体内体外联合免疫法制备抗鼻咽癌单克隆抗体

【目的】获得高特异性的抗鼻咽癌单克隆抗体。【方法】以湖南鼻咽癌细胞株ＨＮＥ２细胞作免疫原，经体内体外联合免疫方法获得免疫脾细胞，并与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得抗鼻咽癌单克隆抗体的录交瘤细胞系，用ＥＬＩＳＡ、免疫组化筛选阳性克隆。【结果】获得１０株稳定分泌抗鼻咽癌单克隆抗体的杂交瘤，其中ＨＮＬ１和ＨＮＬ５用免疫组化检测对鼻回癌组织反应的阳性率分别为６０。０％和６５。０％。【结论】抗鼻回癌单克隆抗体     

抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析

目的 :对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析。方法 :采用细胞ELISA ,免疫组化 ,DNA序列测定和计算机分析方法 ,对 5个单克隆噬菌体抗体 (CH2 73,CH2 0 5 ,CH2 0 9,CHA12 ,CH72 3)进行初步鉴定和序列分析。结果 :5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应 ,也与人正常肝细胞有弱阳性反应 ,但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应。细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性。大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应 ,而不与正常大肠组织反应。测序结果为CH2 73ScFv全长 732bp ;V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker V1 13 JL2 ,GenBank序号为AY0 2 8777和AY0 2 8996 ;CH2 0 5全长 36 6bp ,V ,D ,J分别VH1 4 6 D6 13 JH3,GenBank序号为AF35 936 5 ;CH2 0 9,CHA12和CH72 3的ScFv基因完全相同 ,全长 72 3bp ,其VH DH JH与CH2 73ScFv基因中的VH DH JH 完全一致 ,V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker L2 Jκ2 ,GenBank序号为AF36 3774。结论 :噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性 ,为进一步开发临床应用人源抗肿瘤抗体和小分子抗体片段奠定基础     

抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析

目的：对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析。方法：采用细胞ELISA，免疫组化，DNA序列测定和计算机分析方法，对5个单克隆噬菌体抗体（CH273，CH205，CH209，CHA12，CH723）进行初步鉴定和序列分析。结果：5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应，也与人正常肝细胞有弱阳性反应，但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应。细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性。大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应，而不与正常大肠组织反应。测序结果为CH273 ScFv全长732bp；V，D，J分别属于VH3－30－D1－26－JH3－linker-V1-13-JL2,GenBank序号为AY028777和AY028996；CH205全长366bp,V,D,J分别VH1－46－D6－13－JH3，GenBank序号为AF359365；CH209，CHA12和CH723的ScFv基因完全相同，全长723bp，其VH－DH－JH与CH273 ScFv基因中的VH－DH－JH完全一致，V，D，J分别属于VH3－30－D1－26－JH3－linker-L2-Jκ2，GenBank序号为AF363774。结论：噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性，为进一步开发临床应用人源抗肿瘤抗体和小分子抗体片段奠定基础。     

BASIC STUDY AND PHASE I CLINIC TRIAL OF ANTI-IDIOTYPIC ANTIBODY MIMICKING NASOPHARYNGEAL CARCINOMA CELL ANTIGEN

Becauseofthespecialroleofanti-idiotypic(anti-id)antibodies(Abs)inimmunenetwork,itspotentialroleintumorimmunotherapyandimmunopreventionhasdrawnwideinterest.Anti-idAbsmimickingcoIorectalcarcinoma-associatedantigenandhumanhighmolecularweightmelanoma-associatedantigen(HMW-MAA)havebeenpreparedandtriedforactiveimmunotherapyontumorpatients.l-6Buttherehasn'tbeenanyrepoftaboutanti-idAbofnasopharyngealcarcinoma(NPC).NPCisatumorwithhighepidemicincidenceinChinaandSoutheastAsia,therehasn'tbeenmuchst…     

