重组腺病毒鼠CD40L对小鼠淋巴瘤治疗和预防作用的体内研究

目的:探讨重组腺病毒鼠CD40-ligand基因(Adv-mCD40L)对小鼠淋巴瘤的免疫治疗作用及免疫预防作用。方法:构建含有小鼠CD40L基因的重组腺病毒载体,体外转染小鼠B淋巴瘤细胞(A20细胞)。流式细胞术检测A20细胞转染前后表面CD80、CD86、CD40L(CD154)、CD40表达情况。在体内实验中,治疗组首先建立小鼠A20荷瘤模型,分别于肿瘤内多点注射Adv-mCD40L和Adv;预防组小鼠预先分别接种负载A20细胞抗原的Adv-mCD40L和Adv,免疫后再次接种具有活性的A20细胞,均以生理盐水作为对照,观察小鼠成瘤时间及肿瘤生长情况。结果:体外转染mCD40L基因24h内CD154和CD40表达水平改变,48h后A20表达CD80、CD86增强。经Adv-mCD40L免疫后的小鼠成瘤时间较其他组明显延迟。经mCD40L基因治疗的小鼠均可见瘤体生长速度明显受抑,肿瘤大小分别与经Adv及NS治疗的小鼠比较,有显著差异(P<0.05)。结论:转染mCD40L基因可以增强A20表面协同刺激分子的表达,增强A20细胞的免疫原性,激活机体的抗肿瘤免疫,延缓成瘤时间,抑制肿瘤生长。     

多发性骨髓瘤患者骨髓中Treg细胞与预后相关性研究

目的：检测多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）患者及正常人外周血和骨髓Treg细胞水平,评价MM患者骨髓微环境的免疫状态,以及免疫状态与疾病水平的相关性。方法采用流式细胞术检测45例MM患者外周血以及骨髓中Treg细胞水平,15例正常人外周血及骨髓中Treg细胞水平。以CD4^＋CD25high^＋细胞占CD4＋细胞的百分比代表Treg细胞水平。结果 MM患者外周血Treg细胞高于正常人外周血,MM患者骨髓中Treg细胞低于正常人骨髓,MM患者骨髓微环境中Treg细胞降低水平与浆细胞比例无关,而与疾病的预后相关,与β2-MG水平及ISS相关。结论 MM骨髓微环境中肿瘤诱导的免疫系统的改变是MM发病的原因之一,MM患者骨髓中Treg细胞降低比例与预后相关,而与肿瘤负担无关。     

重组鼠CD40配体的Ankara痘病毒疫苗对鼠淋巴瘤的免疫治疗作用的研究

目的研究Ankara痘病毒和mCD40L的重组体TBC-MVA-mCD40L对小鼠淋巴瘤的免疫治疗作用。方法 应用流式细胞术检测经体外或者体内转染mCD40L的A20瘤细胞的表面共刺激分子CD80和CD86的表达。构建了BALB/c小鼠的B细胞淋巴瘤模型并分组接受瘤内注射TBC-MVA-mCD40L联合系统化疗的治疗模式。另外, 应用与A20细胞孵育后的TBC-MVA-mCD40L对鼠进行免疫, 观察其对鼠淋巴瘤的预防作用。通过观察小鼠接种的肿瘤的大小和生长情况来判断治疗效果。结果 转染CD40L后流式检测A20细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达增强。TBC-MVA-mCD40L免疫治疗联合化疗能成功地使肿瘤消退并使荷瘤鼠获得长期生存。TBC-MVA-mCD40L免疫预防接种能使小鼠获得长期的抗肿瘤免疫。结论 对B淋巴瘤细胞的CD40L基因修饰策略能有效增强机体的对抗B细胞淋巴瘤的系统免疫, 为将来B细胞淋巴瘤患者肿瘤内注射TBC-MVA-mCD40的免疫治疗和预防方法提供依据, 为该免疫治疗方法的临床应用奠定基础。     

