21.5kD MBP RNAi有效靶点的筛选及验证

目的:构建21.5 kD MBP基因干扰序列21.5 kD MBP-shRNA(21.5 kD MBP short hairpin RNA interference),筛选最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究提供实验材料。方法:将21.5 kD MBP-shRNA阳性真核表达载体和阴性真核表达载体经脂质体介导分别转入人神经胶质瘤细胞株U251中,观察转染24 h后的转染效率;提取各组细胞总RNA,用实时荧光定量PCR技术检测各组21.5 kD MBP基因在mRNA水平的表达差异性。结果:21.5kD MBP-shRNA真核表达重组载体被成功转染入U251细胞,与阴性对照质粒(pGenesil-1-MBP-neg)转染组相比,沉默质粒转染组(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3质粒分别转染)细胞中21.5 kD MBP mRNA表过水平均显著下降(P<0.05),其中pGenesil-1-MBP-3转染组细胞中21.5 kD MBP mRNA表达水平最低。结论:成功筛选出最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究及基因治疗研究奠定了实验基础。     

一种简单稳定的超微量定磷法—改良钼兰—孔雀绿比色法

为了寻找测定组织钙调素含量的非放射性同位素方法,我们对 Peter 等的超微量定磷法的稳定剂和反应体积加以改进,并对其它影响因素进行了探讨。其灵敏度达到50ng,测定范围0.05—1.0ug,4小时内稳定。本方法亦适用于有机磷化合物存在下的无机磷含量测定。     

腹部手术后患者使用中药热疗腹带后的肠电图变化

目的评价"中药热疗腹带"对腹部手术后患者肠功能恢复的疗效.方法用ECEG-2D4型智能胃肠电图仪测定了30例患者使用该热疗腹带前后体表升、横、降结肠和直肠电图.结果1.各检测肠段的电控制波(electrical control activity,ECA)在使用前后出现显著差异.2.各检测肠段的连续电反应活动波(continued electrical response activity),在使用前后出现显著差异,用药后CERA显著增多.3.各肠段的收缩电综合波(contractive electrical complex,CEC)随着使用该腹带时间的延长出现例数逐渐增多.结论"中药热疗腹带"可使腹部手术后患者结肠运动增强,特别是对长时间无向前推进运动的增强,这有助于手术患者肠功能的恢复.     

黄芪总黄酮的改良提取方法

目的:研究黄芪总黄酮(Total Flavonoids of Astragalus,TFA)的分离纯化方法。方法:以分析纯芦丁为标准,在260nm波长处检测黄芪粗提物、乙酸乙酯改良萃取法提取物和聚酰胺静态吸附法提取物的TFA含量。结果与结论:乙酸乙酯改良萃取法提取物中TFA含量高达71.7%,而聚酰胺静态吸附法提取物中TFA含量为28.3%。     

146名血脂正常的成人血清HDL-C VLDL-C及LDL-C测定与分析

对146名血脂正常的成人血清HDL-C、LDL-C及VLDL-C进行了测定。结果显示:HDL-C为56.0±14.2,LDL-C为87.2±25.1,VLDL-C为23.1±7.9 mg/dl,均呈正态分布,有随年龄增长而升高的趋向,除HDL-C女性显著高于男性(P<0.05)外,其余未见性别差异。对国人与欧州人胆固醇在各脂蛋白中分布的比较提示,其分布的差异可能是国人动脉粥样硬化发生明显低于欧州人的重要原因。     

以科学发展观指导改革提高医学教育质量

本文从我国高等医学教育中教学模式单一、人文教育薄弱、学生创新能力不强这几个主要问题入手,分析了二十一世纪高等医学教育的国际化、终身化、知识模块的综合化、社会化和个性化趋势,并对医学目标的要求提出了用科学发展观指导医学教育改革的思想:用先进的教育理念指导改革,立足全面、协调发展;全面正确地把握医学学科的特殊性,培养医学创新人才;引进国际标准,实施医学教育国际化战略;适应现代化要求,加快医学教育信息化步伐;改革人才培养模式,培养社会急需人才;整合社会资源,保障高等医学教育可持续发展以及系统进行医学教学改革等措施。     

黄芪总黄酮对人体正常细胞和肿瘤细胞辐射防护作用的差异性研究

目的 研究黄芪总黄酮(total flayonoids of astragalus,TFA)对60°Co γ射线辐射损伤的人体正常骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)和肝癌细胞HepG-2辐射防护作用的差异性.方法 MTT法检测TFA处理组与单纯照射组hMSCs和HepG-2的细胞活性;HepG-2细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性;流式细胞技术分析细胞凋亡率;Western blot技术分析凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2,Bax的表达.结果 MTT检测结果显示,当给予6 Gy γ射线一次性照射后,TFA预处理组hMSCs细胞活性分别比单纯照射组提高了1.15～1.95倍;经相同浓度TFA预处理的肝癌细胞HepG-2的细胞活性仅为单纯照射组的53%～23%;TFA的给药浓度与细胞存活率(survival rate)之间显现出良好的量效关系.细胞克隆形成实验结果显示:TFA+照射组能够明显抑制HepG-2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组.流式细胞分析表明,经6 Gy γ射线一次性照射6、24和48 h后,TFA预处理组hMSCs的细胞凋亡率分别为23.3%,11.2%和2.9%.单纯照射组hMSCs的细胞凋亡率相应为29.3%,24.9%和13.6%;TFA预处理组肝癌细胞HepG-2的细胞凋亡率分别为11.6%,17.3%和20.1%,单纯照射组HepG-2的细胞凋亡率分别为6.9%、9.3%和15.8%.Western blot分析显示,在肝癌细胞HepG-2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax 的表达量显著高于单纯照射组和对照组(t=11.17～-2.8,-12.35～3.4,P＜0.05);凋亡抑制蛋白Bel-2的表达量,TFA预处理照射组明显低于单纯照射组和对照组(f<6.36～17.61.P<0.05).结论 TFA对人正常骨髓间充质细胞具有明显的放射防护作用,对肝癌细胞不仅没有放射防护作用反而具有凋亡促进作用;TFA对肝癌细胞的促凋亡作用,主要通过上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达与下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,从而大大增强了60 Co γ射线对肝癌细胞的凋亡诱导作用.

