加味香砂六君子汤对胃癌大鼠的实验研究

目的:探究并分析加味香砂六君子汤通过抑制Wnt信号通路对胃癌大鼠桩蛋白(paxillin)、大鼠凋亡相关蛋白(RelA)表达的影响。方法:选取健康成年Wistar大鼠120只,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组60只,对2组大鼠进行胃癌造模处理,对照组大鼠又随机分为未处理组、处理(生理盐水)后8周组、处理(生理盐水)后12周组,每组20只。观察组大鼠又随机分为未处理组、处理(汤药)后8周组、处理(汤药)后12周组,每组20只。观察2组大鼠处理前、处理后8周、处理后12周paxillin、RelA。结果:2组大鼠处理前后体质量差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前体质量比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠体质量有所降低,但观察组大鼠降低程度明显小于对照组(P<0.05);2组大鼠处理前后wnt-1、paxillin、RelA水平差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前wnt-1、paxillin、RelA水平比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平呈降低趋势,但观察组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤能有效通过抑制wnt以降低胃癌大鼠paxillin、RelA的表达。     

c血清型变形链球菌致龋相关基因/DNA片段的批量克隆与高通量筛选

目的筛选含致龋相关基因／DNA片段的阳性克隆，为探究变形链球茵致龋的分子机制奠定基础。方法将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T／A栽体pCR2．1连接，将连接产物转化E．coli TOP0F’感受态细胞，进行蓝白筛选。对96个转化子进行Colony PCR，将PCR产物点样于同一尼龙膜上，分别与地高辛标记的变形链球茵高、低毒力株基因组DNA／AluI酶切产物杂交，高通量筛选阳性克隆。结果随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的茵落，经过Colony PCR，其中有1个转化子的扩增产物为双带，其余均为0．2～2kb之间的单一条带。经过杂交，以与高毒力株基因组有杂交信号，而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆。筛选的阳性率为50％左右，阳性克隆中含有c血清型变形链球茵致龋相关的基因／片段。结论对抑制消减杂交方法获得的变形链球茵高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选，获得了致龋相关的基因／DNA片段。     

祖辈看护与幼儿变形链球菌传播关系的研究

目的 研究中国北京城区1～2岁幼儿与祖辈看护人之间变形链球菌的传播情况,为幼儿龋病预防提供新的思路.方法 在北京海淀区武警幼儿园素子班,根据问卷中有关幼儿看护情况,选取20对1～2岁幼儿及祖辈看护人,幼儿用棉签收集茵斑样本,祖辈看护人取刺激性唾液评估口腔中变形链球菌水平,9名变形链球菌阳性幼儿的母亲也进行了取样.龋齿情况用dft和DFT评估.11对检出变形链球菌的幼儿、祖辈看护人及9名母亲的209株细菌样本经AP-PCR扩增后进行细菌基因型相似性分析.结果 11名检出变形链球菌幼儿,9名与祖辈看护人有相似基因型出现,占感染变形链球菌幼儿的81.8%(9/11),而仅有3名幼儿与母亲有相似基因型出现,占感染变形链球菌幼儿的33.3%(3/9).结论 北京城区由祖辈看护的1～2岁幼儿变形链球菌主要来源是祖辈看护人.     

变形链球菌ComE蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE 融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE 融合蛋白.方法:提取变形链球菌基因组,PCR 扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET28a(+) 表达载体中,并转化入E. Coli BL21(DE3).IPTG 诱导融合蛋白表达,Western blot 鉴定表达产物.进行蛋白表达的可溶性鉴定,并优化诱导时菌液的A600值、IPTG 浓度、诱导时间和温度4 个表达条件.然后用优化的条件大量诱导表达ComE 融合蛋白,采用镍柱和分子筛两步法进行纯化.结果:经PCR、双酶切反应以及测序鉴定,重组质粒中的插入序列为comE基因的全长片段(753 bp),无碱基的突变与读码框架的偏移.Western blot 证实表达产物确为6×His-ComE 融合蛋白,相对分子质量约为33 000.目的蛋白在上清和沉淀中均有表达,且当A600 为0.4 时,加入IPTG 至终浓度0.10 mmol/L,37 ℃诱导4 h后表达量最大.结论:成功构建pET28a(+)-comE 原核表达载体,用优化后的6×His-ComE 融合蛋白在E. Coli BL21(DE3) 中的表达条件,获得纯化的变形链球菌ComE 融合蛋白.     

半定量斑点法测定变形链球菌临床分离株的葡糖基转移酶

本文采用单克隆抗体的半定量斑点法测定44株变形链球菌临床分离株合成葡糖基转移酶(glucosyltransferases,GTFs)的种类与含量。 研究对象是1.5～3岁的12名儿童和他们的母亲,进行配对研究。其中6名儿童为龋活跃性,患奶瓶龋,另6名儿童无龋。收集该12名儿童牙面菌斑,石蜡刺激法收集配对母亲的全唾液。MSB琼脂培养后进行菌株血清型和核糖类型鉴定。选择44株菌作GTFs分析。其中血清型c,e,g菌株分别为27株、9株和8株。     

变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA和pcDNA3/pacP在哺乳动物细胞中的表达

目的:研究变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA 及pcDNA3/pacP在哺乳动物细胞中的转录及表达情况。方法:利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒pcDNA3/pacA 及pcDNA3/pacP分别转染COS-7细胞,1mg*ml-1 G418加压筛选获取稳定转染的COS-7细胞之后,采用RT-PCR法、LSAB法、流式细胞术及Western印迹法,对真核表达质粒中插入基因pac-A和pac-P的转录及表达产物进行检测。结果:真核表达质粒pcDNA3/pacA及pcDNA3/pacP的插入基因在导入哺乳动物细胞后具有转录和翻译活性,表达的蛋白质产物可位于胞内、胞膜及胞外。结论:构建的真核表达质粒pcDNA3/pacA 和pcDNA3/pacP能在哺乳动物细胞中表达插入基因所编码的蛋白质,为进一步的动物实验提供了实验依据。     

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涎腺疾病包括涎腺肿瘤及非肿瘤性涎腺疾病.涎腺主要依靠其分泌液--唾液发挥功能.近些年来,涎腺疾病和唾液的研究方面取得了明显的进展,本文对其中部分进展作一概述.     

福建药食两用果品研究进展

由于得天独厚的自然气候条件,福建素来被称为"水果之乡"。大多数果品不仅酸甜可口,还具有较高的营养价值,对预防疾病,增进健康有着不容忽视的作用;同时,正如中医之精髓所言"药食同源",丽果也是良药。因此,整理介绍福建地区常见的药食两用果品及其食用营养与药用疗效,为其进一步利用提供依据。     

同一口腔中c血清型变形链球菌高、低毒力株的筛选

目的：由同一高龋者口腔中分离出c血清型变形链球菌高致龋毒力的菌株和低致龋毒力的菌株，为变形链球菌的比较基因组研究奠定基础。方法：从4个方面比较24株c血清型变形链球菌临床分离株对唾液包被羟基磷灰石的黏附能力、产酸和耐酸能力以及合成胞外多糖的能力。结果：筛选出位于同一口腔中的高、低毒力株。结论：同一口腔中存在着2株或2株以上致龋能力不同的c血清型变形链球菌。