习惯性流产的免疫疗法与PRA检测的意义

目的 探讨习惯性流产（RSA）免疫疗法的有效性与一组特定的人类白细胞抗体（PRA）产生的关系.方法 采用酶免ELISA方法,对习惯性流产患者,排除其他原因之后,血清中PRA抗体阴性的患者16例,进行皮内注射淋巴细胞治疗,直至患者渡过危险期.结果 在治疗的16例RSA患者中,12 例成功（其PRA均为阳性）,4例失败（其PRA均为阴性）,有效率为75%（27/36）.结论 本文采用的免疫疗法治疗RSA,方法可靠、疗效明显,与国内外的报道一致.同时采用新的方法揭示了PRA在RSA治疗检测中的重要价值.PRA检测阳性的夫妇间人类主要组织相容性减小,胎儿得以免疫保护;PRA反应阴性的夫妇间人类主要组织相容性增加,以致妊娠得不到足够的免疫保护,是导致习惯性流产的一个重要因素,PRA检测可做为RSA临床诊断和免疫疗效的指标.     

中性粒细胞 CD64指数在淋巴瘤患者化疗后合并细菌感染早期诊断中的价值

目的：评价中性粒细胞CD64指数在淋巴瘤患者化疗后合并细菌感染中检测及早期诊断的价值。方法选取106例淋巴瘤患者,根据临床症状、体征和微生物学检测结果分为细菌感染组（51例）和非细菌感染组（55例）,健康对照组30例,应用流式细胞仪检测中性粒细胞表面CD64指数,同时检测血清C反应蛋白和白细胞数（ WBC）。结果化疗后合并细菌感染的淋巴瘤患者组CD64指数显著高于非感染组及健康对照组,差异均具有显著的统计学意义（ P＜0.01）。通过ROC曲线分析,CD64指数对化疗后合并细菌感染的诊断优于CRP和WBC计数。结论 CD64指数可作为淋巴瘤化疗后合并细菌感染的早期诊断、鉴别诊断的指标,指导抗菌药物应用。     

B非霍奇金淋巴瘤患者Thl7、Treg水平及Thl7／Treg失衡的研究

目的比较健康人和淋巴瘤患者外周血中Thl7与Treg的水平，以及良性反应性淋巴结和淋巴瘤患者的淋巴结中Thl7与Treg的水平，探讨淋巴瘤患若是否存在TM7／Treg比例失衡。方法收集50例淋巴瘤患者的外周血及淋巴结，50例健康人外周血及50例良性反应性淋巴结。采用流式细胞术检测CD4、CD25、Foxp3和IL—17的表达，分析淋巴瘤患者与正常人的Thl7、Treg的水平及Thl7／Treg是否存在区别。结果与健康人外周血相比，淋巴瘤患者外周帆Treg增高，差异具有统计学意义，Thl7l和Thl7／Treg比例变化无统计学意义。然而与良性淋巴结相比，淋巴瘤患酱淋巴结内Thl7细胞降低，Thl7／Treg比例降低，Treg细胞增高，差异均具有统计学意义。结论淋巴瘤患者外周血和淋巴结中Treg比例增高，淋巴瘤患者淋巴结中Thl7／Treg比例明显失衡，Thl7／Treg的失衡存淋巴瘤的发生发展中可能起着重要的作用，明确两者之间的关系和免疫调节机制，并加以合理利用，有望为淋巴瘤的免疫治疗开辟新的思路。     

人参皂苷Rg3增强PD-1抑制剂对弥漫大B细胞淋巴瘤免疫治疗作用的体外研究

目的:探讨人参皂苷Rg3联合PD-1抑制剂对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的作用,通过体外实验观察人参皂苷Rg3在增强T细胞对抗淋巴瘤治疗中的作用及其机制。方法:收集DLBCL患者的外周血,提取单个核细胞,体外激活并扩增T细胞,建立T细胞与肿瘤细胞共培养体系,检测联合人参皂苷Rg3能否增强PD-1抑制剂对T细胞增殖、凋亡和细胞因子分泌的影响。结果:DLBCL细胞可抑制T细胞增殖,促进凋亡;联合人参皂苷Rg3能够增强PD-1抑制剂对恢复T细胞增殖,减少凋亡,并增加细胞因子IL-2和IFN-γ分泌的作用。结论:人参皂苷Rg3增强PD-1抑制剂对DLBCL的抗肿瘤作用,其机制为增强T细胞增殖,抑制凋亡,增加细胞因子分泌。