Abstract：

Objective To investigate the different radioprotective effects of total flavonoids of Astragalus (TFA) on human normal mesenchymal stem cells(hMSCs) and hepatoma cells injured by 60 Coγ-ray radiation.Methods hMSCs and HepG-2 cells were cultured and randomly divided into TFA-treated and untreated groups.The cells of different groups were irradiated with 60 Co γ-rays at the dose of 6 Gy.MTT method was utilized to detect the survival rates of the hMSCs and HepG-2 cells pretreated or untreated with TFA before irradiation.Cell clone formation test was used to measure the cellular radiosensitivity.The apoptosis rates of different groups were determined by flow cytometer assay.The expression rates of the apoptosis-promoting proteins Fas and Bax and the apoptosis-inhibiting protein Bcl-2 were analyzed by Western blotting.Results MTT showed that the survival rates of hMSCs pretreated by TFA were 1.15-1.95 times higher than that of the pure irradiation group.On the contrary,the survival rates of the TFA pretreated HepG-2 cells were only 0.53-0.23 times that of the pure irradiation group.There was a good dose-effect relationship between the cell survival rate and the TFA concentration.Cell clone formation rate indicated that combined treatment of TFA and radiation inhibited the cell proliferation more effectively than single TFA or pure radiation.Flow cytometry showed that 6,24 and,48 h post-irradiation to 6 Gy,the apoptosis rates of the hMSCs were 23.3% ,11.2% ,and 2.9% ,respectively in the TFA pretreated group and were 29.3% ,24.9% ,and 13.6% in the pure radiation group.However,the apoptosis rates of the HepG-2 cells at 6,24,and 48 h post-irradiation to 6 Gy were 11.6% ,17.3% ,and 20.1% ,respectively in the TFA pretreated group and were 6.9% ,9.3% ,and 15.8% ,respectively in the direct radiation group.Western blotting showed that the expression levels of Fas and Bax proteins in the HepG-2 cells were significantly higher in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.On the contrary,the expression level of the apoptosis inhibiting protein Bcl-2 was significantly lower in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.Conclusions TFA has obvious effects of radiological protection on human hMSCs and has no effects of radiological protection but effects of apoptosis enhancement on hepatoma cells.The promotion of apoptosis of TFA on hepatoma cells is primarily through increasing the expression of apoptotic proteins such as Fas and Bax and reducing the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2.     

黄芪总黄酮对人正常骨髓间充质细胞的抗辐射损伤作用

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus;TFA)对60Coγ射线照射后人正常骨髓间充质干细胞(human mes-enchymal stem cells hMSCs)的辐射防护作用。方法:用MTT法检测直接接受照射的hMSCs及照射前经不同浓度TFA预处理的hM-SCs细胞存活率。利用琼脂糖电泳半定量分析直接照射后hMSCs和照射前TFA预处理的hMSCs的DNA凋亡梯带形成情况。分别于照射后不同时间收集细胞,流式细胞仪定量分析细胞凋亡率。结果:TFA的剂量在0.05～0.20mg/ml范围内与hMSCs的存活率呈良好的剂量-效应关系;照射后62、4、48h,各TFA照射组hMSCs较单纯照射组hMSCs凋亡率均低;琼脂糖电泳结果与流式分析结果相吻合。结论:TFA对人正常骨髓间充质细胞60Coγ射线照射后具有防护作用,其作用在一定范围内与TFA浓度成正比。     

黄芪总黄酮对辐射肝癌细胞的促凋亡作用

目的从细胞和蛋白水平研究黄芪总黄酮（total flavonoids of astragalus,TFA）对辐射肝癌细胞的促凋亡作用。方法以对数生长期的HepG－2肝癌细胞为实验对象,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性;流式细胞技术分析细胞凋亡率;Westernblot技术分析凋亡相关蛋白Fas、Bcl－2、Bax的表达。结果细胞克隆形成实验结果显示,TFA给药照射组能够明显抑制HepG－2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组。流式分析结果也提示,经6Gv1射线一次性照射6、24h和48h后,TFA预处理组肝癌细胞HepG－2的细胞凋亡率分别为（11．6±2．2）％、（17．3±1．5）％和（20．1±2．8）％,单纯照射组HepG－2的细胞凋亡率分别为（6．±2．3）％、（9.3±3．5）％和（15．8±2．1）％。Westernblot分析结果提示,在肝癌细胞HepG－2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax的表达量显著高于单纯照射组和对照组;凋亡抑制蛋白Bcl－2的表达量正好与此相反,TFA预处理照射组Bcl－2的表达量明显低于单纯照射组和对照组。结论TFA对肝癌细胞不仅没有辐射保护作用,而且能够增强辐射对肝癌细胞的毒性作用。     

用盐酸和硝酸作溶剂对发Zn、Cu、Fe、Ca测定的影响

发锌、铜、铁、钙的测定多采用盐酸为测定液。但对某些元素测定时不够稳定。本文比较了同一发样的盐酸溶液和硝酸溶液测定值。显示：测定发样中的锌、钙、硝酸溶液较稳定，而测定发样中的铜、铁、盐酸溶液较稳定。