二氢杨梅素通过ERK/VEGFA/VEGFR2通路对体内外胃癌血管生成的影响

背景与目的：二氢杨梅素（dihydromyricetin，DHM）通过抑制细胞周期、促进细胞凋亡和抑制新生血管生成等机制发挥抗肿瘤作用。探讨DHM对胃癌的抗癌作用，并研究其可能作用机制。方法：不同剂量DHM作用体外人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）和胃癌细胞系MKN28后，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法筛选无毒剂量的DHM，Transwell小室实验测定细胞侵袭；小管形成实验测定HUVEC体外血管生成能力；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A, VEGFA）、phospho-血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR）2、细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、phospho-c-Jun氨基端激酶（c-Jun NH2-terminal kinase，JNK）和phospho-p38表达水平；基质胶塞实验测定DHM对体内血管形成的影响；通过皮下肿瘤细胞注射法建立MKN28裸鼠异种移植瘤模型，观察DHM给药对体内胃癌生长的影响，Ki-67增殖指数及CD34、VEGFA在移植瘤组织中的表达通过免疫组织化学法测定。结果：（0.5~2.5 μmol/L）的DHM对HUVEC和MKN28细胞生长无明显抑制作用，该浓度范围的DHM呈浓度依赖性地抑制HUVEC侵袭和小管形成，VEGFA（20 μg/L）可明显逆转DHM对HUVEC侵袭和小管形成的抑制效果；DHM处理可导致MKN28细胞中VEGFA和phospho-ERK表达呈剂量依赖性下降，而对p-p38和p-JNK的表达无明显影响；DHM处理可导致HUVEC中phospho-VEGFR2表达呈剂量依赖性下降；低剂量（30 mg/kg）DHM对裸鼠无明显的不良反应，但可抑制体内血管形成，同时有效延缓体内胃癌生长，体内肿瘤组织中的CD34和VEGFA的表达受到DHM的显著下调作用，但低剂量DHM对Ki-67无明显作用。结论：低剂量的DHM可有效抑制体内外血管生成和体内胃癌生长，该作用至少部分是通过ERK/VEGFA/VEGFR2信号通路来实现的。