白藜芦醇苷对人类乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的:研究白藜芦醇苷(polydatin)在体外对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用,进一步探索其潜在的机制。方法:设定空白组及白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L~(-1))组,5-氟尿嘧啶组,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同质量浓度白藜芦醇苷对MCF-7细胞的生长抑制率;应用细胞克隆集落形成实验验证白藜芦醇苷对MCF-7细胞增殖的抑制作用;通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测5-氟尿嘧啶(1.0μg·L~(-1))和白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))对DNA聚合酶δ催化亚基P125(P125),P125编码基因(POLD1),p53基因(p53),细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21 mRNA表达水平的影响;应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))对P125,p53,p21蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L~(-1))在体外对MCF-7细胞具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度依赖性。与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))均能明显抑制细胞集落的形成(P0.05,P0.01)。与空白组比较,5-氟尿嘧啶组和白藜芦醇苷(0.4,1.2 mg·L~(-1))能够显著抑制POLD1 mRNA表达水平,同时显著抑制P125 mRNA和蛋白表达水平,明显升高p53,p21 mRNA和蛋白表达水平(P0.05,P0.01)。与5-氟尿嘧啶组比较,白藜芦醇苷(1.2 mg·L~(-1))对POLD1,P125,p53,p21 mRNA和蛋白表达水平影响均无显著差异。结论:白藜芦醇苷在体外能够显著抑制MCF-7细胞的增殖,其潜在机制可能与提高p53表达水平,抑制POLD1表达,促进p21表达有关。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

辣椒碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：观察辣椒碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法：通过皮下注射MDA-MB-231细胞的方法建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤体积达到约100 mm³,将裸鼠随机分为模型组和辣椒碱低、中、高剂量（5,10,20 mg·kg^-1）组,每组5只。辣椒碱低、中、高剂量（5,10,20 mg·kg^-1）组裸鼠分别腹腔注射相应剂量的辣椒碱,模型组注射等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）溶剂,3 d/次,连续给药8次。每次给药前先检测裸鼠体质重和肿瘤体积,末次给药24 h后处死各组裸鼠,计算肿瘤体积,称肿瘤质量,并计算抑瘤率。应用免疫组化法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱治疗后各组肿瘤组织中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,辣椒碱低、中、高剂量（5,10,20 mg·kg^-1）组裸鼠体质量无明显变化,但肿瘤体积显著缩小（P<0.01）,肿瘤质量显著减小（P<0.01）,抑瘤率显著增大（P<0.01）,且呈剂量依赖性;与模型组比较,辣椒碱低、中、高剂量（5,10,20 mg·kg^-1）组肿瘤组织HMGB1和TLR4蛋白表达明显降低,且呈剂量依赖性。结论：辣椒碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,其机制可能与下调HMGB1和TLR4蛋白表达有关。     

乏氧环境下HO-1诱导表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移的调控作用研究

目的:研究乏氧对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭及迁移能力的影响，并研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)在这一过程中的作用，初步探讨其作用机制。方法:利用RNA干扰技术，抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中HO-1的表达，得到HO-1表达受干扰的细胞系MDA-MB-231-HO-1△。通过Transwell迁移、侵袭实验分别检测常氧及乏氧条件下MDA-MB-231-NC细胞（HO-1正常表达）和MDA-MB-231-HO-1△细胞（HO-1干扰表达）迁移、侵袭能力的变化，Western blot检测乏氧条件下两组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达，检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)。结果:乏氧培养24小时后，MDA-MB-231-NC 细胞中HO-1蛋白表达水平显著升高，MDA-MB-231-HO-1△细胞中HO-1表达受抑制。乏氧培养后MDA-MB-231-NC细胞的侵袭、迁移能力较常氧培养的细胞明显增强，其差异具有统计学意义(P<0.05)；而MDA-MB-231-HO-1△细胞侵袭、迁移能力在乏氧和常氧培养下无显著差异。乏氧条件下，MDA-MB-231-NC细胞的上皮标志物E-cadherin表达显著下调，间质标志物Vimentin表达显著上调，而MDA-MB-231-HO-1△细胞的E-cadherin、Vimentin表达无明显变化。结论:乏氧条件下乳腺癌MDA-MB-231细胞中HO-1可被诱导高表达，促进了细胞的侵袭迁移，其可能机制是促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化。     

中晚期乳腺癌患者密集化疗与常规辅助化疗临床效果分析

目的探讨吡柔比星联合紫杉醇剂量密集辅助治疗尚无内脏转移的中晚期乳腺癌患者的效果及不良反应发生情况。方法选择2005～2007年间我院收治的中晚期乳腺癌患者51例,随机分为吡柔比星联合紫杉醇2周方案组(密集组)及3周方案组(常规组),每组接受4周期化疗。比较2组的不良反应发生情况;随访5年观察患者的生存情况。结果密集组及常规组3年无瘤生存率分别为79.17%、51.85%(P0.05);总生存率分别为87.50%、70.40%(P=0.130);密集组及常规组分5年无瘤生存率分别为54.16%、33.33%(P0.05),总生存率分别为79.20%、48.10%(P0.05)。年龄≥45岁女性乳腺癌患者,无论是接受密集化疗还是接受常规化疗,与年龄45岁的患者比较,总生存率和无瘤生存率均无统计学差异。密集组Ⅰ～Ⅱ度的血小板减少及白细胞降低发生率显著高于常规组(32.5%比11.7%,P0.05)及(71.6%比55.3%,P0.05)。结论吡柔比星联合紫杉醇密集辅助化疗较常规化疗方案能较好地改善患者的远期预后,缩短治疗时间,且不增加不良反应,中老年患者同样可耐受,值得进一步在临床推广。     

