107. 体外致敏鼻咽癌患者B细胞构建抗独特型噬菌体抗体库

根据Jerne免疫网络理论，抗独持型抗体（Ab2β）在三维空间能够模拟Ab1所识别的抗原结构，可以替代肿瘤抗原作为抗肿瘤疫苗，激发机体体液免疫和细胞免疫应答。抗独特型抗体的这种分子模拟功能在肿瘤免疫治疗领域已展示出诱人的前景。但因杂交瘤技术制备的单克隆抗独特型抗体为鼠源性抗体，临床应用受到极大的限制。为解决这一难题，本实验采用体外致敏法结合噬菌体呈现技术构建鼻咽癌抗独特型噬菌体抗体库。以本室制备的抗鼻咽癌单抗FC2（Ab1）为免疫原，体外致敏并用EBV转化10例鼻咽癌患者PBMC，经Sandwich ELISA检测其中8例有Ab2产生。抽提致敏、转化的鼻咽癌患者B细胞的总RNA，用cDNA合成试剂盒反转录为cDNA，经多次PCR扩增出5种VH（γ、μ)和9种VL（κ、λ）基因，经简并组成15种ScFv基因，在体外与载体fuse5连接，电导入大肠杆菌MC1061，经四环素抗性筛选，得到库容为1．1×107的初级噬菌体抗体库。随机挑取20个菌落检查噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为70％。这不仅为进一步用抗鼻咽癌单抗亲和筛选具有内影像特点的抗独特型单链抗体（Ab2βScFv）奠定了基础，而且说明外致敏法结合噬菌体抗体库技术制备人源化Ab2βScFv的策略是完全可行的。