鼻咽癌抗独特型疫苗的制备及临床研究

目的：制备具有内影像特征的抗独特型抗体,用于鼻咽癌病人的主动免疫治疗以探讨其抗肿瘤效应。方法：用杂交瘤技术制备针对Ａｂ１可变区的抗独特型单抗（Ａｂ２）,免疫同系动物诱导产生免疫应答并用氢氧化铝凝胶沉淀法制成抗独物型疫苗,对１９例晚期鼻咽癌放疗病人作主动免疫治疗,９例放疗加生理盐水注射为对照组,用ＥＬＩＳＡ检测治疗前后病人血清抗体和细胞因子水平。用原位Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测外周血单个核细胞（ＰＢＭ     

107. 体外致敏鼻咽癌患者B细胞构建抗独特型噬菌体抗体库

根据Jerne免疫网络理论,抗独持型抗体（Ab2β）在三维空间能够模拟Ab1所识别的抗原结构,可以替代肿瘤抗原作为抗肿瘤疫苗,激发机体体液免疫和细胞免疫应答。抗独特型抗体的这种分子模拟功能在肿瘤免疫治疗领域已展示出诱人的前景。但因杂交瘤技术制备的单克隆抗独特型抗体为鼠源性抗体,临床应用受到极大的限制。为解决这一难题,本实验采用体外致敏法结合噬菌体呈现技术构建鼻咽癌抗独特型噬菌体抗体库。以本室制备的抗鼻咽癌单抗FC2（Ab1）为免疫原,体外致敏并用EBV转化10例鼻咽癌患者PBMC,经Sandwich ELISA检测其中8例有Ab2产生。抽提致敏、转化的鼻咽癌患者B细胞的总RNA,用cDNA合成试剂盒反转录为cDNA,经多次PCR扩增出5种VH（γ、μ)和9种VL（κ、λ）基因,经简并组成15种ScFv基因,在体外与载体fuse5连接,电导入大肠杆菌MC1061,经四环素抗性筛选,得到库容为1．1×107的初级噬菌体抗体库。随机挑取20个菌落检查噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为70％。这不仅为进一步用抗鼻咽癌单抗亲和筛选具有内影像特点的抗独特型单链抗体（Ab2βScFv）奠定了基础,而且说明外致敏法结合噬菌体抗体库技术制备人源化Ab2βScFv的策略是完全可行的。     

B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌主动免疫

目的：研究Ｂ７基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌ＣＴＬ的活化。方法：采用电击法将Ｂ７基因导入小鼠大肠癌细胞ＣＭＴ９３,Ｇ４１８筛选阳性克隆,免疫组化显示Ｂ７分子有高效表达,Ｂ７,ＣＭＴ９３（ＣＭＴ９３－Ｂ７）接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠背部皮下,其致瘤性显著下降,ＣＭＴ９３－Ｂ７致敏的小鼠对野生型瘤细胞具有免疫保护作用;用ＣＭＴ９３和ＣＭＴ９３－Ｂ７细胞分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞     

Monoclonal anti-idiotype antibody bearing the internal image of nasopharyngeal carcinoma associated antigen

目的　制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法　用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果　选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论　抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库

目的构建全人源化的噬菌体抗体库。方法采用EBV转化技术,ELISA技术,PCR技术,噬菌体表面呈现技术。结果EBV转化8例大肠癌患者PBMC,其中七例有抗大肠癌抗体产生,多次PCR扩增出5种VH(γ,μ)和9种VL(к,λ)基因,经简并组合成15种ScFv基因。在体外与表达载体fUSE5连接,电导入大肠杆菌MC1061,经四环素 抗性筛选,得到库容为1.1×107的初级噬菌体抗体库。全长ScFv基因的插入率为70％。结论应用EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术,制备全人源化的抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。     

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的 探讨抗独特抗体２Ｈ４和５Ｄ３模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法 用Ａｂ２免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠获得抗血清,以ＥＬＩＳＡ检测其Ａｂ３,Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和淋巴细胞增殖试验,检测Ａｂ２诱发细胞免疫反应的能力。结果 ２Ｈ４,５Ｄ３免疫同系动物产生的含有抗抗蚀特型抗体（Ａｂ３）的抗血清,可特异性地与靶细胞结合。ＦＣ２（Ａｂｌ）和经２Ｈ４免疫的Ａｂ