脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进及对血小板聚集性血栓形成的预防作用研究

目的初步研究脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用与机制,及其对血小板聚集性血栓形成的预防作用,为临床用药提供更有价值的理论支持。方法通过对斑马鱼肠下血管面积、肠下血管出芽数、总RNA浓度和纯度、心脏红细胞染色强度等指标,评价脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用和血小板聚集性血栓形成的预防作用。结果脑脉利颗粒在250和500μg/ml浓度时有显著的血管新生促进作用,且在500μg/ml浓度时能明显上调VEGFR1基因表达(P0.01),在1 000μg/ml浓度时有显著的血栓形成预防作用(P0.01)。结论脑脉利颗粒具有显著的血管新生促进作用,机制可能与上调VEGFR1的表达有关,且对血栓形成有显著的预防作用。     

二十五味肺病丸改善斑马鱼微血管功能障碍及机制的探究

[目的] 观察二十五味肺病丸是否能够改善微血管功能障碍并探究其潜在机制。[方法] 利用花生四烯酸诱导建立斑马鱼血栓模型,检测二十五味肺病丸给药组和对照组斑马鱼心输出量和血流速度;用辛伐他汀诱导建立斑马鱼微血管缺失模型,计算斑马鱼肠下血管面积和斑马鱼体节间血管直径;给予普纳替尼诱发斑马鱼血管内皮损伤模型,观察尾静脉血栓形成情况,以评价二十五味肺病丸对微血管功能的影响。[结果] 与对照组相比,二十五味肺病丸给药组（27.8 mg/L）心输出量显著性增加（0.11 vs 0.19 nL/s,P<0.05）,血流速度显著增加（398 vs 693 μm/s,P<0.001）,肠下血管面积增加（19 335 vs 25 041像素,P<0.05）,微血管再生促进作用增强;同样,给予二十五味肺病丸处理后（83和250 μg/mL）,斑马鱼节间血管直径明显增大（8.7 vs 11.5 vs 11.8像素,P<0.001）,血栓发生率显著下降。[结论] 二十五味肺病丸可以改善微血管功能障碍,其可能是通过改善微血管血流动力学作用、减少血管内皮损伤、促进内皮再生和减少血栓生成实现。     

三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用

目的:采用不同诱导剂建立3种斑马鱼血瘀模型,优选最适宜评价三七活血能力的模型。方法:花生四烯酸(AA),普纳替尼(Ponatinib),异丙肾上腺素(ISO)分别建立斑马鱼血瘀模型,设置正常组、模型组、阳性药组、不同浓度三七水提物冻干粉组,计算心脏红细胞染色强度、心脏凋亡细胞荧光强度,评价三七的抗血栓作用和抗心肌缺氧能力。基于优选的评价三七活血化瘀活性的血瘀模型—AA,ISO诱导的斑马鱼血瘀模型,比对三七水提取物及70%甲醇提取物之间的活性,并采用UHPLC LTQ-Orbitrap MS/MS技术比对其化学成分差异。结果:AA,Ponatinib诱导后斑马鱼心脏红细胞染色强度显著降低(P<0.01),ISO诱导后心脏凋亡细胞荧光强度显著升高(P<0.01),三七水提物冻干粉可以拮抗AA模型的血栓形成(P<0.01)和ISO模型的心肌凋亡(P<0.05),对Ponatinib模型血栓形成无显著改善作用。三七70%甲醇提取物冻干粉可以抑制ISO血瘀模型的心肌凋亡(P<0.01),作用强于三七水提物冻干粉,其成分差别主要在于人参皂苷Re等部分皂苷类以及氨基酸类、炔醇等成分。结论:AA,Ponatinib,ISO均可建立斑马鱼血瘀模型,其中AA和ISO模型可以用于评价三七水提物冻干粉的活血能力。水提和70%甲醇提取三七冻干粉化学成分差异较大,对ISO血瘀模型,70%甲醇提取三七冻干粉抗心肌缺氧能力更强,皂苷、炔醇类成分可能与其活血化瘀功效密切相关。     

安宫牛黄丸防治脑血管疾病作用研究

目的 利用斑马鱼模型评价安宫牛黄丸防治脑血管疾病的药效。方法 辛伐他汀诱导斑马鱼脑出血模型,评价安宫牛黄丸脑出血保护作用;花生四烯酸诱导血栓模型,评价其血栓预防作用;辛伐他汀诱导微血管缺失模型,评价其促血管再生作用;用三氯化铝诱导阿尔茨海默病（AD）模型,评价安宫牛黄丸对AD斑马鱼运动障碍恢复作用和反应能力的改善作用。结果 与模型组比较,27.8、83.3和250 μg/mL安宫牛黄丸脑出血保护率分别为11%、41%和48%,83.3和250.0 μg/mL组脑出血发生率显著降低（P<0.001）;与模型组比较,质量浓度为333和1 000 μg/mL的安宫牛黄丸斑马鱼心脏红细胞染色强度显著增加（P<0.001）,111、333和1 000 μg/mL组的血栓预防率分别为5%、33%和64%;质量浓度为11.1、33.3和100.0 μg/mL的安宫牛黄丸斑马鱼肠下血管面积与模型组比较均显著上升（P<0.001）,其促血管再生率分别为21%、25%和26%;质量浓度为111、333和1 000 μg/mL的安宫牛黄丸组斑马鱼运动速度与模型组比较均显著提高（P<0.05、0.01）,其运动障碍恢复率分别为48%、88%、78%;安宫牛黄丸111、333和1 000 μg/mL反应能力改善率分别为15%、82%、75%,其中333和1 000 μg/mL组与模型组比较差异显著（P<0.05、0.01）。结论 安宫牛黄丸能预防脑出血、预防血栓形成、重建血管微循环,对AD的运动功能障碍和反应能力具有改善作用。     

