CAAP1抑制肝癌HepG2细胞凋亡而促进其增殖、迁移和侵袭

目的：探讨CAAP1对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法：构建CAAP1过表达载体 pcDNA3/CAAP1 和敲降载体 pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1,转染肝癌 HepG2 细胞后,qPCR 和 WB 实验分别检测 CAAP1 mRNA和蛋白的表达水平。实验分为过表达对照组（pcDNA3）、过表达组（pcDNA3/CAAP1）、敲降对照组（pSilencer 2.1-U6 neo,pSilencer）和敲降组（pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1,shR-CAAP1）,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,WB 检测 cleaved caspase 3蛋白表达水平,CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况,克隆形成实验检测各组细胞的集落形成能力,划痕和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。检索TCGA数据库,分析CAAP1对肝癌患者OS的影响。结果：成功构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体shR-CAAP1,转染后pcDNA3/CAAP1组和shR-CAAP1组细胞中CAAP1mRNA及蛋白表达水平均明显增高或降低（均P<0.05）。与pcDNA3组比较,pcDNA3/CAAP1组细胞凋亡率下降32%、cleaved caspase 3蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）;与pSilencer组比较,shR-CAAP1 组细胞凋亡率上升 73%,cleaved caspase 3 蛋白表达水平显著升高（均P<0.05）。pcDNA3/CAAP1组细胞增殖显著增强（P<0.05）,shR-CAAP1组细胞增殖显著降低（P<0.05）。pcDNA3/CAAP1组细胞迁移数增加48%、细胞迁移距离增加59%、细胞侵袭数增加52%（均P<0.05）,shR-CAAP1组细胞迁移数减少53%、细胞迁移距离减少29%、细胞侵袭数减少45%（均P<0.05）。TCGA数据库数据分析显示,肝癌组织中CAAP1的高表达与肝癌患者OS呈负相关（P<0.05）。结论：CAAP1能够抑制肝癌HepG2细胞凋亡从而促进其增殖、迁移和侵袭,其可能与肝癌的发生发展密切相关。     

CAAP1对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响

  目的  探讨Caspase活性和凋亡抑制因子1（CAAP1）对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响。  方法  构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1（shR-CAAP1）,并进行鉴定。SMMC-7721分为4组:pcDNA3/CAAP1组、pcDNA3对照组、shR-CAAP1组和pSilencer对照组。SMMC-7721培养后,将CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1（pcDNA3/CAAP1组）和敲降载体shR-CAAP1（shR-CAAP1组）以及它们的对照（pcDNA3对照组、pSilencer对照组）分别转染到SMMC-7721中,48 h后进行后续实验。实时定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞中CAAP1 mRNA的表达水平,Western blot检测CAAP1、cleaved Caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8实验检测各组细胞的增殖,细胞集落形成实验比较各组细胞集落形成能力;划痕实验比较各组细胞运动能力,Transwell小室检测各组细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡。纳入TCGA数据库CAAP1低表达的患者75例、CAAP1高表达的患者295例随访48个月的数据,Kaplan-Meier生存曲线比较不同CAAP1表达水平对肝癌患者总生存（OS）的影响。  结果  双酶切鉴定表明CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体shR-CAAP1构建成功;qRT-PCR和Western blot结果提示pcDNA3/CAAP1能够使SMMC-7721细胞中CAAP1 mRNA和蛋白表达水平增加（与pcDNA3对照组相比,P<0.05）,而shR-CAAP1使CAAP1 mRNA和蛋白表达水平降低（与pSilencer对照组相比,P<0.05）。与pcDNA3对照组比较,pcDNA3/CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力增加,而细胞的凋亡受到抑制（均P<0.05）;与pSilencer对照组相比较,shR-CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力降低,而细胞凋亡增加（P<0.05）。TCGA数据库分析表明CAAP1低表达时肝癌患者的OS优于CAAP1高表达者。  结论  CAAP1能够促进肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。     

miR-203a-3p 在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对 BxPC-3 细胞增殖、 迁移和侵袭的影响

目的：探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：运用癌症基因组图谱（TCGA） 数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用 TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIANA Tools、miRDB和TargetScan网站预测miR-203a-3p 的靶基因。将miR-203a-3p mimic及NC mimic、miR-203a-3p inhibitor及NC inhibitor转染至BxPC-3细胞,用qPCR法检测胰腺癌 细胞和胰腺正常上皮细胞HPNE中miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a表达水平,以CCK-8法、Transwell小室法和克隆形成实 验分别检测BxPC-3细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力。结果：通过TCGA数据库筛选出18个胰腺癌组织中差异表达的 miRNA,其中miR-203a-3p、miR-192-5p、miR-451a具有物种保守性 ,且其与胰腺癌临床癌症分期、细胞周期和患者生存率相 关（均P<0.05）;生物信息学网站预测显示miR-203a-3p的候选靶基因是PPM1A,PPM1A与多基因存在相互作用。miR-203a-3p、 miR-192-5p和miR-451a在BxPC-3和Aspc-1细胞中均高表达（均P<0.01）。miR-203a-3p mimic组BxPC-3细胞中miR-203a-3p表 达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高（均P<0.01）：miR-203a-3p inhibitor组细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞 增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.01）。结论：miR-203a-3p在胰腺癌组织及细胞中均高表达,其表达与患者生存和临床 分期相关,可调控BxPC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-1-3p抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移并诱导其凋亡

目的 探讨在肝癌细胞SMMC-7721中微小RNA(miR)-1-3 p的表达变化对其增殖、迁移和凋亡的影响及miR-1-3p的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1-3p和CAAP1的相对表达量;SMMC-7721细胞按miR-1-3p过表达载体(miR-1-3p组)、pcDNA3组、miR-1-3p inhib-itor组和NC inhibitor组(对照组)分别转染,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验观察并比较组间克隆形成率,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡及CAAP1蛋白表达,划痕和Transwell实验观察SMMC-7721迁移和侵袭.利用miRDB、TargetScan、miRanda数据库预测miR-1-3 p靶基因,双荧光素酶报告验证miR-1-3和CAAP1靶向性.结果 miR-1-3p在SMMC-7721细胞中的表达明显低于正常肝细胞LO2,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1-3p上调,SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力显著下降,凋亡显著增强,而下调miR-1-3p的表达则作用相反;miR-1-3p和CAAP1具有靶向性;miR-1-3p过表达明显抑制CAAP1表达.结论 miR-1-3p上调可能通过与CAAP1的3'-UTR结合抑制SMMC-7721细胞增殖、侵袭、迁移.