基于网络药理学中药复方“三药三方”治疗新冠肺炎的分期治疗分析＊

目的 本研究探究中药复方“三药三方”在新冠肺炎治疗发挥药理作用的多成分、多靶点和多通路的分子机理以及复方药味归经的中医联系，探究“三药三方”药理作用的异同。方法 通过ETCM数据库获取“三药三方”的成分、靶点、药味归经，用STRING数据库进行蛋白互作网络构建，用DAVID和Metascape数据库进行靶标功能富集分析，利用Cytoscape软件构建和分析可视化网络图。结果 “三药三方”多重点作用于脾经和肺经，初期和中期复方重点作用于肺经和胃经，重症期复方重点作用于肝经和心经，通用方的温性药比例最大，初期和中期复方寒性药比例最大，“三药三方”药味均以苦味、辛味、甘味为主。共同化合物中Alexandrin（胡萝卜甙）与Nsp（N7-MTase）（非结构蛋白C端鸟嘌呤-N7甲基转移酶），Oleanolic Acid（齐墩果酸）与E protein（ion channel）（包膜小膜蛋白）有良好结合力。复方调控共同之处：包含共同子模块γ-氨基丁酸受体亚基相互作用以及细胞色素、ATP依赖转位酶和核受体的相互作用，参与调控16条生物通路涉及①神经保护作用；②免疫调节以及抗炎症风暴调节；③内分泌调节以及性激素调控；④能量代谢调控；⑤药物代谢；⑥其他通路。不同之处：“三药三方”也存在各自特异调控的通路，金花清感颗粒和莲花清瘟胶囊参与ACE2相关通路Renin-angiotensin system（肾素-血管紧张素系统）的调节，同时6种复方有各自的子模块相互作用蛋白。结论 “三药三方”在治疗新冠病毒体现辨证论治、治病求因、正气存内、已病防变的中医治疗原则，并且通过网络药理学初步揭示“三药三方”功能调控以及异同之处，阐述“三药三方”通过多成分-多靶点-多通路的综合调控之间的异同关系。     

基于数据挖掘和生物信息学探究糖尿病治疗的用药规律及药理机制研究＊

目的 基于多算法挖掘治疗糖尿病的用药规律，并且基于生物信息学探究关键组方治疗糖尿病的药效药理机制，为糖尿病的辨证防治提供指导。方法 基于古今医案云平台V2.3.5通过数据挖掘分析方法研究糖尿病治疗的组方用药规律，同时基于关联规则、聚类分析等算法获得新关键组方，另外基于生物信息学分析关键组方治疗糖尿病的“多成分-多靶点-多通路”的药效药理机制。结果 通过古今医案云平台V2.3.5共筛选出68首中药处方、214味中药及4首新组方，基于网络药理学分析发现黄芪、甘草、五味子、丹参及当归新组方治疗糖尿病基于193种生物活性化合物、30种关键靶点、4151种GO过程以及74条KEGG生物通路，并且基于分子对接发现glycyroside、sitosterol等关键活性成分。结论 本研究初步阐明了糖尿病治疗的方剂用药规律，并基于生物信息学初步揭示了复方用药的药效药理机制，为糖尿病的中医药临床辨证治疗提供数据算法支持以及生物信息学基础。     

基于网络药理学及体外实验探讨柴胡-黄芩-人参治疗流行性感冒的作用机制研究＊

目的 采用网络药理学和体外实验探讨小柴胡汤扶正祛邪的核心配伍“柴胡-黄芩-人参”治疗流行性感冒的作用靶点及信号通路。方法 筛选“柴胡-黄芩-人参”有效成分并对应靶点基因，并检索流感疾病靶点。应用Cytoscape3.6.1软件构建“柴胡-黄芩-人参”-流感-靶点-通路网络，筛选核心靶点基因，进行GO功能和KEGG富集分析。根据网络药理学结果，基于自噬途径以甲型H1N1流感病毒感染的狗肾（MDCK）细胞为研究对象，以柴胡-黄芩-人参和自噬抑制剂3-MA为干预药物，孵育12 h后，用Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及自噬降解底物P62的表达量。结果 预测获得“柴胡-黄芩-人参”治疗流感的靶点102个，其主要活性成分有豆甾醇、β-谷甾醇、二甲氧基黄酮、千层纸甲素A、黄芩新素、荠苎黄酮、汉黄芩素等，其核心基因为AKT1、IL6、VEGFA、TNF、TP53、JUN、CXCL8等54个，涉及生物过程及相关代谢通路多与炎症反应、各种代谢、免疫反应、细胞死亡等相关。根据以上网药预测结果及相关文献，筛选自噬途径进行细胞生物学层面的实验验证，结果显示，甲型H1N1病毒感染组与空白对照组相比，LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。“柴胡-黄芩-人参”颗粒剂与病毒感染组相比，有下调 LC3-Ⅱ蛋白表达的作用（P<0.01），并上调自噬降解底物P62蛋白的表达（P<0.05）。结论 小柴胡汤扶正祛邪的核心配伍“柴胡-黄芩-人参”对流感病毒抑制（如干预病毒吸附）和宿主因素调节（如免疫应答、活性氧调节、细胞死亡、各种代谢等）两方面都发挥着抗流感的作用，尤以调节宿主内环境的稳态（如自噬）为主，并通过体外实验初步验证，“柴胡-黄芩-人参”可能是通过调节AKT抑制甲型H1N1流感病毒诱导的细胞自噬，从而调控甲型H1N1流感病毒的致病作用，这也正与其体现的“扶正祛邪”治法高度吻合。     

桑瓜饮降血糖作用的有效部位筛选

目的观察桑瓜饮对血糖、血脂的调节作用,筛选出其具有降血糖作用的有效部位。方法高脂饮食联合链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型,造模成功的糖尿病大鼠随机分为9组,即B组(模型组)、C组(阳性药物组)、D组(桑瓜饮水煎剂组)、E组(水液部位组)、F组(乙酸乙酯部位组)、G组(正丁醇部位组)、H组(乙酸乙酯部位+正丁醇部位组)、I组(乙酸乙酯部位+水液部位组)、J组(正丁醇部位+水液部位组),正常组记为A组,灌胃给药,每日1次,给药42d。末次给药后,检测并比较桑瓜饮水煎剂及其各部位对2型糖尿病大鼠血糖、血脂指标的调节作用。结果造模后给药前,与A组相比,各组大鼠的空腹血糖(FBG)显著升高(P0.01),差异具有统计学意义;B组和各给药组之间无显著性差异(P0.05)。给药42d后,与B组相比,C、D、E、J组的FBG显著降低(P0.05或P0.01),FBG下降百分比分别为96.75%、17.48%、24.10%、66.90%;与C组相比,除J组外,其余给药组FBG均与C组在显著性差异(P0.01)。血脂检测指标方面,与B组相比,C、G、H、J组均有降低甘油三酯(TG)的作用(P0.05或P0.01),TG含量分别下降88.10%、49.06%、51.92%、88.10%;C、D、H、J组有降低总胆固醇(TC)的作用(P0.05或P0.01),其含量分别下降17.90%、12.22%、12.64%、17.44%;升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量的分别是D组和J组(P0.05),HDL-C含量分别升高30.15%和37.10%;桑瓜饮各给药部位均有降低低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平的作用(P0.05或P0.01);与C组比较,J组TC、TG、LDL-C均与之无显著性差异,但其HDL-C含量比C组升高13.33%。结论桑瓜饮对2型糖尿病大鼠的血糖血脂均有调节作用,其有效部位可能主要是正丁醇部位+水液部位。