二十五味珍珠片对斑马鱼微血管功能的影响

目的:探究二十五味珍珠片对斑马鱼微血管功能的改善作用。方法:分别采用花生四烯酸、辛伐他汀、普纳替尼诱导斑马鱼血栓模型,微血管缺失模型以及血管内皮损伤模型。二十五味珍珠片药物干预后,统计斑马鱼心输出量和血流速度,计算斑马鱼肠下血管面积和斑马鱼体节间血管直径,观察尾静脉血栓形成情况,评价二十五味珍珠片对血管内皮的保护作用以及对血栓生成的影响。结果:与模型组比较,二十五味珍珠片27. 8 mg·L~(-1)组心输出量显著性增加(P 0. 05),血流速度显著性增加(P 0. 01);与模型组比较,质量浓度为0. 11,0. 33,1 mg·L~(-1)的二十五味珍珠片干预后,斑马鱼肠下血管面积增加(P 0. 01);血管内皮损伤模型中,与模型组比较,33,100 mg·L~(-1)的二十五味珍珠片干预后,斑马鱼节间血管直径有明显增加(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,质量浓度为100 mg·L~(-1)的二十五味珍珠片干预后,斑马鱼血栓发生率显著降低(P 0. 01)。结论:二十五味珍珠片可以改善微血管功能障碍,其作用机制可能与其减少血管内皮损伤促进其再生,改善微血管血流动力学作用减少血栓生成有关。     

基于代谢组学和抗肿瘤活性的2种源自不同中华大蟾蜍亚种蟾酥的系统比较研究北大核心CSCD

比较中华大蟾蜍指名亚种Bufo gargarizans gargarizans和中华大蟾蜍华西亚种B.gararizans andrewsi所产蟾酥差异,基于斑马鱼模型验证蟾酥市场价值导向的合理性。收集来自江苏、河北、辽宁、吉林、四川凉山等地包括指名亚种蟾酥和华西亚种蟾酥共20批,通过UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS液质联用技术结合主成分分析等比较指名亚种和华西亚种的蟾酥差异。根据VIP>1、FC<0.5或FC>2.0、峰面积占比>1%的限制条件确定了9个质量标志物,分别为华蟾酥毒基、华蟾毒它灵、沙蟾毒精、脂蟾毒配基、海葱苷元A、惹斯蟾蜍精、沙蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯、南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯、脂蟾毒配基-3-辛二酰精氨酸酯;并按《中国药典》采用高效液相色谱法对20批蟾酥进行含量测定,选择蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基3个药典质量控制指标总量差异最大的2批蟾酥(CS7,总量为8.99%;CS9,总量为5.03%)分别进行基于斑马鱼模型的抗肝肿瘤活性评价,二者抑瘤率分别为38.06%、45.29%。证明仅以药典质量控制指标高低作为蟾酥市场流通的价值导向是不合理的。该研究为蟾酥资源的有效利用,蟾酥质量评价体系的合理建立提供了数据支撑。     

斑马鱼脾不统血证模型建立

目的建立斑马鱼脑部与心脏出血两种动物模型,分析是否与临床的脾不统血证具有一致性,并观察健脾益气摄血止血效果,为临床推广应用提供依据。方法实验一:将野生型AB系60尾斑马鱼随机分为正常组和模型组两组,正常组常规饲养,模型组以50μmol/L辛伐他汀处理24 h。实验二:将黑色素等位基因突变型Albino品系斑马鱼分正常组、模型组(常规饲养)、A药物组、B药物组,以血流量、运动速度、出血发生率与出血改善率为观察指标,并分析相关数据。结果 (1)出血发生率:实验一中脑部出血发生率75%。实验二中心脏出血发生率为65%。(2)血流量测定:实验一、二:与正常组比较,模型组血流明显下降(P0.001)。(3)运动速度:实验一:与正常组比较,模型组斑马鱼运动速度明显降低(P0.001)。(4)出血改善率:单纯健脾益气方(A药物)对斑马鱼心脏出血无防治效果;健脾益气摄血方(B药物)能降低斑马鱼心脏出血发生率,提高出血改善率。结论 (1)辛伐他汀诱导的斑马鱼出血模型与脾不统血证临床表现基本一致。(2)健脾摄血方能降低辛伐他汀诱导斑马鱼心脏出血发生率,提高出血改善率。