新辅助化疗对乳腺癌 ER, PR, Her - 2 和 Ki - 67表达的影响及临床意义

Background: The present study was designed in an attempt to determine the influence of neoadjuvant chemotherapy on estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) , human epidermal growth factor receptor 2 (Her-2) and Ki-67 expression in patients with breast cancer. Method: Pre- and post-neodjuvant chemotherapy, paired-tumor specimens from 103 patients with breast cancer administrated with anthracycline or anthracycline combining taxane regimen were collected. Immunohistochemical staining for ER, PR, Her-2 and Ki67 was performed by the DAKO envision method. Results: Among all the 103 cases, 5 patients (4.9%) had a complete response, 82 (79.6%) partial response (PR), 15 (14.6%) stable disease (SD), and 1 (0.9%) progressive disease (PD), yielding an overall response rate (CR PR) of 84.5%. Nine patients achieve pathological complete response. There is a significant decrease of the average index of Ki-67 post-neoadjuvant chemotherapy, compared with that before chemotherapy (24.1% vs 39.7%, P<0.001). After neoadjuvant chemotherapy, the change of Ki-67 in different subtypes breast cancer were difference (P<0.001), and the changes of Ki-67 was correlated with response to neoadjuvant chemotherapy (P<0.001). No significant changes in Immunohistochemical expression were observed for ER,PR or Her-2. Conclusion: Neoadjuvant chemotherapy apparently reduced Ki-67 index in primary breast carcinomas, but profiles for ER,PR and Her-2 were not significantly different before and after neoadjuvant chemotherapy. The change of Ki-67 was correlated with molecular subtypes, and was correlated with response to neoadjuvant chemotherapy, suggesting that Ki-67 index is a surrogate marker to predict the treatment response of neoadjuvant chemotherapy.     

^125I放射性粒子对乳腺癌细胞内阿霉素浓度影响的实验研究

目的:采用高效液相色谱法检测乳腺癌细胞中阿霉素(ADM)的含量,探讨125I放射性粒子对乳腺癌细胞内化疗药物ADM浓度的影响.方法:分别采用乳腺癌敏感株MCF-7与耐药株MCF-7/ADM两株乳腺癌细胞,再将其分为MCF-7+ADM组,MCF-7+ADM+125I组, MCF-7/ADM+ADM组,MCF-7/ADM+ADM+125I组共4组,采用HPLC法测定细胞中ADM的含量.结果:在所建立的色谱条件下,测得ADM浓度在0.025～0.5 mg/L范围内呈良好线性关系,相关系数为0.999 9.ADM在各组细胞中的浓度分别为MCF-7+ADM组(0.078±0.005)mg/L,MCF-7+ADM+125I组(0.484±0.016)mg/L, MCF-7/ADM+ADM组(0.458±0.023)mg/L,MCF-7/ADM+ADM+125I组(0.091±0.007)mg/L.结论:联合125I照射能提高化疗药物ADM在乳腺癌敏感株细胞中的浓度,而对耐药株细胞则不能明显提高ADM在细胞内的浓度.     

辣椒碱通过下调SIRT1表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,并初步探讨其分子生物学机制。方法：设立辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）组以及空白组,采用穿透小室（Transwell）迁移和侵袭实验分别检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）和DNA聚合酶δ催化亚基p125的编码基因POLD1（POLD1） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125（p125）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后,穿膜细胞数明显减少,迁移率和侵袭率显著降低,且呈浓度依赖效应（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著下调乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1,POLD1 mRNA表达水平（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著降低乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125的蛋白表达水平（P<0.01）。结论：辣椒碱能显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与下调细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平以及POLD1 mRNA和p125的蛋白表达水平有关。     

辣椒碱抗肿瘤作用分子机制的研究进展

恶性肿瘤是世界范围内严重威胁人类健康的重大慢性病,也是21世纪中国乃至全球最严重的公共卫生问题之一,如何有效的控制以至于治愈肿瘤也是当今医学领域中亟待解决的首要问题之一。手术以及放化疗目前仍是其主要治疗方式,其中放化疗带来的副作用不容忽视。因此寻找毒性低,作用强并且对肿瘤细胞具有靶向性的新型抗肿瘤药物具有重要的现实意义。辣椒碱又名辣椒素,是一种从茄科辣椒属植物中分离出来的脂溶性香草酰胺的植物碱,化学结构式为（反式）8-甲基-N-香草基-6-壬烯酰胺（C₁₈H₂₇NO₃）,呈单斜长方形片状无色结晶,它是辣椒中的主要生物活性成分。辣椒碱的药理作用十分广泛,不仅具有抗氧化、预防心血管疾病、保护胃肠黏膜、镇痛、抗炎和止痒等多种功效,而且具有很强的抗肿瘤作用。大量研究证实,辣椒碱在体内和体外均具有显著的抗肿瘤作用,辣椒碱既可通过调控致癌物质的代谢以及致癌物与DNA的相互作用,从而发挥癌症化学预防作用,也可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞周期阻滞、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移、侵袭和转移及抑制肿瘤血管生成、调控肿瘤细胞自噬和介导肿瘤免疫等方式进而发挥抗肿瘤作用。本文通过检索近年来与辣椒碱相关的国内外文献,并对其进行分析、归纳、总结,从辣椒碱抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞周期阻滞、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移、侵袭和转移及抑制肿瘤血管生成、调控肿瘤细胞自噬和介导肿瘤免疫等过程的主要作用分子机制及靶点进行综述,为今后进一步研究及合理开发利用辣椒碱提供科学依据和理论基础。     

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的:观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(FBI-1)mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01),下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。