SYUNZ-4诱导U937细胞凋亡及机制研究

目的探讨半合成紫草萘醌化合物SYUNZ-4对U937细胞的诱导凋亡作用及机制。方法锥虫蓝拒染实验和MTT法分析SYUNZ-4对U937细胞的生长抑制作用;DNA电泳、荧光显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果SYUNZ-4抑制U937细胞生长并呈时间和浓度依赖性,48 h的半数抑制浓度(IC50)为3．62μg／ml;经SYUNZ-4处理的U937细胞可见DNA梯形条带、细胞核浓缩和凋亡小体;6μg／ml SYUNZ-4处理U937细胞6,12,24 h,细胞凋亡率分别为(12．2±6．5)％、(25．3±11．4)％和(56．2±6．5)％,对照组凋亡率为(2．1±0．8)％(P<0．05);SYUNZ-4可活化U937细胞中的caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,上调Bax、P21、P27、Fas和FasL的表达,下调Bcl-xL水平,对Bcl-2、BID和P53表达无影响。结论SYUNZ-4在体外可诱导U937细胞凋亡。caspase家族蛋白及其相关信号分子参与了凋亡的调节。     

AKT抑制剂DC885对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的抑制及其机制

目的：探讨2-嘧啶-5-酰胺基噻唑类AKT抑制剂DC885对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的抑制及其机制.方法：AKT激酶活性实验检测DC885在体外对AKT激酶活性的影响;MTT法检测DC885对细胞增殖的影响;细胞划痕实验测定细胞迁移能力;Transwell小室实验测定细胞迁移力和侵袭力;蛋白质印迹检测细胞AKT及其下游底物磷酸化水平、MMP2、MMP9、EMT相关指标的表达.结果：DC885在体外抑制AKT激酶活性,并下调AKT下游底物的磷酸化水平.当使用较低浓度（1.25、2.5、5μmol/L）的DC885作用细胞24h,对鼻咽癌细胞增殖的影响并不显著.与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力受到抑制,差异具有统计学意义（划痕实验（H=15.025,P＜0.01）、Transwell细胞迁移实验（H=14.608,P＜0.01）、Transwell细胞侵袭实验（H=14.980,P＜0.01）.不同浓度DC885抑制MMP2、MMP9的蛋白表达水平并呈浓度依赖性.DC885上调E-cadherin、α-Catenin表达水平,下调Vimentin、Fibronectin表达水平,均呈浓度依赖性.结论：DC885对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力有显著抑制作用,其机制可能与抑制MMP2、MMP9的表达水平、逆转EMT现象有关.     

GC—TEA法检测食品中的挥发性亚硝胺

本文描述了食品中N—亚硝胺的测定方法。用5％KOH作样品预处理,并贮于一4℃冰箱中。样品分析步骤如下:矿物油真空蒸馏,蒸馏液中N—亚硝胺自碱性溶液中用二氯甲烷萃出,用K_D浓缩器蒸发二氯甲烷萃取液至10～15ml,加入1ml正已烷,通高纯氮浓缩至1ml,最后用GC—TEA法测定N—亚硝胺。紫外线(UV)照射法用作样品中N—亚硝胺的进一步确证,该法简单,可靠。在分析过程中N—亚硝胺的人为合成问题被讨论了,提出了几个预防措施。 本法检测限约为0.2ppb(对DMNA),回收率(X±SD)是:NDMA为80.2±3.32％,NDEA为82.9±3.19％,NDPA为90.0±4.27％。     

拓扑替康诱导卵巢癌细胞自噬的实验研究

目的:检测拓扑替康(TPT)对卵巢癌OVCAR3细胞的增殖抑制作用,观察TPT诱导OVCAR3细胞自噬现象,初步探讨其发生的可能机制。方法:采用不同浓度的TPT处理卵巢癌OVCAR3细胞,MTT法测定TPT对OVCAR3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙(AO)染色观察酸性小体(AVO)形成,MDC荧光染色检测自噬囊泡。免疫印迹法检测TPT对OVCAR3细胞LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的影响。结果:TPT对OVCAR3细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的剂量依赖性,IC50为0.057μg/mL。TPT可诱导OVCAR3细胞产生AVO。MDC荧光染色显示,TPT可诱导OVCAR3细胞产生自噬囊泡。采用0.05μg/mL TPT处理OVCAR3细胞24h后,免疫印迹法显示,随着时间的推移LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平表达个逐渐增加,提示TPT诱导的OVCAR3细胞自噬可能与Bec-lin1蛋白有关。结论:TPT对OVCAR3细胞有显著的抑制作用,TPT可以诱导OVCAR3细胞发生自噬,TPT诱导OVCAR3细胞自噬可能与Beclin1蛋白上调有关。     

