripterine inhibits endogenous peroxynitrite formation and thereby prevents endothelial barrier dysfunction.

Experimental approach:

Effects of tripterine were investigated on endothelial barrier function, inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression, nicotinamide adenine dinucleotide phasphate (NADPH) oxidase activity, 3-nitrotyrosine formation, protein phosphatase type 2A (PP2A) activity, activation of extracellular-regulated kinase (ERK), c-Jun terminal kinase (JNK) and Janus kinase (Jak2), and degradation of IκB in microvascular endothelial cells exposed to pro-inflammatory stimulus [lipopolysaccharide (LPS) + interferon γ (IFNγ)] and on vascular permeability in air pouches of mice injected with LPS + IFNγ.

Key results:

LPS + IFNγ caused an increase in monolayer permeability, induction of iNOS and NADPH oxidase type 1 (Nox1) proteins, formation of superoxide, nitric oxide and 3-nitrotyrosine, and increase in PP2A activity in endothelial cells. These effects of LPS + IFNγ were diminished by tripterine (50–200 nM). Further, LPS + IFNγ-induced expression of iNOS and Nox1 was attenuated by the mitogen-activated protein kinase kinase 1/2 (MEK1/2) inhibitor PD98059, the JNK inhibitor SP600125, the Jak2 inhibitor AG490 and the NFκB inhibitor MG132, but not by the p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor SB203580. LPS + IFNγ stimulated phosphorylation of ERK, JNK and Jak2, and degradation of IκB, but only Jak2 phosphorylation was sensitive to tripterine (50–200 nM). Further, tripterine diminished the increased vascular permeability in inflamed air pouches.

Conclusion and implications:

Our results indicate that, by preventing Jak2-dependent induction of iNOS and Nox1, tripterine inhibits peroxynitrite precursor synthesis, attenuates the increased activity of PP2A and consequently protects endothelial barrier function.     

HPLC法测定雷公藤及其片剂中雷公藤红素

目的建立雷公藤及其片剂中雷公藤红素的HPLC测定方法。方法HPLC外标法。A g ilen t Zorbax SC-C18柱为色谱柱,甲醇-1%醋酸溶液(87∶13)为流动相,检测波长为425 nm,体积流量为1.0 mL/m in。结果雷公藤红素线性范围为40.96~204.8μg/mL(r=0.999 6),药材的平均回收率为98.37%,RSD为1.01%(n=9),制剂的平均回收率为98.59%,RSD为1.18%(n=9)。结论本方法操作简便、准确,可作为雷公藤类药物中雷公藤红素的定量分析方法。