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白Dl及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段，克隆到pGEM-T easy载体上。测序鉴定后切下相应的片段，连接到表达载体pET-22b( )上，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3)，使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定表达蛋白。【结果】 用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌，Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】 本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体，后两在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白．     

RNA干扰survivin表达对喉癌细胞系Hep-2对紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨运用RNA干扰技术阻断喉癌细胞系Hep-2中survivin基因的表达,并研究survivin基因沉默后Hep-2对紫杉醇敏感性的影响.方法 化学合成21bp目的基因siRNA片段,并将不同浓度的siRNA用脂质体法转染喉癌细胞系Hep-2.用空脂质体和GFP-siRNA作平行对照.通过蛋白印迹法检测survivin表达量的变化,MTT法检测转染后Hep-2细胞对紫杉醇敏感性的变化.结果 2 5nM和5 0nM的siRNA可以有效地阻断了Hep-2细胞survivin蛋白的表达;转染后Hep-2细胞在体外对紫杉醇的敏感性增加.结论 初步阐明survivin在喉癌细胞对紫杉醇敏感性中的作用,为进一步探讨survivin基因与喉癌的关系以及联合治疗研究奠定了基础.     

广东正常人头发中微量元素含量

近年来,人们发现微量元素与人体健康有着密切关系。头发中微量元素含量可反映相当长时间内元素的积累状况,也可反映头发生长期间元素的摄入量和代谢情况,间接地反映机体内的含量。检测头发中的微量元素含量,可以作为衡量元素的环境污染程度,营养情况及对机体危害程度。但是,必需有个正常值才可以衡量元素含量的多寡或正常。为此,本研究测定广东地区正常人头发中12种微量元素的含量,提出了正常人头发中微量元素的正常值。一、材料与方法(一)头发的收集:头发采自广东中部的中山县、西部的四会县及东部的五华县,分别为平原、丘陵及半山区。采集对象为长期生活     

鼻咽癌高低发区健康人血液和头发中的硒

硒是人体必需的一个微量元素,同时它又是一个抑癌剂,因此,研究硒与肿瘤的关系可作为探讨某些肿瘤病因和肿瘤预防的依据。我们曾经报道过鼻咽癌(NPC)病人血液和头发中的硒水平显著地低于健康人,提示机体中硒含量的变化可能与NPC发病有关。为了进一步探讨硒与NPC的关系,我们先后在NPC高发区佛山、肇庆两地区(鼻咽癌平均死亡率分别为9.71,10.42/10万人口)和低发区梅县、汕头两地区(鼻咽癌平均死亡率分别为3.44,4.31/10万人口)采集和分析了94份健康人血样,在高发区四会县(鼻咽癌平均死亡率为15.85/10万人口)和低发区五华县(鼻咽癌平均死亡率为1.67/10万人口)采集和分析了94份健康人发样,发现上述NPC高低发区健     

鼻咽癌高发区四会县与低发区五华县腌菜中的挥发性亚硝胺

用气相色谱—热能分析(GC—TEA)法测定了鼻咽癌高发区四会县与低发区五华县腌菜中的挥发性亚硝胺含量。结果表明,四会县腌菜样品中有88.88％检出亚硝胺,五华县腌菜样品中只有30.55％检出亚硝胺。在这两个县的腌菜样品中,酸芥菜以含甲基乙基亚硝胺(NMEA)较为普遍,其次为二甲基亚硝胺(NDMA),梅菜则以含NDMA较为普遍,其次为二乙基亚硝胺(NDEA)。四会县腌菜样品中总的挥发性亚硝胺含量(13.0±22.2ppb NO)显著地高于五华县(3.9±131ppb NO)。     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin， Bcl-xL， Bad， Bax， Bcl-2， caspase-9， caspase-3， caspase-6， PARP， DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用，其IC₅₀值为0.24 μmol·L^-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中，survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调，Bad和Bax蛋白的表达水平上调，Bcl-2蛋白的表达水平无变化，caspase-9，caspase-3，caspase-6，PARP，DFF45和lamin B被分别裂解，产生相应裂解产物。在HL-60细胞中，caspase-3的活性在1 μmol·L^-1 DMTCCI处理3 h时明显升高，在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。